Рекомбинация точковых мутаций и делеций в гене Lys2 у дрожжей-сахаромицетов

• Автор: Чернов, Юрий Олегович
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Ленинград
• Количество страниц: 167 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Генетический анализ механизмов рекомбинации у дрожжей .

1. Тиш рекомбинации и методы ее изучения .

2. Тетрадный анализ мейотической рекомбинацииII

3. Методы анализа митотической рекомбинации

4. Генетический контроль рекомбинации

5. Зависимость параметров рекомбинации от расположения

и црироды рекомбинирующих мутаций

6. Постановка задачи.

Глава П. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
1. Обозначения и сокращения .
2. Штаммы дрожжей
3. Среды и условия культивирования.
4. Генетические методики.
Глава Ш. ПОЛУЧЕНИЕ ШТАММОВ ДРОЖЕЙ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ВНУТРИГЕННОЙ РЕКОМБИНАЦИИ И КАРТИРОВАНИЕ МУТАЦИЙ
1. Получение и характеристика мутаций 1уа2.
2. Генетическая локализация мутаций
в двухсайтовых и трехсайтовых скрещиваниях .
3. Гомозиготизация мутации i7 при рекомбинации
в локусе 2
4. Получение и характеристика мутанта нгс.
5. Заключение
.
Глава . АНАЛИЗ ПРОДУКТОВ РЕКОМБИНАЦИИ МУТАЦИЙ i
1. Получение диплоидов, гетероаллельных
по мутациям 2.
2. Получение и характеристика митотических рекомбинантов .
3. Анализ продуктов митотической рекомбинации в двухсайтовых скрещиваниях
4. Анализ продуктов митотической рекомбинации в трехсайтовых скрещиваниях
5. Получение и анализ мейотических рекомбинантов Ъуа . .
6. Заключение.
Глава У. ОБСУЖДЕНИЕ
1. Ген 2 как модель для изучения мутационного
процесса и рекомбинация
2. Маркерэффекты мутаций 2
3. Влияние физических и генотипических факторов на внутривенную митотическую рекомбинацию
4. Сравнение внутригенной рекомбинации делеций
в митозе и в мейозе у дрожжей
5. Возможные молекулярные механизмы обнаруженных маркерэффектов.
ВЫВОДУ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Имеющиеся молекулярнобиологические данные указывают на сходство в механизмах транспозиции Ту и бактериальных транспозонов см. ii i. Своеобразные системы рекомбинации существуют в митохондриях дрожжей см. i, Самсонова, . Настоящий обзор посвящен генетическому анализу механизмов гомологичной рекомбинации ядерных генов дрожжей. Будут рассмотрены основные методы анализа продуктов мейотической и митотической рекомбинации и их разрешающая способность. Затем мы остановимся на генетическом контроле гомологичной рекомбинации и в заключение разберем данные о роли структуры и гомологии нуклеотидных последовательностей в рекомбинации. Гомологичная рекомбинация регулярно происходит в мейозе у дрожжей. Для характеристики продуктов мейотической рекомбинации очень удобным оказалось применение тетрадного анализа. У дрожжей четыре гаплоидных споры, образующиеся в результате мейоза из одной диплоидной клетки, остаются внутри общей оболочки аска. Можно разъединить споры с помощью микроманипулятора и анализировать индивидуальные споровые клоны. Каждая спора несет одну из четырех хроматид двунитевых молекул ДНК, являющихся продуктами одного мейоза. i i. Это явление получило название генной конверсии. Для разных локусов дрожжей частота образования конвертантных тетрад варьирует от 0,6 до i i. При изучении конверсии нонсенсмутаций и нонсенссупрессоров у дрожжей С. Фогель и Р. По другим гетерозиготным маркерам, локализованным в той же хромосоме, в конвертантных тетрадах обычно наблвдается нормальное менделевское расщепление. Таким образом, в ходе конверсии происходит перенос участка ДНК с одной гомологичной хромосомы на другую. Этот перенос может затрагивать как сразу две нити двунитевая конверсия, так и только одну нить однонитевая конверсия . В последнем случае хроматида содержит гибридную ДНК. В результате первого митотического деления после мейоза каждая нить ДНК хроматида образует индивидуальную хромосому. Эти хромосомы расходятся в дочерние клетки. У грибов с восьмиспоровыми асками i, и др. Таким образом, однонитевая конверсия может быть зарегистрирована в восьмиспоровых асках по расщеплео. i, . Постмейотическое расщепление убедительное доказательство существования гибридной ДНК при рекомбинации у грибов. У дрожжей, которые образуют четырехспоровые аски, постмейотическое расщепление было зарегистрировано по возникновению теорад, содержащих мозаичные клоны i, . i. ДНК, образующихся после мейоза. Это позволяет сопоставлять данные тетрадного анализа у дрожжей с результатами, полученными на грибах, которые образуют восьмиспоровые аски. С.Фогель с соавторами i i. ТИПОВ тетрад У сегеvii. Они проанализировали в общей сложности II моногибридное расщепление по разным маркерам. Суммарные результаты приведены в таблице I. Чаще всего наблюдалось менделевское расщепление нормальное 44 то есть тетрада 22 без мозаичных клонов. Были обнаружены также расщепления 80 и 08 по мнению авторов, это результат митотической гомозиготизации одной из аллелей еще до мейоза. Остальные расщепления в общей сложности около 4,5. В большинстве конвертантных тетрад наблюдалась двунитевая конверсия расщепления 62 и 26. Тетрады с постмейотическим расщеплением обычно содержали один мозаичный клон расщепления 53 и 35 на два порядка реже встречались тетрады с двумя мозаичными клонами аберрантное 44. На основании этих данных авторы пришли к выводу, что гибридная ДНК у дрожжей образуется преимущественно в одной хроматиде является асимметричной, а расщепление аберрантное 44, так же, как и другие минорные расщепления 71, 17, аберрантные 62 и 26, возникает в результате совпадения двух актов конверсии. У других грибов например, i получены генетические данные, свидетельствующие о существовании и асимметричной, и симметричной гибридной ДНК i, , . Данные . Встречаемость разных типов расщеплений в тетрадах дрожжейсахаромицетов по Роее а.