Генетический контроль репарационной и мутаторной функций плазмиды Col Ib-P9

• Автор: Копылов, Владимир Михайлович
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 199 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ .

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава I. Общие представления об основных путях репарации

бактерий . Ю

1.1. Фотореактивация .

1.2. Эксцизионная репарация. II

1.3. Пострепликативная репарация

1.4. Индуцибрльная репарация, сопровождающаяся ошибками, или БОВ репарация

1.5. Генетический контроль УФиндуцированного мутагенеза и его связь с репарацией ДНК

Глава 2. Действие плазмид на репарацию ДНК клетки и

связанные с ней процессы.
2.1. Связь действия плазмид с различными репаративными путями клетки
2.2. О возможной роли интегративной супрессии в действии плазмид на выживаемость клеток и индуцированный мутагенез
2.3. Анализ плазмидных мутаций, влияющих на эффект плазмид
2.4. Изучение продуктов плазмидных генов, ответственных за эффект плазмид на репарацию ДНК и связанные с ней процессы
ЧАСТЬ II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Глава I. Материалы и методы
Глава 2. Характеристика плазмиды Со1 ГЬР9 .
стр.
Глава 3. Влияние плазмиды 1ЪР9 на выживаемость клеток i при действии различных агентов, повреждающих ДНК
3.1. Влияние плазмиды 1ЪР9 на выживаемость
клеток дикого типа.
3.2. Действие плазмиды ГЬР9 на выживаемость клеток, дефектных по эксцизионной репарации
3.3. Действие плазмиды на выживаемость клетокЕ.соИ , дефектных по рекомбинации и репарации
3.4. Действие плазмиды 1ЪР9 на выживаемость
после УФоблучения мутантов ишиС и v
3.5. Действие аминокислотного голодания на защитный эффект ГЬР9 Юз
Глава 4. Влияние плазмиды на индуцированный мутагенез
4.1. Индукция мутаций под действием УФоблучения
4.2. Индукция мутаций под действием НГ и 2АП НО
4.3. Влияние плазмиды 1ЪР9 на условноспонтанный мутагенез в штамме . НО
Глава 5. Влияние плазмиды 1ЪР9 на индукцию синтеза
колицина I . П
Глава 6. Реактивация облученного ультрафиолетом фага Л в
клетках .i , содержащих плазмиду 1ЪР9
6.1. Реактивация УФоблученного фага Л I7 в
необлученных клетках
6.2. Реактивация фага Л с после УФоблучения в
облученных клетках .
Глава 7. Рекомбинация в клетках .i 9 содержащих плазмиду 1ЪР9
Глава 8. Анализ мутаций плазмиды 1ЪР9 , изменяющих
ее действие на УФиндуцированный мутагенез
8.1. Получение и характеристика 1ЪТп5 мутантных плазмид.
8.2. Локализация 1Ъ 6Тп5 мутации, снимающей действие плазмиды на УФмутагенез
8.3. Влияние плазмиды 1ЪР9 на выживаемость и мутагенез клеток i после УФоблучения .
Глава 9. Сравнение действия плазмид 1ЪР9 и и их мутантов на ИСК I и выживаемость клеток при действии МС и УФоблучения.
9.1. Действие плазмиды рКШ. на ИСК I
9.2. Влияние плазмиды I на выживаемость клеток после их обработки МС.
9.3. Действие мутантных плазмид и I5 на ИСК I и выживаемость клеток после обработки МС.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


