Разработка методологии многопрофильного выявления антител к возбудителям инфекционных заболеваний перинатального периода на основе белковых матриц

• Автор: Яковченко, Анна Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 119 с. : ил.

Оглавление

Список использованных сокращений.

ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ИНФЕКЦИИ ПЕРИНАТАЛЬНОГО ПЕРИОДА И ПОДХОДЫ К ИХ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ Литературный обзор.

1.1. Особенности инфекционных заболеваний перинатального периода и их диагностики

1.1.1. Токсоплазмоз.

1.1.2. Краснуха.

1.1.3. Инфекция, вызванная вирусами простого герпеса

1.1.4. Цитомегаловирусная инфекция

1.1.5. Хламидиоз

1.1.6. Микоплазмоз

1.1.7. Сифилис
1.2. Многопрофильный иммуноанализ, как альтернативный подход к диагностике инфекционных заболеваний
1.3. Виды, форматы и дизайн белковых микроматриц
1.4. Материалы, используемые в качестве твердой фазы
1.5. Методы иммобилизации биомолекул на поверхности твердой фазы
1.6. Методы регистрации иммунологического связывания
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.2. Методы.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Выбор формата белковой матрицы.
3.2. Выбор и исследование целевых свойств материалов для подложки матрицы.
3.3. Сравнительная оценка способов подготовки поверхности носителя.
3.4. Выбор номенклатуры матрицы подбор антигенов.
3.5. Выбор способа и условий иммобилизации антигенов на подложке
3.6. Выбор стратегии генерирования сигнала.
3.7. Оптимизация состава и условий применения физического проявителя
3.8. Отработка схемы и условий многопрофильного анализа.
3.9.Лабораторныс испытания прототипа тсстсистсмы для многопрофильного анализа
3 Концепция набора для многопрофильного анализа
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
Список используемой литерату ры
Список использованных сокращений
АГ антиген АТ антитела
БСА бычий сывороточный альбумин
БРС буферный раствор для разведения субстрата
ВПГ вирус простого герпеса
ВИЧ вирус иммунодефицита человека
ВУИ внутриутробные инфекции
ВОЗ Всемирная организация здравоохранения
ДАБ диаминобензидин
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
ИФА иммуноферментный анализ
К положительный контроль
К отрицательный контроль
КББ карбонатбикарбонатный буферный раствор
КБР концентрат блокирующего раствора
К кор коэффициент корреляции
ОП оптическая плотность
1крит критическое значение оптической плотности
ОСО Отраслевой Стандартный Образец
ПЛАГ полиакриламидный гель
IIX псроксидаза хрена
ПЦР полимеразная цепная реакция
РБРК буферный раствор для разведения коньюгата
РБРС буферный раствор для разведения сывороток
ТСБТ триссолсвой буфер с твином
ФСБ фосфатносолевой буферный раствор
ФСБТ фосфатносолевой буферный раствор с твином
ЦМВ цитомегаловирус
ЦМВИ цитомегаловирусная инфекция
ЩФ щелочная фосфатаза
глугатионБтрансфераза
иммуноглобулины класса А
иммуноглобулины класса в
ОНит иммуноглобулины класса в человека 1М иммуноглобулины класса М
натрия додецилсульфат 8рА стафилококковый белок А ТМВ 3,3,5,5тетраметилбензидин
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Одной из наиболее перспективных областей применения белковых матриц в практической медицине является комплексное обследование беременных женщин и новорожднных дегей на наличие у них спектра сывороточных антител к инфекционным заболеваниям, негативно влияющим на здоровье матери и ребенка. Большинство заболеваний перинатального периода характеризуются широким распространением среди населения разных регионов мира, множественностью путей заражения, частым сочетанием двух и более возбудителей, взаимно усиливающих патогенность, а также скудностью и неспецифичиостыо клинической симптоматики . ., Vivi . Поэтому для достоверной диагностики таких заболеваний требуется дополнительное лабораторное обследование. Одним из наиболее оправданных подходов является проведение комплексного серологического обследования. Для проведения такого обследования необходима постановка ряда анализов на моноспецифических тестсистемах, поэтому оно представляет собой длительную, трудомкую и дорогостоящую процедуру. Следует отметить, что для выполнения иммуноферментных анализов требуется специальная дорогая аппаратура и высокая квалификация персонала. В настоящее время такое обследование проводится только в крупных, как правило, городских учреждениях здравоохранения. Оперативная доставка образцов из отдаленных населенных пунктов, особенно в условиях сибирского бездорожья, представляет большую трудность. Поэтому, значительная часть населения фактически лишена возможности серологического обследования с целью выявления инфекционной угрозы и своевременной се ликвидации. Таким образом, создание недорогого и простого в исполнении многопрофильного серологического теста, позволяющего оперативно проводить комплексное серологическое обследование беременных женщин, в том числе и в условиях слабо оснащенных сельских медицинских пунктов, позволит сделать такое обследование более доступным, массовым, своевременным и эффективным. Усовершенствование диагностики инфекций перинатального периода является важной социальной задачей, поскольку напрямую связано со здоровьем рождающихся детей и в перспективе определяет здоровье населения страны. Целью исследования является разработка подходов и методических примов для изготовления и применения многопрофильного теста, позволяющего осуществлять комплексное обследование беременных женщин и новорожденных детей на наличие у них спектра сывороточных антител класса к возбудителям инфекционных заболеваний перинатального периода. Обоснован выбор формата белковой матрицы и общей стратегии бесприборного многопрофильного анализа антител. Проведена экспериментальная оценка целевых свойств материалов для изготовления подложки белковой матрицы. Из числа коммерчески доступных антигенов отобраны антигены пригодные для использования в многопрофильном тсстс. Экспериментально подобраны условия подготовки поверхности твердой фазы и иммобилизации на ней антигенов. Проведена сравнительная экспериментальная оценка наиболее перспективных вариантов хромогенной визуализации и усиления сигнала. Отработана общая схема и оптимизированы условия выполнения многопрофильного теста с использованием конъюгатов на основе коллоидного золота и усилением сигнала серебряным проявлением. Сконструирован и испытан прототип белковой матрицы для одновременного выявления антител класса 10 к 8 возбудителям инфекций перинатального периода. Проведены лабораторные испытания прототипа многопрофильного теста. Разработана концепция набора для многопрофильного анализа, получен Патент РФ на Набор для многопрофильного анализа сыворотки крови с целью одновременного выявления специфических антител к возбудителям ТСЖСНинфекций методом дотиммуноанализа. Работа выполнена в течение гг. Вес экспериментальные работы осуществлялись в рамках научноисследовательского проекта Изучение динамики гуморального иммунитета при сифилитической инфекции и отработка новых методов иммуноанализа, утвержденного Этическим комитетом ФГУН ГНЦ ВБ Вектор г. Теоретическое и экспериментальное обоснование выбора формата белковой матрицы и общей стратегии бесприборного многопрофильного анализа антител. Экспериментальное обоснование выбора материала для изготовления подложки белковой матрицы. Методология изготовления белковой матрицы.