Научное и экспериментальное обоснование совершенствования биотехнологии иммунобиологических препаратов и разработки новых методов и средств для экспресс-диагностики особо опасных инфекций

• Автор: Кальной, Сергей Михайлович
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Ставрополь
• Количество страниц: 258 с. : 37 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. АНАЛИЗ БИОТЕХНОЛОГИИ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ И МЕТОДОВ ЭКСПРЕССДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ обзор литературы
1.1. Получение и применение сорбентов и магноиммуносорбентов для концентрации и детекции антигенов возбудителей ООП

1.2. Биосенсоры в детекции макромолекул и антигенов возбудителей ООН .

1.3. Методы диагностики ООН.

1.4. Иммунологические и физикохимические характеристики серологических реакций, используемых при диагностике ООН.

1.5. Методы тврдофазного иммуноанализа и экспрессдиагностики

1.6. Молекулярные методы в диагностике ООН

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Материалы

2.1.1. Характеристика основных использованных штаммов микроорганизмов
2.1.2. Питательные среды, реактивы, ферменты
2.1.3. Приборы, аппаратура, инструменты, оборудование.
2.2. Методы исследований
2.2.1. Физикохимические и биологические методы.
2.2.2. Иммунологические методы
2.2.3. Получение фракций антигенов и специфических антител
2.2.4. Статистическая обработка результатов.
ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА БИОТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ НОВЫХ
ТВРДОФАЗНЫХ СОРБЕНТОВ И МЕТОДА ДЕТЕКЦИИ МАКРОМОЛЕКУЛ БИОСЕНСОРНЫМ УСТРОЙСТВОМ
3.1. Разработка экспериментальной установки для получения новых сорбентов, конструирования микрогравиметричсского биосснсора и осуществление способа детекции антигенов возбудителей ООН
3.2. Определение технологических параметров полимеризации альдегидов в плазме при активации поверхностей разнородных материалов.
3.3. Разработка метода получения сорбентов с повышенной сорбционной активностью на основе разнородных тврдофазных материалов пластмасса, керамика, стекло, минералы, металл
3.4. Разработка биосенсорного устройства и способа быстрой детекции антигенов возбудителей ООН
ГЛАВА 4. БИОТЕХНОЛОГИЯ НОВЫХ ТИПОВ ЛАТЕКСНЫХ И
БИОЛОГИЧЕСКИХ МАГНИТНЫХ СОРБЕНТОВ ДЛЯ КОНСТРУИРОВАНИЯ ДИАГНОС ТИКУМОВ.
4.1. Разработка новой биотехнологии суспензионных магнитных сорбентовИ
4.2. Изучение физикохимических и биологических свойств суспензионных
магнитных сорбентов.
ГЛАВА 5. БИОТЕХНОЛОГИЯ И СВОЙСТВА НОВЫХ АНТИТЕЛЬ
НЫХ МАГНОИММУНОСОРБЕНТОВ И БИОМАГНОИММУНОСОРБЕНТОВ
5.1. Разработка биотехнологии магноиммуносорбентов и биомагноиммуносорбентов.
5.2. Характеристика новых магноиммуносорбентов и биомагноиммуносорбентов в ИФА при ускоренной диагностике антигенов возбудителей
ГЛАВА 6. РАЗРАБОТКА ОСНОВНЫХ ПРИНЦИПОВ УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ИММУНОСУСПЕНЗИОИНЫХ РЕАКЦИИ
6.1. Изучение влияния центробежного поля на протекание иммуносуспензиоиных реакций при обнаружении антигенов возбудителей ООИ экспрессметодами
6.2. Изучение влияния электрического поля па протекание иммуносуспензионных реакций при обнаружении антигенов возбудителей ООИ экспрессметодами
6.3. Анализ механизмов биоспецифического взаимодействия макромолекул
при внешних энергетических воздействиях.
ГЛАВА 7. ИЗУЧЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРИБОРНОЙ РЕГИСТРАЦИИ ИЗМЕНЕНИЙ ФИЗИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ РЕАКЦИОННЫХ СМЕСЕЙ ПРИ ОСУЩЕСТВЛЕНИИ ИММУНОСУСПЕНЗИОННЫХ РЕАКЦИЙ
7.1. Использование регистрации изменения оптической плотности иммуносуспензионных реакций при обнаружении антигенов возбудителей ООИ.
7.2. Изучение возможностей кондуктометрического метода регистрации иммуносуспензионных реакций при диагностике антигенов возбудителей ООИ.
7.3. Сравнительный анализ основных характеристик разработанных новых
способов индикации бактериальных антигенов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


