Гистологические и цитологические особенности молочной железы кроликов как объекта генно-инженерных манипуляций

• Автор: Грезина, Наталья Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.23, 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: п. Дубровицы, Московской обл.
• Количество страниц: 114 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8

1.1. Молочная железа как сложный эпидермальный комплекс

1.1.1. Строение молочной железы животных. 8

1.1.2. Рост и развитие молочной железы.

1.1.3. Гормональная регуляция маммогенеза

1.1.4. Изменения плоидности клеток молочной железы в динамике

1.2. Пролиферация клеток молочной железы

1.2.1. Стволовые клетки и их характеристика

1.2.2. Клеткипредшественники молочной железы.

1.2.3 Ядерноцитоплазматические изменения клеток .
1.3. Методы генетической трансформации клеток
1.3.1. Ретровирусные векторы как метод переноса и экспрессии
чужеродных генов у млекопитающих
1.3.2. Семейство vii.
1.4. Молочная железа как источник рекомбинантных белков.
1.5. Экспрессирующая способность трансформированных i vi
клеток
1.6 Селекция клеток
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Оборудование, реактивы и используемые растворы.
2.2. Подготовка животных
2.3. Получение и анализ гистологических препаратов.
2.4. Культивирование клеток.
2.5. Окраска клеток молочной железы 2.
2.6. Определение активности щелочной фосфатазы в клетках молочной
железы i vi.
2.7. Используемые рекомбинантные вирусные векторы.
2.8. Совместное культивирование.
2.9. Анализ интеграции и экспрессии трансгена .
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Структурные характеристики становления и функции молочной железы у кроликов
3.1.1. Гистологическая структура молочной железы крольчих
3.1.2. Изменение ядра маммоцитов.
3.1.3. Определение относительного количества ДНК в ядрах клеток молочной железы
3.2. Культивирование клеток молочной железы.
3.2.1. Качественная и количественная характеристика клеток молочной железы крольчих, обладающих свойствами стволовых клеток
3.2.2. Изучение поддержания в. культуре клеток молочной железы крольчих, обладающих свойствами стволовых элементов, в процессе культивирования i vi
3.3. Использование ретровирусных векторных систем для трансформации соматических клеток кролика
3.3.1. Перенос генов в маммоциты i vi.
3.3.2 Микросферы при генетической трансформации клеток молочной
железы i vi
3.4. Перенос генов посредством аденовирусных векторов
3.5. Трансформация клеток молочной железы i viv. .
3.5.1. Изучение трансформирующей способности ретровирусной векторной системы
3.5.2. Оценка интеграции и экспрессии рекомбинантного гена i viv
4. ОБСУЖДЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
ЛИТЕРАТУРА


Исследована эффективность трансформации маммоцитов кролика i vi и i viv с использованием ретровирусной конструкцией . Показана возможность переноса чужеродных генов в клетки молочной железы посредством рекомбинантных аденовирусов. Практическая значимость. Определен период наибольшей пролиферативной активности клеток молочной железы кролика, обнаружены стволовоподобные клетки в молочной железе кроликов. Положения, выносимые на защиту. Пролиферативная активность клеток молочной железы зависит от физиологического состояния крольчих. Малодифференцированные клетки сохраняются в первичноперевиваемой культуре маммоцитов. С помощью ретровирусной векторной системы возможна трансформация клеток молочной железы кролика i vi. Структура и объем работы. Диссертация написана на 4 страницах, состоит из следующих разделов введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы, который включает 7 источников, в том числе па иностранных языках. Работа содержит 6 таблиц и рисунка. По материалам диссертационной работы опубликовано 5 статей. Материалы диссертационной работы были доложены на конференции аспирантов и молодых ученых, ВИЖ, п. Дубровицы, год на научнопрактической конференции Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения, Быково, на научном отчете отдела биотехнологии, ВИЖ, п. Дубровицы, на конференции отдела биотехнологии, ВИЖ, п. Дубровицы, год. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Молочная железа как сложным эпидермальным комплекс. Молочные железы это специализированные апокриновые железы кожного покрова, гомологичные потовым железам, функционально органически связанные с эндокринной регуляцией женской половой системы организма Иванов и др. Александровская и др. Георгиевский, Гистология, . У разных видов животных молочная железа имеет свои особенности в зависимости от места обитания, образа жизни, плодовитости и т. Например, у свиньи, собаки, кошки, кролика доли располагаются по всей вентральной поверхности грудной клетки и живота в количестве 38 пар, в то время как у коровы и кобылы две пары долей слиты в одно комплексное вымя, которое располагается на брюшной стенке между бедрами, а у овцы и козы число долей вымени уменьшается, до одной пары Акаевский, Галанцев и др. Физиология. Бойд, . Молочная железа морфологически состоит из активно действующей железистой паренхимы, системы выводных протоков и стромы, содержащей некоторое количество жира Богдашев и др. Елисеев и др. Грачев и др. Акаевский, Хэм и др. Александровская и др. Галанцев. Георгиевский,. Физиология. Жеребцов, Крстич, . Соотношение соединительной и железистой тканей этого органа не постоянно и меняется в. В целомсоединительной ткани меньше всего в разгар лактации Грачев и др. Галанцев и др. В состав стромы молочной железы входят местные соединительнотканные элементы волокна, основное вещество, клеточные формы, кроветворные лимфоидные клетки тканей внутренней среды, принимающие активное участие в структурнофункциональных преобразованиях секреторного эпителия железы в онтогенезе Богдашев и др. Акаевский, Суетина и др. Хэм и др. Хрусталева и др. Физиология. Жеребцов, . Паренхима состоит из долек, образованных несколькими молочными альвеолами, и системой разветвленных выводных протоков. Концевые секреторные отделы выстланы однослойным кубическим эпителием. Во время секреции клетки становятся выше, а в покойном состоянии, что может быть даже при заполненной секретом альвеоле, бывают низкими и даже плоскими. Эпителий альвеол окружен миоэпителиальными клетками звездчатой формы. Они соединяются друг с другом отростками и служат сократительными элементами железы рис. Рис. Схема строения альвеолы молочной железы. Выводные протоки железы представляют собой продолжение альвеол. Их начальные отделы имеют практически такое же строение. Эпителий в них сначала однослойный кубический, затем становится выше одно, а потом двухслойным.