Продуктивные и биологические особенности свиней с интегрированным в геном чужеродным геном релизинг-фактора соматотропного гормона

• Автор: Чабан, Иван Михайлович
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Дубровицы, Московской обл.
• Количество страниц: 141 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Генноинженерные технологии новый путь развития жи

вотноводства

1.2. Методы получения трансгенных животных

1.3. Общая характеристика гормона роста

1.4. Разведение трансгенных животных

1.4.1. Особенности фенотипа свиней, трансгенных по гену

тМИБСЮ

1.4.2. Использование ПЦР для определения присутствия

рекомбинантной генной конструкции в геноме трансгенных животных
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1 Методика, схема и техника проведения первого опыта
2.2. Методика, техника проведения балансового и респирацион
ного опытов
2.3. Методика и техника проведения контрольного убоя, оценка
качества мясного сырья
2.4. Методика, схема и техника проведения второго опыта
2.5. Методика проведения исследований по изучению активно
сти генов рРНК у свиней после иммунизации
2.6. Методики лабораторных исследований
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Первы й опыт
3.1.1. Особенности роста трансгенных животных
3.1.2. Переваримость питательных веществ рационов, обмен азота
и энергии
3.1.3. Биохимические исследования крови
3.1.4. Мясная продуктивность и качество туш трансгенных и кон
трольных свиней
Выход и морфологический состав отрубов туш свиней
Физикохимические характеристики и химический состав мышечной ткани свиней
Жирнокислотный состав свиного жира
Результаты гистологического исследования
Второй опыт
Особенности роста трансгенных животных Биохимические исследования крови
Мясная продуктивность и качество туш трансгенных и контрольных свиней
Физикохимические характеристики и химический состав мышечной ткани свиней
Исследования реологических свойств мяса
Жирнокислотиый состав свиного жира
Результаты гистологического исследования
Изучение активности генов рРНК у свиней после иммунизации
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Под переносом генов понимают передачу рекомбинированных генных конструкций животному. Если эта генная конструкция встраивается в геном животного, данный ген называется трансгеном. Белок, который кодируется трансгеном, является трансгенным продуктом. Животные, несущие трансген, являются трансгенными животными. Если они передают трансген своему потомству, возникает трансгенная линия и популяция. Конечной целью является признак, на который оказывает воздействие трансгенный продукт. Гордон и Рудл выделили 3х мышей, которые соответствовали по своим характеристикам трансгенным, то есть 1 приобретали сайты рестрикции на инъецированной ДНК, что проявлялось при ее выделении из генома хозяина 2 для них было характерно, что инъецированная ДНК при ее выделении из генома хозяина отличалась по мобильности от участков плазмиды по данным электрофореза в агарозном геле с использованием нерасщеплениой ДНК 3 они обладали способностью передавать этот участок с зародышевыми клетками . Впервые трансгенные свиньи были получены в г. . Однако эффективность этого процесса была низкой. Для получения трансгенных поросят потребовалось инъецированных яйцеклеток. В работе была использована комбинация промотора МТ в соединении со структурным геном гормона роста человека. Число вставок генов колебалось от 1 до 0 . Технологии получения трансгенных животных разрабатывают на основе того или иного способа переноса чужеродной ДНК. В настоящее время используются несколько подходов в получении трансгенных животных . Наиболее широко распространен метод микроинъекций чужеродной ДНК в пронуклеусы зигот. Преимущество данного метода заключается в том, что можно интродуцировать в геном зародыша любые, даже очень крупные фрагменты ДНК. При этом интеграция чужеродных генов наступает на самых ранних этапах эмбриогенеза, следовательно, возрастает вероятность их попадания в половые клетки с последующей передачей потомству 7, ,, 1, 2. Микроинъекция рекомбинантной ДНК более эффективна на стадии пронуклеусов 3. фазе первого клеточного цикла , что соответствует ранней стадии образования пронуклеусов из яйцеклеток. Проведение микроинъекции на более поздних стадиях снижает частоту интеграции трансгена, а также повышает процент рождения мозаичных особей . Интересные результаты были получены на лабораторных и сельскохозяйственных животных при интродукции в геном гена гормона роста и релизингфактора гормона роста. Рост некоторых животных значительно увеличивался , , 0, 6, в других экспериментах наблюдали резкое угнетение роста, когда животные весили в несколько раз меньше нормы , . Экспрессия трансгенов в организме определяется в первую очередь сохранностью структуры, числом встроенных копий и местом интеграции в геноме хозяина. Выбор генной конструкции оказывает влияние как на частот интеграции введенной ДНК, так и на выживаемость эмбрионов. Анализ работ, проводившихся с целью получения трансгенных овец при использовании разных генных конструкций, показывает, что выход трансгенных особей от числа рожденного потомства после трансплантации микроинъецированных зигот существенно варьирует от 1,3 до ,2. Остается до конца еще невыясненным вопрос о том, насколько пренатальная гибель эмбрионов связана с нерегулируемой экспрессией интегрированного гена, которая может нарушать их нормальное развитие 1, , . Другой подход в получении трансгенных животных заключается в инфицировании ранних эмбрионов млекопитающих рекомбинантными ретровирусами. Недостатком этого метода является получение трансгенных животных с мультисайтовой интеграцией трансгена и его нестабильной наследуемостью в поколениях , , . Еще одним подходом в получении трансгенных животных является использование трансформированных чужеродной ДНК, эмбриональных стволовых клеток, путем инъекции последних в полость бластоцисты , , . Основным преимуществом данного метода является возможность проводить направленный мутагенез на уровне целого организма, при помощи гомологичной рекомбинации чужеродной ДНК с геномной ДНК , , 0, 2.