Пролиферативный потенциал культивируемых клеток, полученных от лиц разного возраста

• Автор: Гецадзе, Хатуне Акакиевна
• Шифр специальности: 03.00.17
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Тбилиси
• Количество страниц: 144 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

В ВЕДЕ Н И Е.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .

1.1. Теории старения клетон .

1.2. Ограниченность пролиферативного потенциала

клеток

1.3. Гетерогенность клеточной популяции

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ .

3.1. Подбор питательных сред, условии взятия

биопсии и методик клонирования

3.2. Пролиферативная способность клеток го при длительном культивировании .
3.3. Пролиферативный потенциал клеток разного тканевого происхождения
3.4. Клональная гетерогенность фибробластов человека.
3.5. Индивидуальная изменчивость пролиферативного потенциала диплоидных фибробластов человека
3.6. Пролиферативный потенциал клеток от долгожителей
3 А КЛЮ ЧЕН ИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Программа клеточного старения предполагает наличие биологических часов, которые считают количество делений клеток. Повидимому, в данном случае действует универсальный механизм развития биологических систем, который пока не изучен, хотя предложены две гипотезы, объясняющие счет делений изменениями в ДНК при репликации. Согласно модели Оловникова 1 , соматичесние клетки должны терять терминальный сегмент ДНК при каждом цикле репликации. Когда жизненноважная генетическая информация удаляется вместе с терминальным сегментом, клетка теряет жизнеспособность. Модель КоШДоу ц. Ц8 допускает последовательную модификацию повторяющихся последовательностей в ДНК при помощи специфических ферментов. Число подсчитанных делений находится в прямой зависимости от числа повторностей. Ути гипотезы подтверждаются рядом авторов 9, 7 . ДЬчо подсчетом делений была отвергнута исследователями, изучающими клональную гетерогенность клеточной популяции , , 7, 9, 0 . Большинство этих авторов считает, что потеря потенциала роста в индивидуальных клонахстохастичесний процессии предполагают, что регуляция роста, скорее всего5функция популяции клетон, а не отдельных клеток. К стохастическим теориям старения относятся теории соматических мутаций и теория ошибок. Для объяснения старения 5а. Смерть клетки наступает, когда мутационный груз превышает критический уровень. В результате число постмитотических клеток уменьшается, а общая функциональная активность организма снижается. Модификацию гипотезы Сциларда представляет собой предположение 6 , что ограниченная продолжительность жизни культуры клеток вызвана накоплением ошибок при репликации ДНК, которые инактивируют часть генома,и в ДНК делящихся клеток число ошибок увеличивается подобно тому, как увеличивается фон при многократной пересъмке фотографии, в результате чего они теряют резность. Однако, имеются основания считать,что накопление генетических нарушений не является причиной старения культивируемых клеток . Было показано 8 , что при понижении температуры до С продолжительность жизни клеток не увеличивается, хотя доля клеток с хромосомными аномалиями,а также анеуплоидных и полиплоидных клеток значительно уменьшается. Сильным аргументом против гипотезы накопления ошибок служит трансформация пострепликативных клеток онкогенным вирусом А с образованием клеток с неограниченным потенциалом делений , , , 5 . Маловероятно, что при трансформации происходит исправление накопившихся случайных ошибок. Против мутационной теории старения свидетельствуют работы 3 , в которых показана принципиальная обратимость изменений генома в дифференцированных клетках взрослых животных. А КоМЫлу обрабатывали фибробласты лгких эмбриона человека МНС 5 колхицином 3 б ч. Выживающая популяция содержала около тетраплоидных клеток, которые продолжали делиться. Продолжительность их жизни не отличалась от продолжительности жизни диплоидных клеток. Сопоставима и скорость их роста. Если бы причиной смерти клеток было накопление мутации , то тетраплоидные клетки должны были бы обладать большей устойчивостью и имели бы большую продолжительность жизни. Было также показано , что диплоидные фибробласты кожи имеют ту же продолжительность жизни, что и тетраплоидные. При сравнении ДНК ранних и поздних пассажей культивируемых диплоидных фибробластов новорожднного была обнаружена достоверная разница в числе разрывов 3 , что свидетельствует в пользу гипотезы о накоплении при старении в культуре повреждений ДНК. В многочисленных вариантах этой теории явно или скрыто содержится мысль о том, что существенны в первую очередь мутации, происходящие в неделящихся, необновляющихся клетках. Менее важны мутации в клетнах, активно пролиферирующих тканей,поскольку эти клетки могут замещаться новыми. ИойЛлу о1 нгхо1 0 предложили математическую модель для теории соматических мутаций. Она легко объясняет ограниченность продолжительности жизни диплоидных фибробластов в культуре при условии, что скорость мутационного процесса достаточно велина.