Цитогенетическая характеристика эякулированных клеток сперматогенного ряда человека

• Автор: Федорова, Ирина Дмитриевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 143 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Оглавление.

Список сокращений.

Введение

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Особенности сперматогенеза человека

1.2. Генстичсский контроль сперматогенеза.

1.3. Клиническая оценка сперматогенеза

1.4. Механизмы образования сперматозоидов с хромосомными аномалиями

1.4.1. Аномальное спаривание хромосом.

1.4.2. Нарушение формирования синаптонемного комплекса

1.4.3. Роль рекомбинации в нарушении расхождения хромосом.
1.4.4. Нарушения сегрегации хромосом и сестринского хроматидного сцепления
1.4.5. Функционирование контрольных точек сперматогенеза
1.5. Факторы, влияющие на образование хромосомных аномалий в
сперматозоидах
1.5.1. Структура хромосом.
1.5.2. Аппарат деления клетки.
1.5.3. Межхромосомный эффект
1.5.4. Физиологические параметры и клеточное окружение
Глава 2. Материал и методы
2.1. Материалы
2.1.1. Характеристика обследованных пациентов.
2.1.2. Характеристика материала.
2.2. Методы.
2.2.1. Приготовление препаратов из образцов эякулята и биоптата яичка.
2.2.2. Дифференциальное окрашиваиие хромосом.
2.2.3. Количественный кариолопческий анализ ККА незрелых половых
клеток НПК
2.2.4. Флуоресцентная i i гибридизация.
2.2.4.1. Характеристика ДНКзондов, использованных для гибридизации i i
2.2.4.2. Методика проведения деконденсации головок сперматозоидов
2.2.4.3. Мечение ДНКзондов
Оценка эффективности мечения ДНКзонда
2.2.4.5. Проведение гибридизация i i.
2.2.4.6. Анализ препаратов и критерии подсчета.
2.2.5. Внутрицитоплазматическая инъекция сперматозоида в ооциты мьппи .
2.2.5.1. Используемые среды
2.2.5.2. Подготовка эякулята к инъекции
2.2.5.3. Получение ооцитов мьппи.
2.2.5.4 Инструменты.
2.2.5.5. Инъекции сперматозоидов.
2.2.5.6. Фиксация ооцитов
2.2.5.7. Анализ препаратов.
2.2.6. Статистическая обработка результатов
Глава 3. Результаты
3.1. Качественный и количественный анализ клеток сперматогенного ряда
3.1.1. Доля и частота встречаемости клеток сперматогенного ряда в эякуляте
человека
3.1.2. Анализ хромосом сперматоцитов.
3.2. Исследование частоты и спектра хромосомных аномалий в
сперматозоидах человека.
3.2.1. Оценка частоты гстсроплоидии в сперматозоидах в норме и при
аномалиях репродуктивной функции.
3.2.2. Цитогенетический анализ хромосомного комплемента сперматозоидов с нормальной и аномальной морфологией головки
3.2.3. Анализ хромосомного комплемента в сперматозоидах пациентов с нарушением кариотипа.
Глава 4. Обсуждение.
4.1. Клетки сперматогенного ряда в эякуляте человека в норме и при
различных нарушениях фертильности
4.2. Частота гетероплоидии в сперматозоидах человека в норме и при
различных нарушениях фертильности.
4.3. Особенности сперматогенеза у пациентов со структурными нарушениями кариотипа
Выводы.
Список литературы


Однако механизмы, лежащие в основе выбора сперматоцита для вступления в мейоз, до сих пор остаются слабо изученными. На сегодняшний день предлагается несколько генов кандидатов на роль основного медиатора вступления сперматоцита в мейоз . . . Во время мейоза хромосомы претерпевают последовательные изменения. Сестринская хроматидная конъюгация обеспечивается двумя независимыми процессами конъюгацией в районе плеч хромосом и конъюгацией в районе центромеры i, , . Конъюгация гомологов происходит на стадии зиготены. На стадии пахитены хромосомы приобретают четкие структуры, становятся различимы биваленты. Отчетливо проявляется хромомерное строение хромосом, позволяющее составлять цитологические карты пахитенных хромосом и использовать их для цитогенетического анализа. В диплотене становятся различимы хиазмы. В диакинезе и метафазе I биваленты четко идентифицируются по форме, которая определяется размером и морфологией хромосом, числом и положением хиазм Гилберт, . В профазе мейоза на стадии лептотенызиготены характерно образование фигуры букета вызванное кластеризацией теломер прикрепление их к участку ядерной оболочки. Считается, что такое выстраивание субтеломерных районов обеспечивает гомологичное спаривание хромосом. На стадии пахитены фигура букета исчезает i, , . На стадии зиготены появляется синаптонемный комплекс СК, образующийся в результате попарной латеральной конъюгации гомологичных хромосом. СК располагается между конъюгирующими хромосомами и имеет вид двух электронноплотных тяжей латеральных элементов ЛЭ, ограничивающего центральную область центрального элемента и соединяющих их поперечных филаментов. Хроматин хромосомы образует петли, прикрепленные к ЛЭ. На поверхности центрального элемента формируются рекомбинационные узелки РУ, которые у человека также называются рекомбинационными полосками i, . Они маркируют места рекомбинации, которые сформируют хиазмы, наблюдаемые со стадии диплотены i, . В ранней диплотене СК диссоциирует из бивалентов и сохраняется только в тех участках, где хромосомы удерживаются вместе хиазмами. Поведение половых хромосом в профазе I отлично от поведения аутосом. В лептотене половые хромосомы, как правило, не выявляются. В пахитсне эти хромосомы образуют половой пузырек. Однако существуют данные, по которым половой пузырек формируется раньше, уже на стадии лептотенызигетены. Расположение и характер конъюгации X и хромосомы точно определить невозможно вследствие сильной конденсации. Исследования СК показывают, что гоносомы конъюгируют дистальными участками коротких плеч в псевдоаутосомном районе, а в некоторых случаях и во втором псевдоаутосомном районе недалеко от X и теломер i . На стадии пахитены достаточно часто выявляется ассоциация гетерохроматиновых районов коротких плеч акроцентричсских хромосом с половым пузырьком, что может приводить к транслокациям . ii, . В диплотене происходит деконденсация половых хромосом, половой пузырек исчезает, а X и хромосомы образуют половой бивалент. Следуег отметить что, в гаметогенезе млекопитающих для сперматоцитов, как и для ооцитов, в диплотене первого деления мейоза характерно выпетливание ДНК, и образование хромосом типа ламповых щеток Гилберт, . Это позволяет транскирибироваться некоторым генам. Чаще всего функционирование этих генов необходимо для обеспечения процессов мейоза и спсрмиогенеза к примеру, для приобретения сперматозоидом подвижности Гилберт, . Однако, возможно, что не только белки, но и синтезируемая РНК участвует в мсйотических процессах в частности, в обеспечении гомологичного спаривания хромосом Vi . В результате первого деления мейоза образуются сперматоциты второго порядка. Они претерпевают эквационное деление деление созревания, в котором происходит расхождение сестринских хроматид в результате диссоциации сестринской хроматидной конъюгации в районе центромеры в анафазе II i, , .