Разработка компонентов набора для определения уровня антител к вирусу ринопневмонии лошадей методом иммуноферментного анализа

• Автор: Коржов, Василий Васильевич
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Шелково
• Количество страниц: 140 с. : ил.

Идеальным условием получения моноспецифических антисывороток представляется иммунизация продуцентов чистыми антигенами. Ключевым моментом в отработке твердофазного непрямого ИФА является получение . Качество получаемого коньюгата находится в прямой зависимости от серологической активности иммуноглобулина, активности фермента и условий связывания этих компонентов. Быстрый и точный диагноз инфекционной ринопиевмонии лошадей является решающим условием организации необходимых мер борьбы с этим заболеванием. Перечисленные выше обстоятельства явились основополагающими в создании иммуноферментной тест системы для определения уровня антител к вирусу РПЛ, что позволит решить проблему массового эпизоотологического обследования поголовья лошадей. Цели и задачи исследования. В связи с вышеизложенным, целью настоящей работы являлась разработка тестсистемы на основе концентрированных и аффинноочищенных антигенов вируса РПЛ, штамм СВ, при использовании их в качестве компонента набора для постановки серологических реакций и иммуноферментного анализа при определении уровня антител к вирусу РПЛ в сыворотке крови лошадей. Разработать метод получения очищенного и концентрированного вируса РПЛ, штамм СВ, репродуцированного в культуре клеток ПТ и изучить его биологические свойства. Выделить поверхностные антигены вируса РПЛ, изучить их состав в электрофорезе и активность в иммуноблотинге и получить на их основе иммуносорбент на ВгСЫ ссфарозс. Выделить лошади, получить антиО лошади антисыворотки на кроликах, выделить антикв лошади антитела и синтезировать антив лошади иммунопсроксидазный коньюгат. Выделить на полученном сорбенте специфические к антигенам вируса РПЛ антитела и иммобилизовать их в качестве лиганда на ВгСЫ сефарозу. Разработать тест систему для определения уровня антител к вирусу РПЛ на основе аффинноочищенных антигенов вируса РПЛ методом иммуноферментного анализа. Провести сравнительную оценку определения уровня антиРПЛ антител в серологических реакциях , РТГА и разработанной иммуноферментной тест системе. Научная новизна. Разработан метод получения очищенных и концентрированных поверхностных антигенов вируса РПЛ, репродуцированного в культуре клеток ПТ, с помощью препаративной аффинной хромотографии на антиРПЛ ВгСЬ Сефарозе. Выявлено структурных гликопротеинов вируса РПЛ, штамм СВ с молекулярной массой от до 0 кД, которые отщепляются Тритоном X0. Разработана тестсистема для определения уровня антител к вирусу РПЛ методом иммуноферментного анализа на основе аффинно очищенных антигенов вируса РПЛ, штамма СВ. Практическая значимость работы. Результаты проведенных исследований позволили разработать инструкцию по изготовлению и проект нормативнотехнической документации на Тестсистему для определения уровня антител к вирусу ринопневмонии лошадей методом иммуноферментного анализа. Набор предназначается для индикации и количественного определения антиРПЛ антител в сыворотках крови лошадей. Внедрение в практику ветеринарии иммуноферментной тест системы для определения уровня антител к вирусу РПЛ позволит решить проблему массового эпизоотологичсского обследования поголовья лошадей, на территории РФ так и на территориях других стран, составляющего основу мероприятий по предотвращению, ликвидации и предупреждении распространения инфекционной ринопневмонии лошадей. Внедрение в практику Тестсистемы для определения уровня антител к вирусу РПЛ в иммуноферментном анализе позволит проводить диагностику РПЛ в племенных и пользовательских хозяйствах ипподромов, заводов, частных конеферм и др. РПЛ, что будет способствовать оздоровлению хозяйств, обеспечению эпизоотологического благополучия, повышению сохранности молодняка и продуктивности поголовья. Общая характеристика семейства герпесвирусов. Представители семейства vii на основе их биологических свойств разделены на три подсемейства vii, vii, vii , , 5, 4. Современная классификация герпесвирусов животных представлена в таблице 1 Международным комитетом токсонометрии вирусов за год Ii i x Vi . Таблица 1. Классификация герпесвирусов животных.