Использование липоевой кислоты с целью усовершенствования питательных сред для культивирования чумного микроба

• Автор: Катунина, Людмила Семеновна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Ставрополь
• Количество страниц: 164 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Использование сред из различных питательных основ для культивирования чумного микроба.

1.1 .Питательные потребности чумного микроба.

1.2.Питательные среды для выращивания чумного микроба

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1.Материалы исследования

2.1.1 .Штаммы чумного микроба

2.1.2.Питательные основы и среды.

2.1.3.Растворы, соли и другие ингредиенты
2.2. Методы исследования.
2.2.1.Лабораторные методы исследования на чуму.
2.2.2.Методы приготовления гидролизатов.
2.2.3.Изучение эффективности использования липоевой кислоты при бактериологической диагностике .
2.2.4.Изучение количественного состава аминокислот в гидролизатах
2.2.5.Методика определения прочности агаровых гелей
2.2.6.Методика исследования эктопаразитов
2.2.7.Методика электронной микроскопии.
2.3. Контроль концентрации микробной взвеси
2.4. Статистические методы.
3. НЕКОТОРЫЕ АСПЕКТЫ ТЕХНОЛОГИИ ПРИГОТОВЛЕНИЯ И КА
ЧЕСТВА ПЛОТНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
3.1. Изучение влияния отдельных факторов на качество питательных сред
для культивирования чумного микроба.
3Л .1.Изучение количественного состава аминокислот в используемых для получения питательных сред гидролизатах
3.1.2.Изучение влияния состава используемой воды на ростовые качества питательной среды
3.1.3.Изучение зависимости ростовых качеств питательной среды от используемого агарагара
3.2. Отработка технологии приготовления питательных сред
4. ИЗУЧЕНИЕ СТИМУЛИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ЛИПОЕВОЙ КИСЛОТЫ НА РОСТ ЧУМНОГО МИКРОБА.
4.1. Отработка метода приготовления питательной среды с липоевой
кислотой
4.2.Влияние липоевой кислоты на ростовые качества питательных сред при культивировании штаммов чумного микроба различных разновидностей.
4.3.Влияние липоевой кислоты на ростовые качества питательных сред,приготовленных на основе ферментативных,кислотных и
щелочных гидролизатов кукурузы
4.4.Апробация питательной среды с липоевой кислотой при исследовании полевого материала в Дагестанском высокогорном очаге чумы.
5.ИЗУЧЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ С ЛИ ЮЕВОЙ КИСЛОТОЙ В КАЧЕСТВЕ
НАКОПИТЕЛЬНОЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ ЧУМНОГО ВАКЦИННОГО ШТАММА ЕВ В ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ ЦЕЛЯХ
5.1.Изучение различных факторов, влияющих на ростовые качества среды накопления
5.2.Изучение влияния липоевой кислоты на ростовые качества агара Хоттингера, используемого для получения биомассы вакцинного штамма ЕВ.
5.3.Изучение влияния липоевой кислоты на фазы роста чумного микроба вакцинного штамма ЕВ
5.4.Изучение влияния липоевой кислоты на синтез фракции 1.
5.5.Узучсние влияния условий культивирования на клеточную структуру чумного микроба
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Известно, что на свойства микробов большое влияние, наряду с такими факторами, как температурный режим, продолжительность инкубирования, аэрация и т. Со времени открытия чумного микроба Иерсеном и Китазато в году было предложено большое количество жидких и твердых питательных сред для его выделения и культивирования. Необходимой предпосылкой научно обоснованного конструирования микробиологических питательных сред является изучение питательных потребностей микроорганизмов и особенностей их ферментативной активности. Типы питания микробов чрезвычайно разнообразны. Сущность этого разнообразия заключается в способности данного микроорганизма синтезировать органические вещества. Одни микробы, не нуждаясь в готовых органических соединениях, были способны к их синтезу, другие лишь частично могли его осуществлять, а третьи безусловно нуждались в готовом органическом веществе и были неспособны к синтезу белковых веществ из простых минеральных соединений . Конструирование питательных сред для культивирования чумного микроба должно учитывать многофакторность питания микроорганизма. Сбалансированность сред следует проводить по следующим компонентам азотсодержащие вещества, углеводы, ионы, витамины, соли. Одним из основных компонентов любой питательной среды является источник азота. Для нормальной жизнедеятельности в питательной среде микроорганизмы требуют наличия продуктов растепления белковой молекулыпептонов 1. Большое значение для бактерий имеет наличие свободных аминокислот в питательной среде 2. Многие микроорганизмы способны утилизировать только свободные аминокислоты, их недостаток в питательных основах нарушает метаболизм бактерий, даже несмотря на присутствие достаточного количества других белковых фракций ,,,5,6,7,7,0,1. Чумной микроб, будучи аминогетеротрофом, для активного размножения требует наличия в питательных средах большого набора свободных аминокислот или низкомолекулярных пептидов, которые составляют аминный азот питательных основ. Отсутствие у бактерий чумы протеолитической активности обуславливает значение для них степени расщепления белковой молекулы в многокомпонентных, например, мясных или казеиновых средах ,. При этом наилучший рост бактерий чумы па мясопептонных средах обеспечивает глубина расщепления белка, равная ,и колебания в этих пределах не сказываются на жизнеспособности, культуральноморфологических и иммуногенных свойствах клеток ,2. Оптимальным содержанием в мясных средах аминного азота считается уровень 1, гл, обеспечивающий интенсивное размножение чумного микроба. Одни авторы считают, что увеличение аминного азота почти не сказывается на выходе биомассы , 1, другие отмечают отрицательное влияние высоких концентраций аминного азота на чумной микроб , , , 7. Различные штаммы могут приобретать зависимость от лейцина, пролина, лизина, аргинина, гистидина и некоторых других аминокислот , 8, 9. Существуют также прототрофные варианты 8, 4, 3. Вакцинный штамм ЕВ чумного микроба, в основном, ауксотрофен по метионину и фенилаланину, однако гетерогенность его популяций по этому признаку довольно значительна , 8,9. В качестве источника энергии и углевода микроорганизмы способны использовать углеводы. Каждый вид бактерий усваивает определенные углеводы в соответствии с имеющимся набором специфических ферментов 5, 1. Чумной микроб наиболее легко усваивает из моносахаридов глюкозу, из дисахаридов мальтозу и трегалозу, из спиртов маннит , , 0. Углерод глюкозы, метаболизм которой для чумного микроба изучен лучше всего, используется для синтеза нуклеиновых кислот, белков, полисахаридов и липидов. При этом доля его, как пластического материала клетки, снижается при наличии в среде свободных аминокислот . На активность начального этапа процесса утилизации глюкозы влияют многие факторы питательная среда, концентрация аминного азота, , возраст культуры и аэрация 5. Наличие в среде глюкозы существенно увеличивает темпы накопления биомассы чумного вакцинного штамма ЕВ в начальные периоды роста , . При изучении других углеводных субстратов отмечалось, что чумной микроб окисляет галактозу, фруктозу, маннозу, ксилозу, мальтозу, трегалозу, маннит ,3.