Исследование факторов, определяющих антимикробную активность нового антимикробного препарата из рыбных жиров

• Автор: Рыбин, Вячеслав Григорьевич
• Шифр специальности: 03.00.23, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 156 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Список использованных сокращений.

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1 Антимикробные свойства липидов

2.1.1 Жирные кислоты

2.1.2 Продукты окисления липидов

2.1.2.1 Продукты перскисного окисления липидов, классификация и механизм образования

2.1.2.2 Биологическая активность продуктов перекисного окисления липидов.

2.1.2.3 а,рненасыщенные альдегиды, механизм действия

2.1.2.4 Антимикробные свойства продуктов окисления липидов.

2.2 Состав и структура клеточных оболочек микроорганизмов.
2.3 Используемые в пищевой промышленности антисептики, механизм и избирательность их антимикробного действия.
2.4 Заключение
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1 Исследование связи между степенью ненасыщенносги рыбных
жиров и активностью антимикробного препарата.
3.2 Определение активных компонентов антимикробного препарата.
3.2.1 Предварительное исследование состава антимикробного препарата .
3.2.2 Разделение смеси компонентов антимикробного препарата методами колоночной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии.
3.2.3 Идентификация главных активных компонентов антимикробного препарата
3.2.4 Активный состав антимикробного препарата
3.2.5 Свойства главных активных компонентов антимикробного препарата
3.3 Определение гидрокси2ноненаля и 2,,гидки2,6нонадиеналя методом газожидкостной хроматографии
3.3 Условия приготовления антимикробного препарата с высокой
активностью.
3.4 Влияние гидрокси2ноненаля на биосинтез
5,8, 1 ,i5,8, 1,эйкозатетраеновой кислоты i vi
3.5 Заключение
4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
4.1 Материалы и оборудование.
4.1.1 Растворители.
4.1.2 Реактивы
4.1.3 Кульгуры микроорганизмов.
4.1.4 Тонкослойная хроматография.
4.1.5 Колоночная хроматография
4.1.6 Твердофазная экстракция.
4.1.7 Высокоэффективная жидкостная хроматография.
4.1.8 Газожидкостная хроматография.
4.1.9 Спектроскопическое оборудование
4.1. Источники липидов
4.1. Хранение липидов
4.2 Общие методы.
4.2.1 Получение арахидоновой кислоты.
4.2.1.1 Получение смеси жирных кислот.
4.2.1.2 Обогащение смеси жирных кислот полиненасыщенными жирными кислотами.
4.2.1.3 Получение Д4 и Д5 полиненасыщенных жирных кислот
методом йодлактонизации.
4.2.1.4 Разделение йодлактонов А4 и Д5 полиненасыщенных
жирных кислот
4.2.1.5 Восстановление йодлактонов
4.2.1.6 Разделение смеси метиловых эфиров жирных кислот методом обращеннофазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии.
4.2.2 Получение метиловых эфиров жирных кислот.
4.2.3.1 Метод 1.
4.2.3.2 Метод 2
4.2.3 Гидролиз эфиров жирных кислот
4.2.4 Получение триметилсилильных производных спиртов МезЬМЖ для массспектрометрического анализа.
4.2.5 Получение метоксииминов и бснзоксииминов карбонильных соединений для массспектромегрического анализа
4.2.6 Определение бактерицидной активности
4.2.7 Определение фунгицидной активности.
4.2.8 Определение удельной активности липоксигеназы.
4.3 Получение антимикробных агентов.
4.3.1 Приготовление антимикробного препарата
4.3.2 Определение суммы свободных жирных кислот
кислотное число
4.3.3 Определение перекисных чисел
4.3.4 Определение формальдегида показатель накопления вторичных продуктов окисления.
4.3.5 Экстракция антимикробных агентов.
4.3.6 Разделение смеси антимикробных агентов на компоненты.
4.3.6.1 Предварительное разделение колоночная хроматография на силикагеле
4.3.6.2 Получение индивидуальных компонентов смеси антимикробных агентов высокоэффективная жидкостная хроматография на обращенной фазе
4.4 Липоксигеназное окисление арахидоновой кислоты в присутствии гидрокси2иоиеналя
