Влияние белка SUUR на структуру политенных хромосом Drosophila melanogaster

• Автор: Колесникова, Татьяна Дмитриевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 135 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИИ.

Глава 1. Пространен венновременная картина репликации обзор литературы

1.1. Ориджины репликации

1.2. Инициация репликации.

1.3. Программирование времени инициации репликации

1.3.1. Программирование в клеточном цикле

1.3.2. Положение в ядре шрает важную роль в программировании ориджинов

1.3.3. Статус ацетилирования гистонов ориджинов определяет время инициации

репликации.
1.3.4. У . vii существует несколько независимых механизмов программирования позднего включения ориджинов
1.3.5. Участие в определении временной программы репликации
1.4. Эффективность ориджинов репликации.
1.5. Фокусы репликации
1.6. Скорость репликации
1.7. Время репликации отдельных участков генома.
1.8. О связи транскрипции и репликации
1.9. Значение точной временной последовательности репликации генома
1 Пространственновременная картина репликации в поли генных тканях .
. Эндоцикл.
. Репликация политенных хромосом слюнных желез.
1 Белок специфически контролирует недорспликацию в СЖ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Условия проведения опытов
2.2. Линии .
2.3. Приготовление давленых препаратов слюнных желез
2.4. Приготовление препаратов политенных хромосом для гибридизации i i
2.5. Процедура гибридизации i i.
2.6. Приготовление препаратов для иммуноокрашивания политенных хромосом
2.7. Иммуноокрашивание политенных хромосом
2.8. Анализ препаратов
2.9. Детекция апоптоза
2 мутагенез.
2 Получение трансгенных мух.
2 Вестернблот анализ.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.
3.1.Цитогенетический анализ при центромерного района иолитенной X
хромосомы.
3.1.1 .Морфология района .
3.1.2.Построение карты района в линиях, несущих мутацию и цитологический анализ границ инверсий, разрывающих прицентромерный гетерохроматин Ххромосомы
3.1.3. Локализация генетических маркеров
3.2. Фенотипы, вызванные эктопической экспрессией ДЖ.
3.2.1. Эктопическая экспрессия БШЖ ингибирует политенизацию в слюнных железах
3.2.2. Повсеместная экспрессия БЩЖ ингибирует личиночный рост и приводит к летальности
3.2.3. Влияние эктопической экспрессии ЛЖ на диплоидные ткани.
3.2.3.2. Экспрессия в крыловом имагинальном лиске
3.2.3.3.Экспрессия в других тканях.
3.3. Создание линий, экспрессирующих укороченные формы белка вШЖ.
3.3.1.Мутагенез, направленный на получение мутаций в трансгене Ам
3.3.2. Анализ мутаций в трансгене.
3.3.3. Рэлементные конструкции на основе Сконцевой части ДЖ.
3.4. Анализ функциональной значимости отдельных участков ДЖ
3.4.1 Фенотипы эктопической экспрессии фрагментов ДЖ
3.4.2. Связывание фрагментов ДЖ с хромосомами СЖ
3.4.3. Фрагменты ЛЖ специфично узнают районы ИГХ
3.4.4.Влияние эктопической экспрессии Кконцсвых фрагментов БШЖ на эндогенный БШЖ.
3.4.5. Влияние фрагментов ЛЖ на недорспликацию в политенных хромосомах СЖ
3.4.6.Фрагменты БШЖ вызывают реорганизацию структуры политенных хромосом.
Слипание дисков политенных хромосом
Влияние на пуфы
3.4.7.Влияния эктопической экспрессии фрагментов Б1ЛЖ на распределение НР1 на политенных хромосомах СЖ
3.4.7.1.0верэкспрессия ДЖ вызывает перераспределение НР1 на хромосомах
3.4.7.2.Исследование влияния эктопической экспрессии фрагментов 8ШЖ на распределение НР1 на политенных хромосомах СЖ
3.4.8.Исследование взаимодействия эктопически экспрессированных фрагментов с избыточным полноразмерным ЛЖ.
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Влияние мутации на прицентромерный район политенной Xхромосомы.
4.2. Использование системы ОАЬ4А8 для исследования функционального значения гена 5м ЦЛ.
4.3. Использование доминантных фенотипов в системе САЬ4иА8, для получения функциональных мутаций в трансгене
4.4. Анализ функциональных участков ДЖ.
4.4.1 .Влияние на репликацию
4.4.2.Связывание с хромосомами
4.4.3. Самоагрегация
4.4.4.Влияние на структу ру хромосом
Выводы.
Список литературы


