Изучение физиологических свойств бактерии Rhodococcus erythropolis штамм Ас-858 Т для оптимизации условий получения углеводородразрушающего биопрепарата

• Автор: Костина, Елена Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Саранск
• Количество страниц: 132 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И ПРИМЕНЕНИЕ АЛКАНОТРОФНЫХ БАКТЕРИЙ РОДА ЯНОБОСОССиБ БР.

1.1 Культуральноморфологическая характеристика бактерий

рода ЮгоЛососст хр.

1.2 Физиология и биохимия алканотрофных бактерий ЮюЛососсыб яр.

1.3 Липидный состав клеток актинобактерий КЪоЛососсыб Бр.

1.1рименение бактерий рода ЯкоЛососсиБ Бр.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДБ1 ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объект исследования

2.2 Реактивы и материалы
2.3 Культивирование бактерий КкосЬсоссш егукгоро1Б
2.4 Определение концентрации белка
2.5 Определение количества биомассы
2.6 Экстракция липидов из клеток бактерий КюЛососсиб егукгоро1лБ
2.6.1 Выделение общих липидов
2.6.2 Выделение фосфолипидов
2.7 Хроматографические методы анализа
2.7.1 Микротонкослойная хроматография фосфолипидов
2.7.2 Количественное определение фосфолипидов
2.8 Антроновый метод определения
экзогликолипидов
2.9 Определение содержания углеводородов в культуральной жидкости
2. Гравиметрический метод определения массовой концентрации углеводородов в пробах почв
2. Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ РЕГУЛИРОВАНИЯ РОСТА И СИНТЕЗА ЛИПИДОВ У ЯНОООС.ОССОЗ ЕЯУТИЯОРОЫЗ
3.1 Влияние концентрации Са2 на рост и липидсинтезирующую активность культуры ЯИоЛососсш егукгороИБ Ас8Т
при культивировании на среде с гексадеканом
3.2 Влияние концентрации гексадекана на рост и липидсинтезирующую способность клеток ЯИоЛососсш
егуЖгороШ Ас8 Т
3.3 Исследование липидсинтезирующей активности клеток ЯИоЛососсш егуПкгороНБ при полунепрерывном культивировании на богатой органической и оптимизированной минеральной
средах
3.4 Влияние концентрации углеводородов дизельного топлива на рост
и образование липидов культурой ЯИоЛососсш егуЛпороИБ Ас8 Т ГЛАВА 4. ОПТИМИЗАЦИЯ ПРОЦЕССОВ ПЕРИОДИЧЕСКОГО И ПОЛУНЕПРЕРЫВНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЯНОООСОССОЗ ЕЯУТИЯОРОЫЗ С ЦЕЛЬЮ ПОЛУЧЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ
4.1 Получение активных форм биопрепарата на основе ЯИоЛососсш егуЖгороНБ при периодическом культивировании
4.1.1 Эксперименты по влиянию начального значения на рост
и липидсинтезирующую активность К. егуЖгороИБ
4.1.2 Эксперименты по влиянию ионов железа на рост и липидсинтезирующую активность Я. егуМгороШ
4.2 Оптимизация процесса полунепрерывного культивирования
клеток ЯИоЛососсш ыулИгороНБ
4.2.1 Изучение полунепрерывного культивирования
Я. е1уЖгороР1Б в условиях избытка питательных компонентов
4.2.2 Полунепрерывное культивирование ЯИоЛососсш елуЛггороНБ
на оптимизированной минеральной среде с гексадеканом в качестве единственного источника углерода
4.2.3 Изменение содержания клеточных липидов ЯИосососсиб егуНгороШ при полунепрерывном культивировании на средах с различными источниками углерода
ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ БАКТЕРИЙ Д. ЕКУТНКОРОЫЯ ДЛЯ БИОРЕМЕДИАЦИИ НЕФТЕЗАГРЯЗНЕННЫ X СРЕД
5.1 Использование клеток Ююсососсия сппЬгороз для
рсмедиации нефтезагрязнеиных вод
5.1.1 Изменение доли растворенного и эмульгированного модельного субстрата гексадекана в
процессе роста клеток Ююсососсш егуМгороНя ВКМ Ас8 Т в жидких средах
5.1.2 Изменение доли растворенных и эмульгированных углеводородов дизельного топлива в процессе роста клеток Шюсососсш егуНгороИя Ас8 Т в жидких средах
5.2 Использование биопрепарата на основе Мюсососсиз егукгороз
для ремедиации нефтезагрязнеиных почв