ИроШыла выделена и очищена ДНКполимераза III, которая обладала экзонуклеазной активностью на озвученной и обработанной эндонуклеазой III ДНК фага Т7 гидролиз фосфодиэфирных связей между основаниями происходил одновременно с полимеризацией ДНК ivi . Но даже, когда была блокирована работа всех трех полимераз в клетках . Повидимому, это объясняется участием свободных экзонуклеаз в удалении димеров, в частности, экзонуклеаз V и VII. Специфическая однонитевая экзонуклеаза VII деградирует нить ДНК с 3 и 5 концов. Было показано, что в УФоблученной ДНК после надрезания нити у тиминового димера экзонуклеаза VII удаляет большой фрагмент нити ДНК в отличие от ДНК полимеразы I, которая удаляет несколько нуклеотидов , i , . Исследование роли различных экзонуклеазных активностей было проведено Чейз с соавт. V гесВ7 С , экзонуклеазе VII x и экзонуклеазной активности ДНКполимеразы I . Авторы показали очень слабое снижение вырезания димеров в мутанте гесВ, С x . Вырезание димеров заметно снижалось в мутантах гесВ, С и x особенно сильно оно было снижено в мутанте, дефектном по всем трем исследуемым экзонуклеазным активностям. Эти данные подтвердили ведущую роль экзонуклеазной активности ДНКполимеразы I в вырезании тиминовых димеров и показали, что клеточные экзонуклеазы также играют определенную роль в ЭР, особенно в мутанте . Купер и Ханавальт на основании анализа включения тяжелой и легкой метки в ДНК после УФоблучения пришли к выводу, что кроме репаративного синтеза РС нитей ДНК короткими фрагментами до нуклеотидов, находящегося под контролем гена , происходит РС длинными фрагментами до нуклеотидов, который контролируется генами гесА игесВ , , а,в. Недавно Купер , исследовала дозовую зависимость, кинетику и генетический контроль РС длинными фрагментами. Она пришла к выводу, что 9 УФповреждений репарируется ДНКполимеразой I короткими фрагментами до нуклеотидов и 1 репарируется длинными фрагментами нуклеотидов. Синтез длинными фрагментами контролируется генами гесА и1ехА , требует синтеза белка и не сопровождается ошибками. Однако, Купер не удалось окончательно сделать вывод о том, какая из ДНКполимераз 1,,1 может осуществлять индуцибельный РС длинными фрагментами. Купер также обнаружила РС относительно короткими фрагментами ДНК по нуклеотидов такой РС четко выявляется в мутанте гесв,с и снижен в мутантахро1В и , . Изучение температурочувствительных мутантов ДНКполимеразы III показало, что она ведет репаративный синтез длинными фрагментами , i , . На основании данных исследования двойного мутанта ро1А,С и тройного ро1А,В,С Маскер с соавт. ДНКполимеразы II в РС. Впоследствии это предположение подтвердилось ДНКполимераза II также ведет РС длинными фрагментами , i , . ЭР короткими фрагментами может протекать в буфере и не подавляется ХФ, в то время как репарация длинными фрагментами зависит от ростовой среды и подавляется ХФ , i , . Ветвь эксцизионной репарации, независимой от ростовой среды, находится под контролем генов роХА и ветвь, зависимая от ростовой среды, находится под контролем генов1ехА , гесА гесВ . В клетках i после УФоблучения репликация ДНК останавливается в местах локализации пиримидиновых димеров. Однако было обнаружено, что за пиримидиновыми димерами происходит реинициация синтеза ДНК с образованием пробела, причем его длина равна величине фрагмента Оказаки, т. Обычно для исследования механизма пострепликативной репарации используются мутанты, у которых отсутствует ЭР. Было показано, что вновь синтезированная ДНК мутантов v после прохождения цикла репликации была низкомолекулярной и содержала пробелы, которые, однако в процессе дальнейшей инкубации клеток в ростовой среде восстанавливалась за 0 мин , , . Такая репарация получила название пострепликативной ПРР. В настоящее время обсуждается три основных механизма ПРР, протекающих в клетках . ДНК на поврежденных матрицах или пострепликативный обход повреждений. Основным механизмом ПРР в клетках Есо является рекомбинационный обмен между сестринскими дуплексами на пробелах нитей ДНК напротив пиримидинового димера .