Генетический и молекулярно-биологический анализ способности плазмиды RP4 наследоваться в широком круге бактериальных хозяев

• Автор: Крыстева, Росица Трыпкова
• Шифр специальности: 03.00.15, 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 115 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. плазыиды как типичные представители внехроыосоыных наследственных элементов и распространение множественной лекарственной устойчивости . .
2.1.1. Роль антибактериальных препаратов в распространении множественной лекарственной устойчивости

2.1.2.плазыиды, их свойства и роль в обмене генетической информации .

2.1.3. Классификация и структура плазыид

2.2. Роль плазмид в половом процессе

2.2.1. Механизм процесса конъюгации .

2.2.2. Генетический контроль этапов конъюгационного переноса плазмид

2.3. Репликация и ее связь с несовместимостью плазмид

2.3.1. Плазмидные праймазы и их роль в инициации репликации плазмид и хромосомы
2.3.1.1. Типы прайыаз и их свойства . .
2.3.2. Некоторые аспекты несовместимости плазмид
группы Шер
2.4. Структура и функции плазмид группы I наследующихся в широком круге хозяев .
2.4.1. Генетический контроль репликативных функций и стабильности наследования плазмид групп i
2.5. Мигрирующие генетические элементы
2.5.1. Свойства мигрирующих генетических элементов
2.5.1.1. Специфичность внедрения транспозонов
2.5.1.2. Генетический контроль транспозиции .
2.5.1.3. Генетические перестройки, стимулируемые мигрирующими элементами .
2.5.2. Транспозоны как инструмент в молекулярногенетических экспериментах .
3. МАТЕРИМЫ И МЕТОДЫ
3.1. Питательные среды и реактивы .
3.2. Мутагенез с помощью Тп5 .
3.3. Конъюгационные скрещивания . .
3.4. Стабильность наследования транспозонного маркера .
3.5. Исследование несовместимости плазмид .
3.6. Изучение супрессии мутации плазмидныы
геном i.
3.7. Выделение плазыидной ДНК .
3.8. Рестрикционный анализ плазыидной ДНК .
3.9. Электрофорез нуклеиновых кислот
ЗЛО.Электронная микроскопия ДНК
4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
4.1. Получение мутантов плазмиды КР4 с измененными частотами наследования в .ii .
4.1.1. Введение Тп5 в геном плазмиды и4 из хромосомы штамма .i 2
4.1.2. Определение сравнительных частот наследования инсерционннх производных плазмиды
В .ii и .i К
4.1.2.I. Перенос мутантных плазмид из донорного
штамма 5III4 д Ьаптп.5.
4.1.2.2. Перенос мутантных плазмид из донорного
штамма 84 а 5 .
4.1.2.3. Изучение гомогенности популяций штаммов, несущих ыутанные плазмиды
4.2. Электронномикроскопический анализ плазмид
3, 4, РЕЫ1 и рНЫЗ .
4.3. Рестрикционный анализ плазмид
4.4. Генетические доказательства сохранения функции гена i в плазмидах и 3
4.5. Генетические доказательства внедрения Тп
в ген i плазмиды 4 .
4.6. Изучение наследования мутантных плазмид в
клетках различных бактериальных видов .
5. ОБСУЗДЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Таким образом ЭТИ НешогОЧКС ленные данные свидетельствуют о том,что плазмиды содержат в своем составе гены,продукты которых контролируют процесс их наследования в различных видах микроорганизмов. Целью настоящей работы было выяснение генетического контроля космополитического характера наследования пллазмиды 4 группы I . 4 с измененныгли частота. В дальнейшем процесс наследования плазмид при конъюгации мы будем называть наследованием. 5 , выделены инсерционные мутанты плазмиды 4 , которые с пониженной частотой передавались и наследовались при конъюгации в . i 2. В одной из мутантных плазмид РЬ4 тп5включен в район гена i в остальных случаях транспозон встроен в 5 различных областей генома плазмиды 4 . Наши данные позволяют утверждать, что внедрение то5 в ген i , нарушает функцию праймазного гена. Установлено также, что полученные внедрения в район гена i в плазмидах рКЬ и рйЫЗ не нарушает функции этого гена, но снижают частоту наследования плазмид в . Обсуждается возможная роль других генов в процессах конъюгационной передачи и стабильного наследования плазмид в представителях различных бактериальных видов. Практическое значение работы Новые плазмиды, производные плазмиды 4 , могут быть использованы для проведения фундаментальных исследований на разных бактериальных объектах. Впервые идентифицированы новые районы генома плазмиды КР4 ,. От сохранения этих районов в ходе генноинженерных манипуляций с плазмидами группы I зависит и сохранение их космополитизма. В связи с этим полученные данные необходимы для прикладных биотехнологических исследований с плазмидами группы 0 Кроме того, локализация районов, контролирующих космополитический характер наследования 4, необходима для конструирования челночных векторов на основе этой плазмиды. Применение антибактериальных препаратов оказало огромное влияние на лечение инфекционных заболеваний. Однако антибиотики и сульфонилаыиды сыграли роль селективных агентов, использование которых привело к распространению возбудителей инфекционных заболеваний, устойчивых к применяемым препаратам . В середине х годов эффективно применяли сульфонилаыиды против штаыыов i, вызывающих дизентерию. Несколько лет спустя, эффективность препаратов упала. В г. i были резистентны к сульфопилаыидаы. В первый период применения антибактериальных агентов, только единичные штаммы проявляли резистентность к отдельным препаратам, но уже в г. i сообщил о выделении штаммов i xi 4а , резистентных к стрептомицину, тетрациклину, хлорамфениколу и сульфонилаиидаы i i. Кроме того, было обнаружено, что множественная лекарственная резистентность характерна не только для штаммов i . ii i , обладающий множественной лекарственной устойчивостью см. , . В х годах i и ii независимо друг от друга доказывают, что множественная резистентность переносится при смешанном культивировании штаммов . i ii . i . I0. У бактерий существуют 3 основных способа обмена генетической информацией трансформация, трансдукция и конъюгация, с помощью которых может происходить передача различных признаков, в том числе и лекарственной устойчивости. i и ii i . I0 ii . В лабораториях ii, и др. ii доказал, что передается не хромосомная ДНК донора, а структуры, названные факторами от англ. ii , , . За период интенсивного изучения распространения множественной лекарственной устойчивости было показано, что факторы встречаются в клетках различных бактериальных видов. Так и обнаружили факторы в штаммах ii , в энтеропатогенноы штамме . , . Открытые японскими исследователями генетические элементы, первоначально названные факторами, являются типичными представителями внехроыосошых наследственных элементов плазмид. Плазмиды представляют собой молекулы ДНК кольцевой формы. Основными свойствами плазмид являются их способность реплицироваться относительно независимо от хромосомы хозяина и передаваться из одной бактериальной клетки в другую , .