К полученной композиции добавляют раствор белковых лигандов, а затем в смесь вносят соли металлов, вызывающих образование прочного силикатного геля. В качестве солей использовали химические соединения бария, кальция, магния, алюминия. За счет высокой механической прочности получаемые иммобилизаторы сорбенты перспективны для применения в промышленности. Эволюция технологии получения сорбентов отражена в работах Брыкалова и . I. Мокеева , . Биотехнология магноиммуносорбентов в последние десятилетия включает . В последние годы в литературе появились данные об использовании в иммуноанализах бактериальных частиц с магнитными свойствами Климова И. М. с соавт. Жарникова И. В. с соавг. Жариикова И. В. с соавт. Ефременко В. И., Афанасьев Е. Н., Жарникова И. В. Т. Т., . В работе И. М. Климовой с соавг. МС в процессе полимеризации в ном полиакриламидном геле эмульсионным способом. Лигандами служили иммуноглобулины кроличьих сывороток против фракции 1 чумного микроба, лошадиные гипериммунные сыворотки, а также ганглиозиды. МС в объеме 1 мл, содержавшем мг иммуноглобулинов, фиксировали до мг водорастворимого антигена или 6х9м. При иммобилизации мг ганглиозидов на 1 г МС последний специфически сорбировал холерный энтеротоксин в количестве 3x6 кожных единиц активности за счет реакции ганглиозидтоксин. В работе В. И. Ефременко с соавт. В.И. Ефременко представлены варианты методов получения магнонммуносорбентов МИС и преимущества аспектов их использования. Энергия прикладываемого внешнего магнитного поля позволяет успешно сепарировать удерживаемые за счет него МИС с фиксированными на них антигенами или антителами, что дает возможность исключить центрифугирование и сократить время исследований при проведении лабораторной диагностики, индикации, выделении макромолекул. Использование МИС увеличивает скорость отделения и отмывания твердой фазы, содержащей антигены или антитела, на промежуточных этапах анализа, что приобретает особую значимость при проведении индикации. С.Д. Гавснский с соавт. Магнитные сорбенты МС представляют собой полимерные микрогранулы с включенным в них магнитным материалом. Наличие магнитного материала в гранулах позволяет значительно расширить возможности применения сорбента и ускорить манипуляции на всех этапах его использования Лукин с соавт. Ефременко В. И., Владимцсва И. В., Жарникова И. С., i К. В ряде работ представлены различные способы получения МС на основе различных материалов Пушкарь В. Г. с соавт. Ефременко В. И., Ефременко В. И., Афанасьев Е. Н., Владимцева И. В., Жарникова И. В., . Для приготовления МС используют материалы, удовлетворяющие следующим требованиям инертность но отношению к биологическим препаратам, выраженные ферромагнитные свойства, мелкодисперсное состояние, коррозионная устойчивость в водной среде, хорошая вюиочаемость в полимерные микрогранулы, стабильность свойств, механическая прочность и гидрофильная поверхность. Многие известные материалы в полной мере не отвечают вышеперечисленным требованиям Ефременко В. И., Владимцова И. В., Жарникова И. В., . В то же время латексы и биологические клетки являются почти идеальными носителями, но не обладают магнитными свойствами. Основными недостатками получения МС на основе органических и неорганических материалов являются сложность, длительность, высокие энергозатраты при осуществлении этапов технологического процесса. Современные достижения в области химии синтеза ферромагнитных материалов, опубликованные в различных работах, составили основы методов, позволяющих придавать магнитные свойства биологическим объектам за счт образования оксида железа непосредственно в биологических клетках Ефременко В. И., Калькой С. М., Гончаров В. И., . Для приготовления МС используют материалы, удовлетворяющие следующим требованиям инертность но отношению к биологическим препаратам, выраженные ферромагнитные свойства, мелкодисперсное состояние, коррозионная устойчивость в водной срсдс, хорошая вюиочаемость в полимерные микрогранулы, стабильность свойств, механическая прочность и гидрофильная поверхность.