Влияние R плазмид группы Inc W на онкогенную и фитогормональную активность штаммов Agrobacterium Tumefaciens

• Автор: Фомичева, Виктория Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Минск
• Количество страниц: 143 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Общая характеристика i

i II

1.2 i плазмиды как этиологические агенты корончатых галлов. .

1.2.1 Генетика i плазмид

1.2.2 Механизмы интеграции i в геном растения . .

1.3 Роль фитогормонов В Опс фенотипе .

i . .

1.4 Фитогормональная активность i

i , vi , i i .
1.5 Биологические факторы, ограничивающие
онкогенность . i .
1.5.1 Агроцины как один из биологических методов борьбы с корончатогалловой болезнью. .
1.5.2 Влияние плазмиды группы i на
ОНКОГенНОСТЬ . i .
1.6 Заключение по обзору.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1 Бактериальные штаммы и плазмиды .
2.2 Среды и реактивы ,
2.3 Методы исследований
2,31 Культивирование бактерий
2.3.2 Конъюгация
2.3.3 Анализ трансконъюгантов.
2.3.4 Биохимический тест на i
i .
2.3.5 Аналитическое выделение плазмид . .
2.3.6 Определение продукции индолилуксусной
кислоты
2.3.7 Количественное определение белка .
2.3.8 Очистка эфира от перекисей
2.3.9 Определение онкогенности исследуемых штаммов.
2.3. Элиминация плазмид и 8
2.3. Химическая комплементация экзогенной ИУК
фенотипа трансконъюгантов 8 и i. .
2.3. Определение чувствительности штаммов .i к генцианвиолету и дезоксихолату . .
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1 Связь между продукцией ИУК И Опс фенотипом .i
3.2 Корреляция между типом плазмиды i в штамме
.i И МОрфОЛОГИеЙ ОПУХОЛИ . . .
3.3 Свойства трансконъюгантов .i , несущих плазмиды из групп I .V , I i
I X.
3.3.1 Получение трансконъюгантов, определение
частот переноса плазмид, уровней лекарственной резистентности .
3.3.2 Изучение онкогенности штаммов .i АТСС 5, С и их дериватов с
плазмидами
3.3.3 Электрофоретический анализ плазмид в штам
мах . i АТСС 5, С и их дериватах с плазмидами. . . . .
3.3.4 Восстановление онкогенности трансконъюгантов .i АТСС 5 после удаления плазмид и 8
3.3.5 Состояние липополисахарида клеточной стенки у штаммов .i АТСС 5,
С и их трансконъюгантов с плазмидами ИЛИ 8 .
3.4 Влияние плазмид на продукцию ИУК штам
мом . i АТСС 5, содержащим i 5
3.5 Химическая комплементация фенотипа
трансконъюгантов 8 и i с помощью
экзогенной ИУК
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ .
ЛИТЕРАТУРА


ИЗ группы I I, ИЗ группы I X, а также 7 из группы i не обладают способностью подавлять фенотип штаммов . ИУК у целого ряда штаммов . И . Впервые показано, что антионкогенное действие плазмид или 8 сочетается с их способностью снижать уровень продукции КУК трансконъюгантами ДО уровня неонкогенных штаммов . .i, причем обработка инфицируемых растений экзогенной ИУК обеспечивает химическую комплементацию фенотипа трансконъюгантов, содержащих плазмиду или 8 , выражающуюся в восстановлении их онкогенности. Элиминация плазмид или 8 из трансконъюгантов ведет к восстановлению онкогенной И фитогормональной функции i плазмиды штамма . АТСС 5. Установлено, что плазмида повреждает иили существенно модифицирует клеточный липополисахарид в трансконъюгантах, несущих i5, в результате чего нарушается прикрепление последних к клеточной стенке растения. Однако этот эффект является строго специфичным, поскольку наблюдается только в одном штамме . АТСС 5 и отсутствует в штамме С. Плазмида 6 не оказывает аналогичного эффекта в штаммах . АТСС 5 и С. Подавление Опс фенотипа i плазмид вирулентных штаммов . ПЛаЗМИДамИ И 8 ИЗ Группы I V. ПреДСТЭВляет большой интерес в практическом отношении. Мы предполагаем, что такое взаимодействие плазмид с i , приводящее к подавлению онкогенной активности штаммов . ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. I.I Общая характеристика i i. Впервые около ста лет назад v выделил из опухоли винограда бактерию, впоследствии названную i с соавторами I9II i i ОТ ЛЭТИНСКОГО опухоль, i делаю. В настоящее время бактерию, вирулентные штаммы которой индуцируют неопластическое заболевание растений корончатые галлы, принято называть i i. С клубеньковыми бактериями рода ii к семейству i . Согласно РУКОВОДСТВУ это аэроб, широко распространенный в природе, представляющий собой короткие подвижные палочки с полярными жгутиками , размером 0,40,8 х 1,03,0 мкм, способный иногда к. Калинин с соавт. Спор не образует. При культивировании на питательном агаре образует маленькие, круглые, несколько приподнятые влажноблестящие белые просвечивающиеся колонии, на скошенном агаре слизистый блестящий налет. В мясопептонном бульоне растут медленно, причем можно наблюдать образование большого количества инволюционных форм в виде у образных фигур, похожих на бактероиды у клубеньковых бактерий. Рост бактерий отмечается в широком интервале температур от 0С до С, оптимум С С, термальная точка гибели бактерий С. Оптимальная для роста агробактерий реакция среды нейтральная. Источником азота для . .i принадлежит к олигонитрофильным бактериям и довольствуется, повидимому, минимальным количеством азота в среде. .i характеризуется хемоорганотрофией. Для некоторых штаммов достаточно присутствия в среде простых углеводов глюкозы, сахарозы, лактозы, галактозы и т. Однако другие штаммы растут лишь при наличии в среде витаминных добавок . Калинин с соавт. Важной особенностью . ЯВЛЯвТСЯ его СПОСОбНОСТЬ сбраживать лактозу с образованием 3кетолактозы, поэтому этот биохимический тест широко используется ДЛЯ идентификации . , ,. .i продуцирует i vi Ц6ЛЫЙ ряд веществ, прямо или косвенно влияющих на рост растений. Бактерии могут синтезировать большое количество биотина, рибофлавина, немного пантотеновой кислоты ,. В фильтратах культуральной жидкости, экстрактах из бактериальной массы можно обнаружить ЦИТОКИНИН . i, ii, . Вирулентные И авирулентные формы . В индолилуксусную кислоту , V, , Vi ,. .i не способны длительное время сохраняться в почве, свободной от растительных остатков. Жизнеспособность и вирулентность бактерий в сильной степени зависят от наличия почвенных антагонистов, а также от химических и физических свойств почвы, в частности, ее влажности и кислотности Израильский с соавт. У .