Анализ гена трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза у больных из Башкортостана и в популяциях Волго-Уральского региона

• Автор: Корытина, Гульназ Фаритовна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 181 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1 Л. Характеристика гена и его продуктов. .

1.1.1. Картирование и клонирование гена

1.1.2. Структура гена и матричной РНК .

1.1.3. Структура и функции белкового продукта.

1.1.4. Мутации гена

1.1.5. Внутригенные полиморфные маркеры гена

1 .2. Разнообразие клинических проявлении нарушении в гене

1.3. Диагностика муковисиидоза ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

2.1. Объект исследования
2.2. Методы исследования .
РЕ ЗУ ЛЬ ТА ТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 3. АНАЛИЗ ВНЕГЕ1ШЫХ И ВНУТРИГЕННЫХ МАРКЕРОВ ГЕНА В ПОПУЛЯЦИЯХ ВОЛГОУРАЛЬСКОГО РЕГИОНА
3.1. Анализ полиморфизма диаллельных маркеров Н и .
у пародов ВолгаУрал некого региона.
3.2. Анализ полиморфизма внутригенного
микросателлитного маркера IV6 гена в популяциях ВолгоУралъского региона.
ГЛАВА 4. АНАЛИЗ СПЕКТРА МУТАЦИЙ ГЕНА СЕТИ У БОЛЬНЫХ МУКОВИС ЦИДОЗОМ ИЗ БАШКОРТОСТАНА.
. Анализ частоты наиболее распространенных о России мутаций гена СГТЯ у больных МВ из
Башкортостана
4.2. Поиск новых мутации в гене СЕТИ.
ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА ВНЕГЕННЫХ И ВНУТРИГЕННЫХ ПОЛИМОРФНЫХ МАРКЕРОВ ГЕНА СТТЯ ИД МУТАНТНЫХ И НОРМАЛЬНЫХ
ХРОМОСОМАХ
5.1. Анализ распределения частот аллелей и генотипов
внегенных , .7 и внутригенных 0V 2О,
V6 IV8, IV маркеров гена на
мутантных и нормальных хромосомах.
5.2. Анализ гаплотипов по внегенным и внутривенным полиморфным маркеров гена на мутантных и
нормальных хромосомах.
ГЛАВА 6. АНАЛИЗ ИНФОРМАТИВНОСТИ И ОПТИМИЗАЦИЯ АЛГОРИТМА ДНКД И АГНОСТИКИ МВ
В БАШКОРТОСТАНЕ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК Л ИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ
I1ИС0К СОКРАЩЕНИИ
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота муковисцидоз
ПДРФ полиморфизм длины рестрикционных фрагментов
ПЦР полимеразная цепная реакция
i ii
i i i полиморфизм по одному
нуклеотиду
i i i
ВВЕДЕНИЕ.
Актуальность


В результате молекулярногенетического анализа гена СРШ было выявлено мутаций, что позволило идентифицировать всех мутантных аллелей. Спектр мутаций гена СБТЯ у больных МВ из Башкортостана имеет свои особенности и отличается от такового в других регионах России. Обнаружены и охарактеризованы пять новых мутаций гена СРТЯ и два нейтрал ьны х пол и м орфи зма. Большинство выявленных мутаций гена СТТИ ассоциированы с определенными гаплотипами маркерных локусов МеШСз. М0УТиВ1УаОА КС4К5 7СА. Появление мутации с Р8 в генофонде народов ВолгоУральского региона, вероятно, обусловлено миграциями славянского населения из Восточной Европы, а ее широкое распространение связано с эффектом основателя. Выявлен мажорный гаплотип, который достоверно чаще встречается на хромосомах с неидентифицированными мутациями гена СРТЯ. ГЛАВА 1. Характеристика гена СИТИ и его продуктов. Рис. Транскрипция гена приводит к появлению первичного продукта матричной РНК мРНК, состоящей из нуклеотидов i . Регуляция экспрессии гена осуществляется несколькими цисрегуляторными элементами. Место инициации транскрипции может варьировать и начинаться еще до первого экзона. Основной промотор располагается на расстоянии п. i . Экспрессия гена начинается на неделе беременности в эпителиальных клетках легких, поджелудочной железе, семенниках i . i . После рождения мРНК можно обнаружить лишь в некоторых тканях организма легких, поджелудочной железе, семенниках, кишечнике, потовых железах, плаценте. Ген не экспрессируется в клетках мозга, почках и надпочечниках i . i . i . i . Анализ экспрессии гена в легких позволил понять, какие клетки в легочной ткани играют основную роль в возникновении патологии органов дыхания при . В частности, было обнаружено, что ген , прежде, всего экспрессируется в подслизистых железах и, в меньшей степени, в поверхностном эпителии воздухоносных путей i, , . После открытия гена правомерной становится постановка вопроса о молекулярной идентификации мутаций у пациентов. Для исследования отличий мутантного гена от нормального, была сконструирована тканеспецифическая библиотека эпителия бронхов девочки шести лет, страдающей муковисцидозом . i . Используя фрагменты кДНК нормального гена в качестве зондов, был проведен скрининг библиотеки и выделена полноразмерная кДНК белка муковисцидоза данной пациентки. Затем была определена нуклеотидная последовательность этой молекулы. Оказалось, что у больной девочки в обеих гомологичных копиях гена присутствует однотипная деления трех нуклеотидов, приводящая к отсутствию фенилаланина в 8 положении белка 8 . i . При анализе группы больных мутация 8 в экзоне гена была обнаружена в случаев. Мутация корректировалась при введении нормальной кДНК этого гена в мутантные клеточные линии, полученные от больных . i . Структура и функции белкового продукта гена . Анализ последовательностей перекрывающихся клонов кДНК позволил предсказать структуру белкового продукта гена . На рисунке 1. Установлено, что белок состоит из аминокислот и имеет массу 8,8 кДа i . Рис. Схематическая модель белка i . домены, 3 домен. Характерной особенностью белкового продукта гена является наличие двух повторяющихся мотивов, каждый из которых состоит из доменов, способных пронизывать мембрану несколько раз, и АТФсвязывающих доменов i ii , . Эти структурные особенности были очень схожи с таковыми Ргликопротеина млекопитающих и целым рядом других мембранассоциированных белков, подтверждающих гипотезу, что предполагаемый продукт гена является участником транспорта ионов через мембраны и, вероятно, членом семейства мембранных белков. Продукт гена был назван i ii i .