Использование культур клеток органов поросенка в производстве ветеринарных биопрепаратов и получении трансгенных свиней

• Автор: Самуйленко, Светлана Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Щелково
• Количество страниц: 108 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Использовоание клеток и тканей в производстве

ветеринарных биопрепаратов

1.2. олучение трансгенных свиней

1.3. Оценка реактогенности, токсичности и безвредности масляных

адъювантов и их компонентов

1.4. Технологические линии для культивирования клеток и вирусов

при производстве биопрепаратов

1.5. Заключение по обзору литературы 3

2. СОБСТВЕ1II1ЫЕ ИССЛЕДОВАЛ1ИЯ
2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Способ оценки токсичности масляных адъювантов и их компонентов, используемых при разработке и производстве биопрепаратов с помощью культуры клеток СП в пробирке
с монослоем
2.2.1 Л. Клеточная культура
2.2.1.1.1. Подготовительные операции
2.2.1.2. Культивирование первичных клеток С
2.2.1.2.1. Приготовление питательных сред
2.2.1.2.1.1. Основной раствор
2.2.1.2.1.2. Разведенные растворы
2.2.1.2.2. Приготовление масляных адъювантов
2.2.1.3. Культивирование первичных клеток СГ
2.2.2. Изучение токсичности масляного адъюванта и его компонентов на культуре клеток СП в пробирках
с монослоем
2.2.3. Сравнительное изучение показателей токсичности масляных адъювантов и их компонентов, используемых в производстве биопрепаратов, на культуре клеток СП в пробирках с монослоем
2.2.4. Суспензионное культивирование клеток сперматогоний свиней
2.2.4.1. Теоретическое обоснование
2.2.4.2. Периоды сперматогенеза
2.2.4.3. Регуляция сперматогенеза
2.2.4.4. Суспензионное культивирование
2.2.4.5. Первый период суспензионного культивирования клеток семенника поросенка
2.2.4.6. Второй период суспензионного культивирования сперматогоний
2.2.4.7. Третий период суспензионного культивирования сперматоцитов
2.2.4.8. Четвертый период суспензионного культивирования сперматидов
2.2.4.9. Основные выводы 2.2.4Оптимизация культивирования клеток ткани
семенника поросенка по основным физикохимическим и биофизическим параметрам
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
4. ВЫВОДЫ
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖИ 1ИЯ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
7. ПРИЛОЖЕНИЯ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Значительный прогресс в области вирусологии, инфекционной патологии и иммунологии был достигнут за последнюю четверть века во многом благодаря гибридомной технологии 7, . Особенно выдающиеся открытия сделаны в области молекулярной биологии, когда была открыта молекулярная структура генома организма. На этой базе быстрыми темпами возникли отрасли молекулярной генетики, клеточной и генной инженерии 8. В области биотехнологии представляется весьма интересным использовать сперматозоиды в качестве переносчика рекомбинантной ДНК для получения трансгенных животных , 2, 3, 4, 5, что является мощным рычагом селекции XXI века 2, 3, 4. Проведение исследований по изучению токсичности масляных адъювантов и их компонентов в производстве биопрепаратов и получении траисгенных животных с помощью культур клеток органов свиньи представляет не только практический, но и огромный научный интерес. Цель и задачи исследовании. Целью настоящих исследований является изучение возможности использования культур клеток и тканей органов поросенка при производстве биопрепаратов и получении трансгенных свиней. Научная новизна. Впервые разработан способ определения токсичности масляною адъюванта и его компонентов, применяемых при производстве биопрепаратов, с использованием культуры клеток свиной почки в монослос в пробирках. На способ подана заявка на Патент от октября г. Впервые для получения трансгенных свиней предложен способ суспензионного культивирования в биореакторе культур клеток семенника поросенка с использованием питательных сред, которые на каждом этапе культивирования имели все более сложный состав, обогащенных фетальной сывороткой и сывороткой от взрослых животных, обогащенных энергетическими, гормональными и ферментативными компонентами, при поддержании основных физикохимических параметров на оптимальном для каждого этапа уровне. Заявка на патент . Ш0Иот Л г. Практическая значимость работы. Разработан способ определения токсичности масляного адъюванта, масла, эмульгаторов, используемых в производстве биопрепаратов, с использованием культур клеток свиной почки в монослое в пробирках. Разработан способ но проведению исследований с использованием полимеразной цепной реакции. Разработан способ суспензионного культивирования культур клеток семенника поросенка, инфицированных ретровирусными генными конструкциями и , с целыо получения трансгенных свиней. Апробация работы. Материалы диссертации и ее отдельные разделы доклады ват ись на заседаниях Ученого Совета Всероссийского научноисследовательского и технологического института биологической промышленности, на Международной конференции, посвященной летию Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Федеральном государственном унитарном предприятии Ставропольская биофабрика, Ставрополь, на II Международной научной конференции Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии во Всероссийском научноисследовательском институте сельскохозяйственной биотехнологии, Москва, . По теме диссертации опубликовано печатных работ, в т. Патент. На защиту выносятся исследования по изучению токсичности масляных адъювантов и их компонентов, применяемых в производстве биопрепаратов, на лабораторных животных и с помощью разработанного нового способа с использованием культур клеток свиной почки в монослое и нового направления в получении трансгенных свиней с помощью суспензионного культивирования в биореакторе культур клеток семенника поросенка с использованием питательных сред, которые на каждом этапе культивирования имели все более сложный состав, обогащенных фетальной сывороткой и сывороткой от взрослых животных, обогащенных энергетическими, гормональными и ферментативными компонентами при поддержании основных физикохимических параметров на оптимальном для каждого этапа уровне. Диссертация изложена на 8 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы и приложения. Диссертация иллюстрирована таблицами и рисунками, в т. Список литературы содержит 5 источников, в т.