Оптимизация диагностики вируса кустистой карликовости малины методом RT-PCR

• Автор: Немцова, Елена Валентиновна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Брянск
• Количество страниц: 163 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Вирусные болезни малины.

1.2 Способы передачи ВККМ и других вирусов..

1.3 Симптомы поражения ВККМ растений рода ЯиЬш.

1.4 Проблемы распространения ВККМ в посадках малины

1.5 Круг растений, поражаемых ВККМ.

1.6 Систематическое положение ВККМ и свойства вирусных частиц

1.7 Характеристика изолятов ВККМ.

1.8 Эффективность методов оздоровления малины от ВККМ и других вирусных болезней
1.9 Методы диагностики ВККМ и других вирусов.
1. Создание сортов малины, устойчивых к ВККМ.
ГЛАВА 2 МЕТОДИКА И УСЛОВИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1 Характеристика объекта исследований
2.2 Выделение РНК из растений малины.
2.2.1 Выделение тотальной РНК из растительного материала методом экстракции гуанидинизотиоцтюматом
2.2.2 Выделение тотальной РНК из растительного материала
феиолхлороформенным методом с применением для экстракции БЭБ
2.2.3 Выделение тотальной РНК из растительного материала методом экстракции горячим фенолом.
2.2.4 Выделение тотальной РНК из растительного материала
фенолтриизопропилнафталинсульфонатным методом.
2.3 Расчет концентрации РНК и определение качества полученных
препаратов
2.4 Разработка методики диагностики ВККМ с помощью
2.4.1 Обратная транскрипция
2.4.2 Полимеразная цепная реакция.
2.5 Конструирование вектора, содержащего фрагмент ВККМ
ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Оптимизация методов выделения РНК из тканей малины.
3.2 Диагностика вируса кустистой карликовости малины в тканях малины методом .
3.2.1 Характеристика праймеров, используемых для диагностики ВККМ методом
3.2.2 Положительные и отрицательные контроли при проведении
3.2.3 Влияние концентрации РНК малины для обратной транскрипции
на протекание
3.2.4 Влияние методов выделения РНК на эффективность диагностики
ВККМ в тканях малины методом
3.3 Скрининг ВККМ методом в полевых растениях, сеянцах и пробирочных растениях малины, размножаемой в культуре i vi
3.3.1 Анализ ВККМ в цветущих растениях и сеянцах некоторых форм малины в полевых условиях.
3.3.2 Диагностика ВККМ в растениях ремонтантной малины на разных стадиях годового цикла развития
3.3.3 Анализ ВККМ в растениях ремонтантной малины, размножаемых
в культуре i vi
3.4 Анализ нуклеотидной последовательности изолята ВККМ,
распространенного в посадках малины
ГЛАВА 4 ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Они являются одной из главных причин снижения урожайности, которая при комплексной инфекции вирусами часто может снижаться на Борзых, , , i, , в. Вирусы вызывают замедление роста штамба, снижение прироста боковых побегов, приживаемость, а также адаптивную способность к другим патогенам и неблагоприятным кл им этическим факторам. Инфицированные растения сильнее страдают от стрессовых воздействий внешней среды и легче поражаются возбудителями грибковых и бактериальных заболеваний v, , . Мамина сильно подвержена вирусным заболеваниям. Во всем мире описано около вирусных и несколько подобных вирусным болезней малины, которые в разной степени сказываются на ее росте и плодоношении , Борзых, , Приходько, , а, i, , . Полные и сокращенные названия наиболее распространенных вирусов, поражающих растения рода , их способы передачи отображены в приложении таблицы 1, 2. Приблизительно половина из этих вирусных болезней имеет экономическое значение, поскольку они вызывают значительное снижение урожайности и вегетативной продуктивности. i, , , а i, 6, и др. Хорошо изучена распространенность вирусных болезней малины в Европе и Северной Америке , i, , i, i, , I, . В Великобритании на плантациях малины наиболее часто встречаются вирусов. Большинство из них передаются почвенными нематодами i, Xii и ii i, несколько вирусов передаются тлй ii и один посредством инфицированной пыльцы вирус кустистой карликовости малины , а, 6. В Европе посадкам малины особый вред причиняют вирус мозаики листьев малины и вирус пятнистости листьев малины, в Северной Америке переносимые тлей вирус некроза черной малины и вирус желтой сетчатости малины , а, . В европейской части РФ видовой состав и распространенность вирусов малины исследованы недостаточно широко. В последние лет массовый скрининг вирусных заболеваний в посадках практически не проводится как правило, проверяются и выбраковываются лишь единичные растения. В годы в России был изучен ряд заболеваний малины и других ягодных культур израстание, курчавость, мозаика, возбудителями многих из которых являются вирусы. Было выявлено, что хлорозы, приводящие к снижению урожайности малины до , являются следствием инфекции ВПЛМ, ВХЖМ и других вирусов Приходько, Келдыш, . Также изучена встречаемость вирусов малины, вызывающих мозаичную болезнь ВПЛМ, ВМЛМ, ВЖСМ, ВНЧМ Помазков, , Грушечкин, Кузнецова, . В период с х по е гг. , ВЖПЗ, ВХЖМ, ВЖСМ, ВНЧМ, ВОМ Помазков, , Келдыш, Томилин, Приходько, , . В гг. РФ, в результате чего выявлено вируса, из которых восемь передаются тлями, семь нематодами, два с пыльцой и семь не имеют известных переносчиков Приходько, . В селекционных посадках малины Кокинского опорного пункта ВСТИСП в гг. ИФА выявлены несколько НЕПОвирусов , ВЛКПЗ, ВЧКтом, ВКПМ встречаемость , , 6 и соответственно Приходько, . Ни одно из этих исследований не включало скрининг вируса кустистой карликовости малины, данные о распространении различных штаммов которого на территории России отсутствуют. В естественных условиях вирусы передаются от растения к растению при вегетативном и семенном размножении, с пыльцой, но чаще всего питающимися на них переносчиками нематодами, тлями, клещами, грибами. Природными резервуарами вирусов плодовых культур могут быть дикорастущие плодовые растения. Среди ягодных культур родов , i, i вирусы в основном переносятся животными, поражающими растенияхозяева тлями Лтv ii, i ii, нематодами i и Xii, клещами ii и др. Например, вирус, вызывающий болезнь махровости черной смородины, переносится галловым клещом род ii , 6 вирус латентной кольцевой пятнистости земляники нематодами рода Xii , 6 и т. Для вирусов, которые поражают непосредственно малину, существуют три главных способа передачи нематодами, тлями и с пыльцой.