Генетический и эпигенетический контроль считывания стоп-кодонов у дрожжей Saccharomyces cerevisiae

• Автор: Миронова, Людмила Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 240 с. : ил

Таким образом, изучение контроля считывания стопкодонов предоставляет уникальные возможности для рассмотрения с единых позиций изменчивости, обусловленной детерминантами генетической и эпигенетической природы. Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Штаммы. В работе использовали штаммы дрожжей vii Петергофских Генетических Линий ИГЛ, а также сегреганты диплоидов продуктов гибридизации штаммов ПГЛ со штаммами, полученными из других лабораторий. Генотипы штаммов приведены в таблице 2. При картировании митохондриальных мутаций С использовали коллекцию iмутантов, любезно предоставленную дром Р. Швейеном унт г. Мюнхен, Германия. Коллекция получена на основе штамма А МЛТа и включает в себя мутантов по генам СОХЗ 2 мутанта, С 0X2 1 мутант, СОХ 7 мутантов и СОВ мутантов. В молекулярногенетических экспериментах использовали штаммы ii i 9 генотипа i i , и X 1 7 i 1 . Плазмиды. Для количественного изучения эффективности супрессии нонсенсмутаций использовали плазмиды 5, , предоставленные М. Туйтом ii, ivi , . Плазмида 5 содержит фрагмент ДНК с промоторной областью и частью кодирующей последовательности гена фосфоглицерат киназы РСК и слитый с ним в одной рамке считывания репортерный ген рисунок 2. Плазмиды 7, 7, 9 содержат ту же конструкцию, но между кодирующей последовательностью гена РСК и . Эффективность супрессии оценивали как выраженное в процентах отношение значения активности галактозидазы см. Таблица 2. Основные штаммы, использованные в работе. Таблица 2. БПИ . Примечания. В дуЛ2ВП при обозначении генотипов использованы традиционные обозначения мутаций ауксотрофности. Аллели , 2, 4 содержат нонсенсмутацию аллели i 7 и 1еи несут нонсенсмутацию I, 3, гр9 мутации, молекулярная природа которых неизвестна игаЗА аллель гена 3, несущая делению этого гена 2рецессивная мутация устойчивости к циклогексимиду I0, , 0, 2 рецессивные омнипотентные супрессорные мутации в гене 1 аллель гена , дизруптированная геном 1 и i аллели гена , кодирующие белок , состоящий из Сдомена I2 ядерная мутация, компенсирующая проявление дыхательной недостаточности у мутантов и митохондриальная мутация, компенсирующая проявление дыхательной недостаточности у мутантов и митохондриальная мутация устойчивости к эритромицину. Остальные пояснения в тексте. Плазмида 4 , , содержащая ген 4 под контролем галактозного промотора Рисунок 2. Ю.О. Черновым i Ii , . Плазмида рВС4I3, содержащая ген 4, дизруптированный геном 3 Рисунок 2. В.В. Кушнировым НИИ экспериментальной кардиологии, Москва. В работе использовали две плазмиды, содержащие полноразмерную аллель гена 7 Телков и др. Рисунок 2. Эта аллель кодирует белок , в состав которого входит только домен и отсутствуют и Мдомены. Для конструирования плазмид, проводившегося в ходе работы, использовали дрожжевые центромерные плазмиды 5 и 6, мультикопийную плазмиду 6 и интегративную плазмиду 6 ii . Рисунок 2. Среды и условия культивирования. В работе использовали стандартные культуральные среды, применяемые при работе с дрожжами полную среду , среду , содержащую все компоненты , кроме глюкозы, замененной на глицерин млл, минимальную , полную синтетическую среду С и селективные среды, не содержащие отдельных компонентов среды С, среду с ацетатом натрия, среду для микроманипулирования и др. Захаров и др. Наряду со стандартными средами использовали среды модифицированного состава среду с хлоридом гуанидина i в концентрации 5тМ среду с циклогексимидом i в концентрации 1мгл среду с циклогексимидом 1мгл среду с бромистым этидием i в концентрации 0 мгл среду , содержащую все компоненты среды , кроме глюкозы, замененной на галактозу i и раффинозу 1 ii I. Штаммы дрожжей инкубировали при С, чувствительность дрожжей к повышенной температуре тестировали при С, штаммы . Рисунок 2. Физическая карта плазмид , 9. Рисунок 2. Физическая карта плазмид и II. Р галактозный промотор. Рисунок 2. Физические карты плазмид 7, 2, 3. I ориджин репликации 2р ДИК 3 дрожжевой ген 3 2 дрожжевой ген 2 дрожжевой ген аллель , кодирующая белок , состоящий из Сдомена. Рисунок 2. Физические карты плазмид 6, 5, 6 и 6. I ориджин репликации 2р ДНК 3 дрожжевой ген 3 2 дрожжевой ген 2.