Выводы.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Наиболее сильную антимикробную активность в отношении всех вышеуказанных микроорганизмов проявляли липидные экстракты из некоторых представителей красных водорослей i ii и ii . Их минимальные ингибирующие концентрации МИК в отношении i составили и 0 мкгмл, соответственно. Исследовался и липидный экстракт из iii i, который показал высокую активность в отношении ii i и i iii. Среди многочисленных компонентов жиров и масел проводили поиск антимикробной активности у ряда фосфолипидов из микрофлоры кишечника свиньи . Лецитин и фосфатидилэтаполамид были неактивны при концентрациях, более 1 мМ, также как и сфиигомиелин. А лизолецигин, напротив, был активен при этой концентрации. Последующие эксперименты показали, что МИК лизолецитина соответствовала 9 мМ 4. Кроме фосфолипидов, было обнаружено антимикробное действие у некоторых продуктов гидролиза жиров моноглицеридов и жирных кислот. Антимикробные свойства моноглицеридов достаточно хорошо изучены 2,, и в настоящее время моноглицериды используются в Японии для приготовления пищевых консервантов. Важной, относящейся к липидам, группой соединений, антимикробные свойства которой широко использовались с давних времен, являются жирные кислоты ЖК и их натриевые и калиевые соли мыла. Мыла были впервые
применены около лет назад в Месопотамии и с тех пор успешно используются в качестве наружных антисептических средств. Первое упоминание об антимикробных свойствах мыла, как было описано выше, мы обнаружили в работе Кларка 1, опубликованной в г. В дальнейшем о бактерицидных и фунгицидных свойствах мыла сообщалось Кодисеком , Бэйлисом и Ниеманом . В последующие годы вышеописанные свойства основных компонентов мыла ЖК широко изучались . Также были отмечены инактивация мылами некоторых вирусов и антиопухолевая активность ЖК . Было установлено, что в некоторых гомологических рядах ЖК бактерицидная активность возрастала, а поверхностная активность снижалась с уменьшением длины цепи атомов углерода, однако не были определены причины антимикробного действия ЖК. Позднее было определено , что поверхностноактивные вещества проявляют большую бактерицидную активность в зависимости от их типа катионные агенты более эффективны против обеих групп микроорганизмов грамположительных и грамотрицательных в щелочных растворах. Анионные агенты более эффективны только в отношении грамположительных микроорганизмов и только в кислых средах. Активность поверхностноактивных агентов уменьшалась в присутствии белков, что позволило предположить об образовании комплексов типа белокагент, удаляющих биологически активные компоненты из бактерицидных растворов . Кроме того, отмечалось снижение бактерицидной активности мыл, при добавлении в их раствор фосфолипидов . Такая инактивация является возможной вследствие адсорбции фосфолипидов на поверхность мембраны
бактериальной клетки, однако фосфолипиды не защищают клетку, если добавлены после обработки клетки бактерицидным агентом, например, мылом. Риченбэк исследовал действие мыла на культуру ii i и обнаружил, что стеарат, пальмитат и миристат калия были эффективны против этого микроорганизма, в то время как олеат, эрукат и линолеат калия были неактивны. Уолкер показал, что натриевые и калиевые мыла последних трех кислот не очень эффективны в их бактерицидном действии Короткоцепочечные представители этой серии С4С имели небольшой бактерицидный эффект, либо вовсе его не имели. Он обнаружил, что пневмококки были очень чувствительны к лауратам, олеатам, линолеатам и линоленатам. Чувствительность стрептококков была приближена к таковой у пневмококков при большей концентрации мыла. М0. М, но были довольно устойчивы к действию ненасыщенного мыла. Эггертс обнаружил, что абромоЖК были более активны, чем незамещенные ЖК. Эффект гидрооксидной группы в положении состоял в усилении бактерицидного действия мыла из насыщенных ЖК, ослабляя при этом эффект ненасыщенного мыла. Ларсон обнаружил отсутствие роста пневмококков и стрептококков в присутствии очень небольших количеств рицинолеата натрия. Миллер и Касглс обнаружили, что некоторые ЖК ингибируют рост гонококков. Коллер и соавт.