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧИКОВ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Представленные результаты были получены в ходе исследований, проведенных в рамках научнопрактических работ при поддержке программы Развитие научного потенциала высшей школы РНП. Моделирование и кинетический анализ процессов деструкции лигноцеллюлозиых субстратов и ксенобиотиков с участием ферментов и липидов фанта Роснауки по поддержки молодых ученых, шифр РИ. Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были представлены для обсуждения на международной конференции Проблемы биодсструкции техногенных зафязнителей окружающей среды Саратов, на Огарсвских чтениях в Мордовском государственном университете имени Н. П. Огарева Саранск, на ой Путинской школе конференции молодых ученых Биология наука XXI века Пущине, на IV Съезде общества биотсхнологов России имени Ю. Н.И. Вавилова г. Киев, Украина, на международной научнопрактической конференции Новые технологии в экспериментальной биологии и медицине РостовнаДону, VII Республиканской научнопрактической конференции Наука и инновации в Республике Мордовия Саранск, . Публикации. Г1о теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, в числе которых 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК. Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 2 страницах машинописного текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, результатов и их обсуждения, выводов и списка использованной литературы. Диссертационная работа включает 9 рисунков и таблиц. Список цитируемой литературы включает 2 источника, в том числе 6 на иностранных языках. ГЛАВА 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И ПРИМЕНЕНИЕ АЛКАНОТРОФНЫХ БАКТЕРИЙ РОДА . Культуральноморфологическая характеристика бактерий рода . С начала активного изучения бактерий рода прошло более лет. Однако на протяжении последнего десятилетия появляются работы, посвященные фундаментальным аспектам их биологии, генетики, таксономической структуры. Подробный анализ литературы и результатов собственных исследований данной группы микроорганизмов приводится в обзорных работах О. А. Нестеренко и др. Т.В. Короиелли , И. Б. Ившиной, Г. И. Безматерных 7, В. И. Аристарховой , М. М.Р. Род был предложен в результате проведенных нумерологических исследований М. В качестве основных источников информации использовали следующие морфологические и физиологобиохимические тесты способность к потреблению различных субстратов рост при разных значениях температуры, , в присутствии ингибиторов устойчивость к антибиотикам. К настоящему времени род включает девять валидных видов . Но становление систематики данного рода па сегодняшний день нельзя назвать завершенным, так как процесс реклассификации отдельных видов родококков продолжается. Так, сравнительно недавно . Род интенсивно пополняется новыми видами . М. , . V. . На основании накопленных к настоящему времени сведений род можно охарактеризовать следующим образом. Родококки аэробы, грамположительны, неподвижны, некислотоустойчивы, эндоспор нс образуют. Данные микроорганизмы обладают окислительным типом метаболизма и хорошо растут на стандартных лабораторных средах при С, хотя некоторые штаммы требуют тиамина. Клетки палочковидные толщиной 0,,7 и длиной от до мкм, прямые и искривленные, нередко ветвящиеся, часто лежащие vобразно или палисадовидно Нестеренко и др. Ившина И. Б., Безматерных Г. И., Ившина И. Б. и др. М. , iii ,. Аристархова В. У всех штаммов морфогенетический цикл начинается со стадии кокков или коротких палочек, переходящей в последовательность более или менее сложных у разных организмов морфологических изменений, завершающих жизненный цикл. Так, кокки могут просто прорастать в короткие палочки, образовывать нити с боковыми выростами либо элементарным ветвлением или, у наиболее дифференцированных форм, сильно разветвлнные гифы. Следующая генерация кокков или коротких палочек образуется в результате фрагментации палочек, нитей и гиф. Некоторые штаммы формируют редкие, видимые в микроскоп воздушные гифы, либо прямостоячие пучки гиф синеммы. Дифференцирующие признаки представлены в таблице 1. ХоултД.