Разработка иммуносенсоров для анализа гербицидов триазинового ряда и производных мочевины

• Автор: Плеханова, Юлия Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 133 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДШИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Устройство и классификация иммуноссисоров.

1.1. Принципы и виды иммуноаналнза.

1.2. Устройство иммуносенсоров

1.3. Классификация иммуносенсоров.

Глава 2. Электрохимические иммуносенсоры

2.1. Полевые транзисторы как преобразователи иммуносенсоров.

2.1.1.Устройство полевого транзистора.

2.1.2. Схемы измерения сигналов.

2.1.3. Иммуносенсоры на основе нолевых транзисторов.
2.2. Амперомстрические преобразователи иммуноссисоров.
2.2.1. Устройство и функционирование амперометрических сенсоров.
2.2.2. Иммуносенсоры па основе электродов, полученных трафаретной печатью
Заключение по обзору литерагуры.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
Глава 3. Материалы и методы исследования
3.1. Реагенты.
3.2. Преобразователи сигналов .
3.2.1. рНчувствительный нолевой транзистор.
3.2.2. Электроды, полученные трафаретной печатью
3.2.3. Анализатор для проведения поляризационного флуороиммуноанализа
3.3. Методы.
3.3.1.Определение химической чувствительности полевого т ранзистора.
3.3.2. Оценка диффузионной проницаемост и мембран.
3.3.3. Иммобилизация ферментов на мембрану
3.3.4. Оценка активности ферментов с помощью нолевого транзистора.
3.3.5. Оценка активности ферментов с помощью оптической регистрации.
3.3.6. Иммуноанализ с полиэлектролитиым разделением реагентов и детекцией сигнала при помощи полевого транзистора.
3.3.7. Безразделительпый иммуиоаиализ с помощью электродов, полученных трафаретной печатью.
3.3.8. Поляризационный флуороиммуиоапализ.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 4
4.1. Электрохимический иммуносенсор на основе полиэлектролитных взаимодействий для определения гербицидов
4.1.1. Сравнительная оценка ферментов, типов мембран и субстратов, применяемых в иммуноанализе с помощью рНчувствительного полевою транзистора.
4.1.2. Характеристика электрохимического иммуносенсора на основе
полиэлектролитных взаимодействий для определения симазина и атразина.
4.2. Иммуносенсор для безразделитсльного анализа хлорсульфурона.
4.2.1. Оценка чувствительности системы к пероксиду водорода
4.2.3. Определение активности глкжозооксидазы с помощью электродов, полученных трафаретной печатью.
4.2.4. Анализ мембран доя иммобилизации антител
4.2.5. Оценка специфичности связывания конъюгатов хлорсульфурон глюкозоксидаза и выбор концентрации антител
4.2.6. Характернсгика безразделительного анализа хлорсульфурона
4.3. Поляризационный флюороиммуноанализ изопротурона
4.3.1. Синтез маркера и выбор сыворотки для анализа
4.3.2. Характеристики поляризационного флуороиммуноаналнза изопротурона.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА


Константа равновесия или сродства этой реакции определяется как К АтАгАт Аг. При фиксированной концентрации антитела, равновесное отношение концентраций связанного и свободного антигена количественно связано с общей концентрацией исследуемого вещества. Это соотношение лежит в основе любого иммуноанализа Тернер и др. В настоящее время существует большое количество разнообразных методик пммуноанализа и, соответственно, способов их классификации. В монографии Коллинз, указаны основные факторы, которые принимаются во внимание при оценке возможностей Классические методы иммунохимичсского анализа основаны на образовании антителами в присутствии антигена преципитата осадка. Однако для визуальной регистрации этого процесса необходимы высокие концентрации компонентов и длительное время проведения реакции. Результаты такого анализа не всегда можно интерпретировать однозначно и в большинстве случаев они носят качественный или полу количественны и характер. Кроме того, для многих одновалентных антигенов гантенов. Индикация образовавшегося комплекса антиген антитело в растворе может быть осуществлена, если в один из исходных компонентов реакционной системы ввести метку, которая легко детектируется соответствующим высокочувствительным физикохимическим методом Егоров и др. В качестве метки для антитела или антигена можно использовать различные метящие агенты, такие как радионуклиды, ферменты, эритроциты, флуоресцентные и хемилюминссцснтные зонды или металлы. От гипа метки зависит нашание анализа радноиммунологичсский, флуоресцентный, иммунокофакторный. Использование меток дало возможность увеличить чувствительность иммунохимичсских методов в миллионы раз, а время анализа уменьшить до нескольких часов. Методы иммуиоанализа находятся в постоянном развитии. Расширяется число объектов исследования, углубляются и совершенствуются методы самого анализа. Это приводит к тому, что упрощается схема анализа, сокращается время его проведения, уменьшается расход реагентов. На ранних этапах развития иммуиоанализа предпочтение отдавалось жидкофазным методикам, в которых связавшиеся Ат осаждали например, с помощью вторичных Ат или несвязавшийся Аг удаляли адсорбцией с помощью активированного угля, покрытого декстраном твердофазный реагент. В настоящее время наиболее распространены твердофазные методики, поскольку они позволяют существенно упростить проведение анализа и уменьшить фоновый сигнал. В таких методах молекулы рецептора Аг или Ат иммобилизуют на твердой поверхности и затем регистрируют результат формирования комплекса АтАг. Это дало развитие биосеисорике, где рецепторы также иммобилизуют на твердой поверхности поверхность преобразователя, и формирование комплекса можно измерить. Кроме того, появляется возможность непрерывного и полностью автоматического i viv и i vi мониторинга метаболитов, лекарственных препаратов и белков для клинической диагностики. Также миниатюрность и простота таких устройств позволяет производить анализы окружающей среды в полевых условиях без привлечения дорогостоящего и сложного оборудования и высококвалифицированного персонала, а клинические анализы на дому. Устройство иммупосснсоров. Иммуносенсоры являются классом биосенсоров, в которых роль биоспецифического компонента играет антигеи или антитело. Общая схема устройства и функционирования иммуносснсорной системы представлена на рис. i . Рис. Схематическое устройство иммуносенсора Применение антител в качестве рецепторного материала обеспечивае Крайне важен также тот факт, что иммуносенсорные системы могут быть разработаны с использованием стандартных подходов для определения веществ и объектов, имеющих самую различную химическую природу и характеризующихся разнообразными физиологическими эффектами. К тому же молекулярный дизайн иммуногена, скрининг получаемых антител и сайтнанравленный мутагенез предоставляют широкие возможности для увеличения чувствительности и экспрсссности анализа, а также предотвращения перекрестных взаимодействий со струк 1 урными аналогами определяемого соединения.