Роль ДНК-топоизомераз I и II типов в организации синаптонемных комплексов и хромосом в сперматогенезе у мыши

• Автор: Сухачева, Татьяна Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 148 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Особенности сперматогенеза млекопитающих

1.2. ДНКтопоизомераза IIструктурнофункциональный компонент хроматина.

1.3. Действие на сперматогенез вепезида специфического ингибитора

ДНКтопоизомеразы II

1.4. ДНКгогюизомераза I структурнофункциональный

компонент хроматина.

1.5. Действие на сперматогенез камптотецина специфического ингибитора

ДНКтопоизомеразы I

1.6. Таксол специфический стабилизатор
микротрубочек.
1.7. Месна модификатор токсического действия противоопухолевых
препаратов
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Схема введения препаратов самцам мыши
2.2. Гистологический анализ срезов семенника мыши.
2.3. Электронномикроскопический
анализ срезов семенника мыши
2.4. Анализ тотальных препаратов синаптонемных комплексов
сперматоцитов I порядка мыши
2.5. Светомикроскопический анализ препаратов мейотических хромосом сперматоцитов на стадиях диакинеза
и метафазы I мыши.
2.6. Иммунофермент ный анализ
сывороток крови мышей.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ
ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Анализ структуры синаптонемных комплексов, иатоморфология мейоза и сперматогенеза мыши
в контроле и после введения препаратов.
3.1.1. Контроль
3.1.2. Действие ингибитора ДНКтопоизомеразы II
вепезида
3 Действие ингибитора ДНКтопоизомеразы I
камгтготецина.
3.1.4. Действие таксола
3.1.5. Действие месны.
3.2. Сравнение уровня аутоантител в сыворотках
крови контрольных и подопытных мышей
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. Роль ДНКтопоизомеразы II типа в организации синаптонемных комплексов и хромосом
в мейозе и сперматогенезе мыши
4.2. Роль ДНКтопоизомеразы I типа в организации синаптонемных комплексов и хромосом
в мейозе и сперматогенезе мыши
4.3. Подтверждение специфичности действия ингибиторов ДНКтопоизомераз I и II типов на структуру синаптонемных комплексов
и хроматина в мейозе мыши.
4.4. Нарушение сперматогенеза мыши и возможность развития аутоиммунного процесса
Заключение
Список литературы


Для выяснения вопроса о возможном развитии аутоиммунного процесса в тестикулярной ткани после введения ингибитора ДНКтопоизомеразы II вепезида и цитостатика таксола был проведен иммуноферменп 1ый анализ сывороток крови мышей, взятых в разные сроки после введения препаратов. В рамках фундаментального исследования была поставлена практическая задача исследования возможности снижения побочных эффектов вепезида итаксола на сперматогенез с помощью модификатора токсического действия противоопухолевых препаратов месны. Таким образом, целью настоящего исследования стало определение роли ДНКтопоизомераз I и II типов в организации мейотических хромосом и синаптонемных комплексов в ходе сперматогенеза у мыши. Провести сравнительный анализ нарушений структуры хроматина и синаптонемных комплексов сперматоцитов I порядка мыши в профазе I мейоза после введения ингибиторов ДНКтопоизомераз I и II типов на основании электронномикроскопического анализа препаратов синаптонемных комплексов. На основании результатов светового и электронномикроскопического исследований ткани семенников мыши оценить последствия ингибирования ДНКтопоизомераз I и II типов для течения мейоза и сперматогенеза. Экспериментально создать модели мейотических мутаций по генам ДНКтопоизомераз I и II типов у самцов мышей с помощью ингибиторов камптотецина и вепезида соответственно. Оценить специфичность действия камптотецина и вепезида на структуру мейотических хромосом и течение сперматогенеза на основании данных, полученных при исследовании сперматогенеза мыши после введения им таксола препарата, стабилизирующего микротрубочки. Исследовать возможность снижения токсического эффекта вепезида итаксола на сперматогенные клетки мыши с помощью модификатора токсического действия противоопухолевых препаратов месны. Выявить роль аутоиммунного ответа в деструктивном процессе, развивающемся в семеннике мыши в ответ на введение таксола и вепезида. Все исследованные препараты используются в медицинской практике в качестве противоопухолевых агентов, что делает необходимым изучение характера и механизмов их действия на клетки сперматогснного ряда. Однако вопрос о возможности наследования приобретенных нарушений структуры хромосом или селекции генетически поврежденных половых клеток до сих пор остается открытым. Таким образом, решение поставленных задач представлялось актуальным для ориентации пациентов репродуктивного возраста в вопросах планирования семьи после окончания химиотерапевтического лечения, а также для ринятия мер безопасности лиц, занятых в производстве противоопухолевых препаратов. Глава 1. Сперматогенез процесс образования мужских половых клеток, который у млекопитающих проходит в эпителиальной выстилке семенных канальцев в семеннике рис. Половые клетки располагаются в инвагинациях питающих клеток клеток Сертоли и в процессе дифферешщровки перемещаются из базального отдела сперматогенного эпителия в адшоминальный. Дифференцировка половых клеток сопровождается многократными митотическими и двумя мейотическими делениями. Стволовые клетки обеспечивают пул долгоживущих резервных стволовых клеток и многократно делящихся дифференцирующихся сперматогониев. Рис 1. Схема сперматогенеза и спермиогенеза у мыши. ЕгЫсеп, Мапеу, , с модификацией. I порядка, которые вступают в профазу I мейоза. На этой стадии происходит синалсис гомологичных хромосом и рекомбинация между участками гомологичных хромосомом. Для этого между конъюгирующими гомологами формируется уникальная нуклеопротеиновая структура синаптонемный комплекс СК , Богданов, Богданов, Коломиец, Богданов и др. Основными молекулярными компонентами СК являются белки i, , i . . ДНК и РНК , , Карпова и др. , , Горач и др. В соответствии с изменением морфологии мейотических хромосом и СК в профазе I выделяют пять различных по протяженности стадий рис. На стадии лептотены каждая хромосома состоит из двух сестринских хромата, на границе раздела которых формируется белковый тяж осевой элемент ОЭ. Р. Рис. Продолжительность стадий профазы I мейоза по .