Иммуноферментный анализ антибиотиков и принципы его использования для лекарственного мониторинга и контроля продуктов питания

• Автор: Колосова, Анна Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 125 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. Общая характеристика антибиотиков хлорамфеникола и гентамицина

1.1. Хлорамфеникол

1.2. Гентамидин

ГЛАВА 2. Методы иммунохимического анализа гентамицина

2.1. Радиоиммунологический анализ гентамицина

2.2. Флуороиммуноанализ гентамицина

2.3. Иммуноферментный и другие методы иммуноанализа гентамицина ГЛАВА 3. Методы определения хлорамфеникола в различных биологических объектах

3.1. Методы анализа хлорамфеникола в продуктах питания

3.1.1. Физикохимические методы анализа хлорамфеникола

3.1.2. Иммунохимический анализ хлорамфеникола
3.1.2.1. Получение и свойства специфических антител
3.1.2.2. Иммунохимические методы определения остаточных количеств хлорамфеникола в продуктах питания
3.2. Методы анализа хлорамфеникола в сыворотке крови человека
ГЛАВА 4. Материалы и методы
4.1. Материалы и оборудование
4.2. Методы исследования
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 5. Влияние структуры иммунореагентов и схем проведения анализа на характеристики ИФА хлорамфеникола
5.1. Получение и изучение свойств иммунореагентов конъюгатов хлорамфеникола с белками и поликлональных антисывороток
5.2 Влияние структуры и состава иммунореагентов на основные характеристики твердофазного ИФА хлорамфеникола
5.3. Сравнительное изучение трех схем проведения твердофазного иммуноферментного анализа хлорамфеникола
5.4. Определение среднечисловой константы диссоциации комплексов хлорамфеникола с поликлональными антителами методом твердофазного иммуноферментного анализа
ГЛАВА 6. Разработка и оптимизация твердофазного иммуноферментного анализа хлорамфеникола в сыворотке крови человека
6.1. Изучение сорбционного поведения антигена на полистироловой поверхности оптимизация метода ИФА хлорамфеникола
6.2. Твердофазный ИФА хлорамфеникола в сыворотке крови человека
ГЛАВА 7. Твердофазный иммуноферментный анализ хлорамфеникола в продуктах питания животного происхождения
7.1. Влияние компонентов образца на иммуноферментный анализ хлорамфеникола в молоке
7.2. Применение метода ИФА для определения хлорамфеникола в мясе и яйцах
7.3. Корреляция результатов определения хлорамфеникола в молоке методами ИФА и ВЭЖХ
ГЛАВА 8. Разработка и оптимизация твердофазного иммуноферментного анализа гентамицина в сыворотке крови человека
8.1. Получение и свойства реагентов для ИФА гентамицина
8.2. Оптимизация условий проведения иммуноферментного анализа гентамицина
8.3. Твердофазный ИФА гентамицина в сыворотке крови человека
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Однако, при химическом синтезе получается рацемический препарат, то есть соединение, содержащее трео и треоформы ХАФ. Рацемический препарат, синтезированный советскими учеными, получил название синтомицина. При соответствующих методах рацемический продукт ХАФ удается разделить на трео и треоизомеры. ХАФ получил название левомицетина. Ьэритроизомер Рис. ХАФ может инактивироваться под действием ферментов гидролаз, как образуемых продуцентами этого антибиотика, так и отдельными видами бактерий. Под действием гидролаз образуется нитрофенилсеринол, лишенный антимикробных свойств 1. Нитрофенилсеринол дезацилированный ХАФ, а также глюкуронид ХАФ рис. Таким образом, по химическому строению ХАФ принадлежит к группе ароматических антибиотиков, по спектру биологического действия к противобактериальным антибиотикам широкого спектра действия, а по механизму биологического действия ХАФ относится к антибиотикам, подавляющим синтез белка. Рис. Метаболиты хлорамфеникола. РНК, антибиотик может прервать ее связь с рибосомой втретьих, возможно образование комплекса антибиотикрибосома, что также неблагоприятно влияет на функцию рибосом. Один из наиболее возможных путей подавления белкового синтеза под действием ХАФ образование ассоциации антибиотика с рибосомами. Эта взаимосвязь может нарушаться, если в среде есть некоторые антибиотики эритромицин, стрептограмин. Под действием ХАФ немедленно прекращается синтез белка микроорганизмов, синтез нуклеиновых кислот и пептидогликана при этом продолжается, хотя идет с меньшей скоростью. Все это указывает на то, что первичная мишень действия ХАФ синтез белка. Нуклеиновые кислоты, синтезированные в присутствии антибиотика, отличаются от кислот, синтезированных при его отсутствии. Показано, что под влиянием антибиотика нарушается нормальный синтез РНК, в то время как синтез ДНК непосредственно не тормозится им. Есть указания, что ХАФ тормозит некоторые звенья энергетического обмена. Аэробные реакции энергетического обмена подавляются антибиотиком в большей степени, чем анаэробные. ХАФ избирательно подавляет рост многих видов бактерий, но в тех же концентрациях не оказывает заметного действия на развитие дрожжей, грибов, простейших и клеток животных. Устойчивость этих организмов может быть объяснена, с одной стороны, способностью их мембран не пропускать антибиотик, с другой отличием путей биосинтеза белка у бактерий 1. ХАФ имеет широкий спектр биологического действия, что позволило активно применять его в медицинской практике как средство лечения брюшного тифа и паратифов, дизентерии, менингита, бруцеллеза, трахомы и других заболеваний. ХАФ очень хорош при внутриглазной инфекции, поскольку другие антибиотики проникают в ткани глаза плохо особенно пенициллины, цефалоспорины и аминогликозиды. ХАФ применяют либо в виде основания, либо в виде эфира со стеариновой за рубежом с пальмитиновой кислотой или в виде сукцината эфира янтарной кислоты. Интересны химически модифицированные производные ХАФ. Так, в е годы в Институте химии природных соединений АН СССР впервые в мире М. Н. Колосовым было получено производное ХАФ тиамфеникол. У этого антибиотика нитрогруппа бензольного кольца замещена на сульфометильную группу ССНз. В настоящее время во многих странах мира вместо ХАФ в медицинской практике используют тиамфеникол, не вызывающий осложнений, свойственных ХАФ апластическая анемия, см. К сожалению, в нашей стране тиамфеникол до сих пор не производится. Представляет большой интерес фторированный аналог тиамфеникола, который устойчив к хлорамфениколацетилтрансферазе ферменту, инактивирующему ХАФ в клетках устойчивых к нему бактерий 1. При приеме через рот ХАФ хорошо всасывается и поступает в кровь и тканевые жидкости. Максимальная концентрация антибиотика в плазме крови возникает через часа. Однако, активность гидролаз поджелудочной железы у разных людей неодинакова, поэтому и скорость, и полнота как гидролиза, так и всасывания антибиотика имеют большие индивидуальные различия. Максимальная концентрация в плазме крови у одних людей возникает уже через минут, а у других лишь через 6 часов.