Работа изложена на 6 страницах машинописного текста, содержит 4 таблицы и рисунков. Колесникова Т. Д Коряков Д. Е., Семешин В. Ф., Беляева Е. С., Жимулев И. Ф. Межлинейные различия в морфологии прицен громерного района политенной Ххромосомы в слюнных железах i Генетика. Т С. Vv, ЕЛ. А.А. I.V. I i xi ii iii ii i i . I, v, , i, I. V., i, V. V, , , i, , Vv, . I., v, , v, , v, . V., iv, I. V., iv. V., v, I i i i i ii i. V. 3. Жимулв И. Ф., Беляева , Колесникова Т. Д Волкова Е. И. . Интеркалярный гетерохроматин и проблема сайленсинга Вестник ВОГиС. I.V. Vv . I., i V. I i ii Iii i i iiii i ii ii ii i. Троценко Колесникова Т. Д Коряков Д. Е., Жимулев И. Ф. Цитогенетический анализ прицентромерного района политенной Ххромомсомы дрозофилы i Цитолог ия. С. 2. V., iv . V, iv I i i ii ii i i . V.9 . Vv, . I., i, I. V., i, V. I Ii i i . Vv . I., i I. I i ii i i . Белякин , Колесникова Т. Д Макунин И. В., Волкова Е. И., Алексеенко , Нанаев , Болдырева I, Беляева Е. С., Жимулв И. Ф. Интекалярный гетерохромаагин в политенных хромосомах . Съезд ВОГиС. Москва. Т. 2. С. 8. Основные результаты получены автором самостоятельно. Электронномикроскопический анализ политенных хромосом проводился совместно с д. В.Ф. Семсшиным. Анализ влияния и его фрагментов на распределение НР1 на политенных хромосомах проводился совместно с Л. В. Болдыревой. Автор выражает глубокую признательность членкорр. РАН И. Ф. Жимулеву, д. Е. С. Беляевой, к. Е. И. Волковой, к. И. В. Макунину, к. Д. Е. Корякову, д. В. Ф. Семешину и к. А. А. Горчакову за помощь в работе и обсуждение результатов. Автор также благодарен всем сотрудникам лаборатории молекулярной цитогенетики за постоянную поддержку. Глава 1. Орилжины репликации определяются, с одной стороны, как специфические сайты, с которых начинается репликация ДНК синтез лидирующей цепи ДНК, с другой стороны как последовательности ДНК, связывающие белки инициации репликации. Последовательности ДНК, необходимые для инициации репликации, и непосредственно сайты начала репликации совпадают у всех бактерий, бактериальных плазмид, бактериофагов, вирусов, дрожжей . У высших эукариот многие исследованные сайты инициации репликации представляют собой протяженные участки ДНК вплоть до нескольких десятков т. Существует гипотеза, согласно которой подобные зоны инициации являются кластерами близко расположенных ориджинов, из которых лишь один включается в каждом клеточном цикле i, i, i i, i, . Совсем недавно эта гипотеза получила подтверждение МакАлпаин с соавторами показали, что в геноме . На некоторых ориджинах высших эукариот для инициации репликации необходимо связывание определенных трансфакторов с цисрегуляторными элементами, расположенными на значительном расстоянии от непосредственной зоны инициации репликации. В то же время, вероятно, большинство эукариотических ориджинов не имеет цисрегуляторных последовательностей вне зоны инициации репликации v . Эукариотическая репликация начинается на множестве ориджинов, каждый из которых имеет характерное время включения в ходе фазы, воспроизводимое в разных клеточных циклах. Инициация репликации на данном ориджине представляет собой сложный процесс, требующий связывания с ориджином множества белков в несколько этапов ii . Несмотря на то, что консервативной последовательности ДНК, необходимой для инициации репликации, у высших эукариот не обнаружено, белки и этапы инициации репликации у них в большой степени консервативны ii, , , ii . Наиболее изучен процесс инициации репликации у дрожжей 5. На первом этапе происходит формирование на ориджине шестисубъелиничного комплекса ii ii x. У . На втором этапе запускает сборку на ориджине мультибелкового комплекса, называемого пререпликативным комплексом . Для формирования необходимы как минимум , , и субкомплекс МСМ. МСМ предполагается, что субкомплекс МСМ является основной геликазой в процессе репликации i, i, . Сборка происходит в фазе 1 . На третьем этапе, непосредственно перед инициацией репликации на данном ориджине, происходит его активация. С. К таким белкам относятся , и участвующие в репликации ДНКполимеразы.