Новые методы иммобилизации клеток животных в композитные гидрогели

• Автор: Вихров, Александр Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 111 с. : ил.

1. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ

2. МЕТОДЫ ИММОБИЛИЗАЦИИ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ обзор литературы

2.1. Введение.

2.2. Культивирование клеток животных на микроносителях.

2.3. Основные требования к полимерным носителям и методам их получения.

2.4. Методы включения клеток животных в полимерные гидрогели.

2.4.1. Методы иммобилизации в гидрогели на основе синтетических полимеров.

2.4.2. Методы иммобилизации в гидрогели на основе природных материалов.

2.4.3. Влияние внутренней сгруктуры гидрогелей на иммобилизованные клетки.

2.5. Микроинкапсулирование клеток животных.

2.6. Иммобилизация клеток животных в макропористые гидрогели.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Введение
3.2. Методы получения гранул композитных гидрогелей.
3.2.1. Изучение механической прочности композитных гранул.
3.2.2. Исследование структуры композитных гранул.
3.3. Методы иммобилизации гибридом в композитные гидрогели.
3.3.1. Оптимизация процесса иммобилизации гибридом.
3.3.2. Оптимизация композитных гранул для иммобилизации гибридом.
3.4. Культивирование иммобилизованных гибридом.
3.4 1. Культивирование иммобилизованных г ибридом на средах,
содержащих сыворотку. 6
3.4.2. Культивирование иммобилизованных гибридом на бессывороточных средах.
3.5. Длительное хранение клеток животных в иммобилизованном
состоянии.
4. МАТЕРИАЛЛЫ И МЕТОДЫ
5. ВЫВОДЫ
6. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
БАВ Биологически активные вешесгва
ПВК нолиЫвинилкапролактам
П полиМвинилпнрролидон
А альгинат натрия
СаА альгинат кальция
1СРР иолифосфаэен
1дС иммуноглобулины класса С
НКТР нижняя критическая температура растворения
ПЭГ полиэтиленгликоль
МА моноклональные антитела
ИмГ иммобилизованные гибридомы
СК суспензионная культура
I МДП Ыацетилглюкозаминил 1 4ЫацетилмурамоилаланилПизоглутамину Н.2 гибрндома, продуцирующая антитела к ГМДП ОУАГМДП конъюгат ГМДП с овальбумином ЕМКВ2 гибрилома, продуциртотая антитела к иитсрмсйкину2 человека
РРН безбелковая среда для культивирования гибридом ОМЕМ минимальной среде Игла в модификации Дюльбекко 1М1ЭМ среда ПМЕМ в модификации Пскова
фетальная телячья сыворотка
I белковоминеральная добавка для культивирования гибридом ТрилонБ этилендиамиитетраацетат натрия ДСН додецилсульфат натрия ФСБ К 4фосфатный буфер
человеческий мерцательный ненротрофическнн фактор
i человеческий фактор роста нервов
ВНК i клетки почек детеныша хомячка
СНО i v клетки яичников китайского хомячка
V клетки почки зеленой африканской обезьяны
клетки почки собаки
ВВЕДЕНИЕ


Основные требования к полимерным носителям и методам их получения. Методы включения клеток животных в полимерные гидрогели. Методы иммобилизации в гидрогели на основе синтетических полимеров. Методы иммобилизации в гидрогели на основе природных материалов. Влияние внутренней сгруктуры гидрогелей на иммобилизованные клетки. Микроинкапсулирование клеток животных. Иммобилизация клеток животных в макропористые гидрогели. Методы получения гранул композитных гидрогелей. Изучение механической прочности композитных гранул. Исследование структуры композитных гранул. Методы иммобилизации гибридом в композитные гидрогели. Оптимизация процесса иммобилизации гибридом. Оптимизация композитных гранул для иммобилизации гибридом. Культивирование иммобилизованных гибридом. Культивирование иммобилизованных гибридом на бессывороточных средах. I МДП Ыацетилглюкозаминил 1 4ЫацетилмурамоилаланилПизоглутамину Н. Данная работа выполнена п Институте биоорганичсскон химии им. ММ. Шемякина и Ю. Л. Овчинникова в соответствии с планом НИР и отражает одно из направлений использования полимерных носителей для биотехнологии, в частности, дя иммобилизации клеток животных, осуществляющих биосинтез различных биологически активных веществ. Список биологически активных вещест в БАВ которые используются в медицине, пищевой и других областях промышленности ежегодно стремительно расширяется. Следует отметить, что во всех случаях решающее значение имеет качество получаемых биологических продуктов, поэтому вопрос о выборе той или иной технологии необходимо решать с учетом конкретных условии. Гак. Биологические соединения, закодированные одним или несколькими генами, могут являться потенциальными кандидатами для технологии рекомбинантной ДНК , и их можно без больших затрат получать в системах, предназначенных для микробиологических производств. Кроме того, суммирование проблем качества БАВ, экспрессии и трансляции генов в микробиологических реципиентах, привело к ориентации клонирования ДНК в системах клеток животных 8. Большинство клеток животных до всех клеточных линий являются поверхностнозависимыми, т. Указанное обстоятельство, первоначально, привело к разработке различных типов негомогсиных систем стационарного культивирования крупного масштаба, воспроизводящих в своей основе общепринятое многоэлементное оборудование. Были созданы различные конструкции биореакторов с большим числом статических и динамических дисков пропагаторы с набором трубок, удерживаемых в виде пучков с пластиковыми лентами пленками, заполняющими объем культуральных сосудов , а также роллерные системы . Применялись также две дополнительные системы. Одна из них основана на конструкции, которая имитирует организацию клеток в организме животного и предполагает выращивание клеток на внешней или внутренней поверхности полых микроволокон синтетические капилляры, имеющих наружный диаметр 0 мкм . Виорсактор заполняется насадкой, размер, форма и конструкция насадочных элементов могут варьироваться в широких пределах. Эти элементы могут удерживаться в неподвижном слое или же они перемещаются под воздействием потоков окружающей среды . В последнем варианте система приближается к гомогенному состоянию. Параллельно развивалась технология культивирования клеток животных не на поверхности микроносителей , а внутри полимерных гранул на основе гидрогелей или капсул с полупроницаемыми мембранами ,. В настоящее время нет универсального метода культивирования клеток животных. Для получения ВЛВ в той или иной степени применяют суспензионные и стационарные методы культивирования, культивирование клеток на микроносителях, а также методы на основе микроинкапсулирования и иммобилизации клеток животных в гели таб. Вирус грипп В Микроносители . Ретровирусы СГШ ТЗО. ТСЮ. V Микроносители. Г ранулы . В настоящее время усиленно развиваются новые направления применения иммобилизованных клеток животных , в частности в области трансплантологии, генной терапии таб. Диабет островки Лангсрганса инсулин капсулы . Неврологические хромаффиниыс клетки капсулы 3.