Исследование молекулярно-генетической природы фенилкетонурии в выборках российских больных

• Автор: Степанова, Анна Александровна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Количество страниц: 136 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение.

Актуальность темы.

Цель исследования.

Задачи исследования.

Научная новизна.

Практическая значимость.

Положение выносимые на защиту.

Обзор литературы

История изучения Фенилкстонурии

Распространенность заболевания.
Клиникобиохимическая характеристика гинерфенилаланинемии
Общая характеристика аминокислоты фенилаланин.
Варианты гинерфенилаланинемии.
Клиническая характеристика больных ФКУ
Биохимическая дифференциальная диагностика ГФА
Феногевотиличсская корреляция при классической ФКУ.
Феногенотипичсская корреляция при мутациях в гене
Молекулярные основы ФКУ
Белок ФАГ.
Ген РАН.
Мутации гена РАГ.
Полиморфные маркеры гена РАН
Белок
Геи .
Мутации в гене
Белок .
Ген
Мутации в гене .
Материалы и методы исследования
Материалы
Методы.
Выделение геномной ДНК
Метод полимеразной цепной реакции.
Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов ПДРФанализ
Электрофорез в ПААГ.
Метод анализа
Определение нуклеотидной последовательности ДНК.
Статистическая обработка результатов
Результаты и обсуждение.
Разработка системы регистрации наиболее частых мутаций в гене РАН с
помощью 4 реакций амплификациирестрикции
Распределение наиболее частых мутаций в выборках больных.
Поиск мутаций в гене РАН методом анализа с последующим
секвенированисм
Анализ внутригенных полиморфизмов V и аллелей
Фсногснотииическая корреляция
Молекулярногенетическое исследование генов и
Практическое применение.
Заключение.
Выводы 1
Список литературы


Для больных, у которых не выявлено ни одной мутации в гене РАН, провести молекулярногенетическое исследование всей кодирующей последовательности и областей экзонинтронных соединений генов тетрагидробиоптеринового обмена. Изучить полиморфизм локусов ВТК и УЫТЯ гена РАН у больных фенилкетонурией, провести оценку степени ассоциации мутаций гена РАН с определенными гаплотипами. Впервые в России проведено молекулярногенетическое исследование всей кодирующей последовательности и экзонинтронных соединений генов РАН. РТЯ, методом ЭЗСР анализа с последующим ссквенированием. Получены данные о спектре и частоте мутаций в гене РАН у больных, обратившихся в медикогенетические консультации Воронежа, Екатеринбурга, Самары, Московской области, Курска, Вологды, Архангельска, Удмуртии, и научноконсультативного отделение ГУ МТТ1Ц РАМН с клиническим диагнозом фенилкетонурия. Впервые в России проведена молекулярногенетическая диагностика неклассической ФКУ с выявлением мутаций в гене РГ5. РАН с1е2п1, р. А1а2Уа1, р. РТЗ р. РЯ р. Л1а5Азр. Проведено исследование по выявлению наиболее распространенных мутаций гена РАН в различных регионах России. Создана диагностическая система, позволяющая выявлять ,8 мутаций в гене РАН с клиническим диагнозом ФКУ. Разработана диагностика атипичной ФКУ, основанная на анализе генов тетрогидробионтеринового обмена РТЗ и ЮРЛ, методом ввСР анализа с последующим сиквенированием всей кодирующей последовательности и экзонинтронных соединений. Разработана экономичная система анализа мутаций в гене РАН в 4 реакциях, которая позволяет регистрировать ,8 мутаций у больных ФКУ в России. Обнаружены межпопуляционные различия по частоте встречаемости отдельных мутаций в гене РАН между российскими и европейскими выборками больных для всех наиболее частых мутаций. Наиболее часто встречающимися у Российских больных ФКУ являются мутации р. Аг8Тгр ,4, р. Рго1Ьеи4,, 1У0Ща 4,1, р. АгЮ1п 3,3 1У21а 2,3, р. АТгр 1,, р. Аг8С1п 1,, 1У51 1,. Частая для больных ФКУ из Европейских популяций мутация р. ТЬг выявлена у 1 из 2 российских пациентов 0,2, что позволяет исключить сС из числа частых в России. Обнаружены четыре новые ранее не описанные в базе данных РАШЬ мутации в гене А4Я 1с2т, р. А1а2Уа1, р. Азр, р. Ие1Азп. Впервые разработана система и проведено исследование мутаций в генах тетрогидробиоптеринового обмена у больных ФКУИ и ФКУШ. В гене РТЯ обнаружены повторяющиеся описанные ранее мутации р. АвпЬуз и р. ТИгЮбМе частота которых составила но 9,1 для каждой. Обнаружены новые не описанные ранее в базе данных мутации р. Уа IУ1 а, . гене РТЗ с частотой 4,6. Выявлена в гене ОРЯ новая мутация р. АЫЗбАБр, частота которой составила 7,6. Преобладание гаплотипа 00 8ТКЛЧТ на хромосомах с р. Лг8Тгр свидетельствует о наибольшем распространении в российской популяции мутации Балтославянекого происхождения. Впервые классическую форму фенилкетонурии описал норвежский биохимик и психиатр i в году. Он идентифицировал, что это заболевание является аутосомнорсцсссивным. Исследуя группу умственно отсталых детей с особым мышиным запахом, он обнаружил у них экскрецию фенилпировиноградной кислоты ФПК с мочой. i предположил, что незаменимая аминокислота фенилаланин ФА является наиболее вероятным источником избытка ФПК в моче, основой этого предположения явилось структурное сходство ФПК с ФА. Позднее i определил, что характерный для больных детей запах мочи, напоминающий запах мочи мыши, обусловлен присутствием фенилацетата. i высказал гипотезу о расстройстве метаболизма ФА, которое он назвал Iii vi. Термин фенилкетонурия ФКУ, который закрепился за этим заболеванием до настоящего времени, был введен и i в году . Лишь спустя лет после того, как i описал фенилкетонурию, удалось выявить блокированное звено в цепи последовательных реакций нормального метаболического пути ФА. vi в году провел серию экспериментов vi .