Муковисцидоз, молекулярный анализ гена, разработка новых подходов диагностики и генотерапии

• Автор: Иващенко, Татьяна Эдуардовна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 283 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Муковисцидоз МВ общие представления

и история открытия гена

1.1. Тип наследования и популяционная частота

1.2. Разнообразие клинических проявлений при

1.3. Ранние попытки идентификации биохимических маркеров.

1.4. Картирование гена

1.5. Популяционный и семейный анализ внегенных

полиморфных маркеров, сцепленных с геном МВ
1.6. Идентификация гена
ГЛАВА 2. Характеристика гена МВ и его продуктов
2.1.Структура гена СРТИ
2.2. Матричная РНК
2.3. Белок
ГЛАВА 3. Мутации гена СРТТ
3.1. Классификация мутаций
3.1.1. В зависимости от первичного повреждающего эффекта
3.1.2. В зависимости от степени поражения поджелудочной железы
3.2. Мутация беБ8
3.3. Другие мажорные мутации, их география
3.4. Первичный механизм действия мутации гена СРТУ
3.5.Идентификация новых мутаций
ГЛАВА 4. Популяционный и семейный анализ внутригенных полиморфных маркеров гена СА
4.1.Тандемные повторы ТП интрона 6В
4.2. Микросателитные повторы интрона 8
ГЛАВА 5. Корреляция фенотипа и генотипа при муковисцидозе
5.1. Разнообразие клинических форм муковисцидоза
5.2. Корреляция мутаций гена СРТУ с тяжестью заболевания
5.2.1. Корреляция мутаций гена СРТГЗс тяжестью
заболевания у больных МВ С.Петербурга
5.3 Врожденное двухстороннее отсутствие
семявыводящих протоков СВАХО
5.4. Полудоминантные мутаций с частичной пенетрантностью
5.4.1. Политимидиновый тракт интрона 8
5.4.2 М0полудоминантная мутация с частичной
пенетрантностью
ГЛАВА 6. Генетические факторы, влияющие
на клиническую картину муковисцидоза
6.1. Генымодификаторы функции СПР
6.2. Гены главного локуса гистосовместимости
6. 3. Гены системы детоксикации ксенобиотиков
ГЛАВА 7. Диагностика муковисцидоза
7.1 Биохимические методы диагностики
7.2 Молекулярная диагностика
7.2 .1.Прямой метод диагностики идентификация
мутаций гена СГ
7.2.2. Непрямой метод диагностики
7.3.Пренатальная диагностика
7. 3.1.Пренатальная диагностика МВ в России
ГЛАВА 8. Молекулярные подходы к лечению муковисцидоза
8.1. Общие сведения и основные понятия генной терапии
8.2. Основные способы доставка генетических
конструкций в экспериментах по генотерапии МВ
8.2.1.Вирусные носители
8.2.2.Невирусные носители
8.3. Модельные животные
8.4. Новые носители генетических конструкций,
перспективные для генотерапии МВ
8.5. Разработка экспериментальных подходов
генотерапии МВ у плода
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ МВ
ПРИЛОЖЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


При помощи перечисленных методов удалось доказать, что первичный дефект при МВ лежит в самой апикальной мембране эпителиальных клеток, а не находится гдето вне их. Они так же показали, что в норме хлорные каналы эпителиальных клеток открываются при их фосфорилировании цАМФзависимой протеинкиназой и действии АТФ, тогда в случае МВ эта функция оказывается полностью или частично утраченной рис. Картирование гена. Трудности картирования гена МВ объяснялись, с одной стороны, отсутствием адекватных биологических моделей, на которых провести генетическое картирование гена было бы значительно проще, чем на человеке, а с другой отсутствием случаев хромосомных перестроек делеций, транслокаций у больных МВ, что позволило бы заподозрить ту или иную хромосому или хромосомный фрагмент и локализовать мутантный гена МВ. Скринирование всех известных фенотипических маркеров на сцепление с геном МВ путем анализа сложных родословных долгое время не давало положительных результатов. Особенно интенсивные исследования по генетическому сцеплению МВ развернулись после г. ДНК, идентифицированные к тому времени уже на многих хромосомах человека. Резко возросло к середине х годов и количество биохимических белковых маркеров. Рис. Схема транспорта электролитов в эпителиальных норме и при МВ. В г. МВ с ферментом параоксаназой, ген которой был ранее картирован на хромосоме 7 ЕФегд е Активные поиски методом сцепления с уже известными молекулярными маркерами этой хромосомы позволили уже осенью г. МЕТ и , фланкирующих ген МВ и находящихся друг от друга примерно на расстоянии около 1 сантиморганиды в области 7ц. Веиабе1 е1 а1. МЕТ и , т. МВ. Впоследствии внутри фрагмента хромосомы, ограниченного указанными локусами, были выделены ДНКзонды С, Кт локус ИЧР, Мр9 , Х2С локус 3, находящиеся в непосредственной близости к гену МВ. Популяционный и семейный анализ внегенных полиморфных маркеров, сцепленных с геном МВ. Во всех многочисленных ДНКзондах, находящихся в непосредственной близости к гену МВ, были идентифицированы полиморфные сайты, доступные для ПДРФанализа исследования полиморфизма длины рестрикционных фрагментов ДНК, а их тесное сцепление с геном МВ, позволило использовать их в качестве удобных молекулярных маркеров мутантного гена и сделало возможным раннюю, в том числе пренатальную диагностику МВ рис. Рис. Генетическая карта локуса муковисцидоза на хромосоме 7. . Веибе МаШп е Исходя из этого, анализ частот аллелей этих ПЛ в отечественных популяциях и у больных МВ России является, безусловно, важным, как для популяционной, так и для медицинской генетики. Изучение частот различных аллелей ДНК локусов МЕТ и , сцепленных с геном МВ, у жителей Северозападного региона России и выборочно, т. Советского Союза позволило провести популяционное исследование и сравнительный анализ распределения соответствующих полиморфных аллелей в исследованных популяциях. Учитывая значительные расовые различия аллельного полиморфизма локуса МЕТ, выявленные в Северной Америке МаФп е Оеуоиэ е ПДРФ анализ этого локуса в различных национальных и этнических группах нашей страны. Исследования полиморфизма этого локуса были проведены на популяции Литвы, Белоруссии, Украины Молдовы, Азербайджана, Башкирии, Северозападного, Центрального и Южного регионов России табл. Прежде всего, обращает на себя внимание хорошее соответствие частот аллелей локуса МЕТ в славянских популяциях Белоруссии, Украины, Молдовы, Северозападного, Центрального и Южного регионов России и Азербайджана с таковым в Северозападной Европе и в Северной Америке Бейбе Мабю е а1. Италии Сеуо е Частота аллеля, несущего сайт рестрикции для эндонуклеазы Мер 1 Мэр 1 , варьировала в этих популяциях от до . Для других исследованных популяций были обнаружены некоторые статистически достоверные отличия. Так, например, для литовской популяции частота аллеля 1 для МеШМвР1 отсутствие сайта рестрикции составляет Х2 6,6 р0,, тогда как у жителей Северозападного региона России этот аллель встречается с частотой .