РНК из пекарских дрожжей: выделение, фракционирование, биологическая активность

• Автор: Ямковая, Татьяна Витальевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 127 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Структура и функции дрожжевой РНК .

1.2. Выделение РНК из пекарских дрожжей

1.3. Гидролиз дрожжевой РНК .

1.4. Использование мономеров дрожжевой РНК для

синтеза лекарственных препаратов

1.4.1. Аденозин .

1.4.2. Инозин

1.4.3. Гуанозин
1.4.4. Цитидин.
1.4.5. Уридин
1.5. Биологическая активность дрожжевой РНК.
1.5.1. Иммуномодуляция
1.5.2. Стимуляция метаболизма .
1.5.3. Детоксикация .
1.5.4. Стимуляция репарации, роста и размножения клеток
1.5.5. Токсичность
1.6. Клиническое применение дрожжевой РНК
1.7. Биологическая активность и клиническое применение высокополимерной дрожжевой РНК.
1.8. Резюме
Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ .
2.1. Экспериментальные животные
2.2. Материалы
2.3. Аналитические методы .
2.4. Препаративные методы .
2.4.1. Выделение суммарной РНК из пекарских дрожжей
2.4.2. Выделение высокополимерной РНК из пекарских дрожжей вариант 1
2.4.3. Выделение высоко и низкополимерной РНК из пекарских дрожжей вариант 2
Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Выделение суммарной РНК из пекарских дрожжей .
3.2. Выделение фракций РНК различной степени полимерности из пекарских дрожжей
3.3. Иммобилизация и некоторые свойства иммобилизованных ферментов нуклеинового обмена из ядов змей .
3.4. Биологическая активность РНК из пекарских дрожжей.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Исследовать возможность замены высокоскоростного центрифугирования на простое отстаивание. РНК иммобилизованными ферментами нуклеинового обмена из ядов змей. Провести оценку биологической активности суммарной и высокополимерной дрожжевой РНК в экспериментах i viv. Научная новизна полученных результатов. РНК из лизата. На основе этих исследований предложены три новых способа выделения высокополимерной РНК из дрожжей. Лизис биомассы проводили разработанным нами методом 2,5ным раствором ДЦС при 0С в течение мин. Впервые при выделении высокополимерной РНК вместо центрифугирования в качестве основного приема фракционирования лизатов предложено использовать отстаивание, которое можно проводить как на холоду 04С, так и при комнатной температуре. Р отстаивания можно рейдировать изменением состава дисперсионной среды. Впервые для высаливания высокополимерной РНК из осветленного лизата был применен 3 М . Из оставшейся фракции выделена низкополимерная РНК осаждением соляной кислотой. Разработан принципиально новый метод дробного осаждения РНК этанолом, с помощью которого из суммарной РНК выделена высокополимерная и тРНКподобная фракции. КРФ. Фосфодиэстеразы из ядов кобры и гюрзы иммобилизованы на активированной сефарозе 4В с выходом . Исследована биологическая активность трех препаратов РНК из пекарских дрожжей суммарной РНК и высокополимерной РНК с разными распределениями по молекулярным массам. Впервые показано, что препараты Рг 1К различной степени полимерности и чистоты действуют на разные органы и ткани крыс, стимулируя избирательно в них биосинтез белка. Научнопрактическое значение работы. Проведенные исследования позволяют значительно упростить технологию выделения и фракционирования дрожжевой РНК. Особенно это касается нового метода дробного осаждения РНК этанолом и нового способа выделения двух фракций РНК высоко и низкополимерной путем простого отстаивания. Замена центрифугирования на быстрое отстаивание при комнатной температуре позволяет не только упростить технологический процесс, но и снизить затраты на электроэнергию и оборудование. РНК различной степени полимерности и чистоты на разные органы и ткани лабораторных животных после дальнейшего исследования может послужить основой для создания новых лекарственных средств. Эффективный лизис клеток пекарских дрожжей достигается при обработке 2. Выделение высокополимерной РНК из лизата пекарских дрожжей может быть осуществлено в течение 4 сут методом седиментации при 1 и комнатной температуре. Суммарная и высокополимерная дрожжевая РНК могут быть осаждены из осветленного лизата пекарских дрожжей 3 М С1. Дробное осаждение ным этанолом позволяет осуществлять фракционирование суммарной РНК пекарских дрожжей по молекулярной массе. Иммобилизация фосфолиэстераз из ядов кобры и гюрзы на С1 Вгактивированной сефарозе 4В может быть осуществлена с выходом по активности . Препараты дрожжевой РНК различной степени полимерности и чистоты действуют на разные органы и ткани крыс. Высокополимерная РНК с молекулярным распределением 00 нуклеотидов избирательно стимулирует биосинтез белка в клетках красного костного мозга. Апробация результатов исследования. Союза биотехнологов России Пущино, . По теме диссертации имеется 7 печатных работ. Пекарские дрожжи vii являются простейшими одноклеточными эукариотическими организмами, т. Генетическая информация, заключенная в ядерной ДНК дрожжей реализуется в структуре белков при посредстве РНК. Согласно современным представлениям, эукариотическая РНК представляет собой смесь полирибонуклеогидов разных молекулярных масс и включает в себя мРНК, тРНК, рРНК Страйер Л. Сингер М. Берг П. iiv . V., v V. I., i . ., а i . ., Григорьева Э. В., Рыкова В. И., Рыкова В. И. и др. РНК матричная РНК пекарских дрожжей одноцепочечный линейный нерегулярный гетерополирибонуклеотид со степенью полимерности от 0 до нуклеотидов. Составляет 15 всей клеточной РНК i . ., iv . ., . Переносит информацию для синтеза белка от ДНК к рибосомам.