Частота обменов при конъюгационной рекомбинации у escherichia coli К-12 и структура белка reca

• Автор: Бахланова, Ирина Витальевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 94 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Белок гомологичной рекомбинации.

1.1.1. Бактериальная конъюгация

.2 Гомологичная рекомбинация у бактерий

1.1.3. Центральная роль белка в гомологичной

рекомбинации.

1.1.4 Структура белка из . i

1.1.5. Частота рекомбинационных обменов на единицу

длины ДНК
1.2. система у бактерий.
1.2.1. Роль белка в системе клетки.
1.2.2. Мутации гена гесА из . i гесАЕс с конститутивным выражением функций
1.3. подобные белки у прокариот.
1.4. Структурнофункциональный анализ белка с помощью
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Бактериальные штаммы и плазмиды
2.2. Среды
2.3. Манипуляции с ДНК
2.4. Статистическая обработка результатов.
2.5. Определение внутриклеточного уровня белка
2.6. Рекомбинационный тест.
2.7. Определение частоты рекомбинационных обменов
2.8. Репарационный тест
2.9. реактивация фага 7
2 хромотест
2 Выделение и очистка белка x из . i
2 Реакция расщепления белка x.
2 Определение нуклеотидной последовательности ДНК
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
3.1. Структурнофункциональный анализ генов гесА из
i и ii i К.
3.1.1. Клонирование гена гесА из i .
3.1.2. Сравнение нуклеотидных последовательностей генов И гесАЕс.
3.1.3. Сравнение аминокислотных последовательностей
белков и
3.1.4. Функциональные характеристики гена .
3 2. Повышенная частота рекомбинационных обменов ЧРО.
контролируемых белком из i
в клетках . i
3.2.1. Белок повышает ЧРО без индукции системы
в клетках . i.
3.2.2. Мутация 1ехАЗ не влияет на повышение ЧРО. контролируемых
белком .
3.2.3. Белок стимулирует расщепление белка x
3.2.4. Белок ингибирует реакцию расщепления белка x
3.3. Рекомбинационные свойства химерных белков . i
. i
3 3 1. Частота рекомбинационных обменов, контролируемых
химерными белками.
3 3.2. Конститутивное выражение функций, контролируемых
химерными белками.
3.4. Генетические и физиологические факторы, влияющие на частоту рекомбинационных обменов
3.4.1. Генетические факторы.
3.4.2. Физиологические факторы
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
4.1. Области белка , замены аминокислот в которых не влияют
4.2. Области белка , замены аминокислот в которых приводят к повышению ЧРО, сопряженному с конститутивным выражением функций.
4.3. Области белка , замены аминокислот в которых влияют на ЧРО в отсутствие конститутивного выражения функций
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


ВВЕДЕНИЕ. Глава 1. Белок гомологичной рекомбинации. Структура белка из . система у бактерий. Роль белка в системе клетки. Мутации гена гесА из . подобные белки у прокариот. Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Статистическая обработка результатов. Рекомбинационный тест. Выделение и очистка белка x из . Реакция расщепления белка x. Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. i и ii i К. Клонирование гена гесА из i . Сравнение нуклеотидных последовательностей генов И гесАЕс. Функциональные характеристики гена . Повышенная частота рекомбинационных обменов ЧРО. . i. Мутация 1ехАЗ не влияет на повышение ЧРО. . Рекомбинационные свойства химерных белков . Генетические факторы. Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ. Области белка , замены аминокислот в которых приводят к повышению ЧРО, сопряженному с конститутивным выражением функций. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ. Ген белок гесА из ii i гесА Генетическая рекомбинация относится к числу фундаментальных процессов, происходящих в живой клетке. Исследование молекулярных механизмов рекомбинации началось с открытия в гена гесА, играющего центральную роль в процессе рекомбинации у ii i i, . Белок участвует также и в процессах репарации, репликации, мутагенеза, клеточного деления, регуляции экспрессии ряда репарационных генов Сох, . Фундаментальная роль белка в регуляции клеточных процессов определяет его консервативность 8 эволюции. подобные белки обнаружены во всех трех царствах живой природы i. и i . Структурнофункциональный анализ белка , проводимый во многих лабораториях мира, приобрел новые возможности после описания в трехмерной кристаллической структуры белка . i, . Эта структура в соответствии с генетическими и биохимическими данными позволила авторам определить районы белка , предполагаемые для связывания с ДНК и нуклеотидными кофакторами, межмономерного взаимодействия и связывания с релрессорами. Кроме того, полученная кристаллическая структура легла в основу интерпретации данных о биохимических свойствах мутантных белков . и каков механизм взаимодействия белка с ДНК в нуклеопротеиновом филаменте. Этот вопрос приобрел особую актуальность в свете данных об универсальности структуры нуклеопротеинового филамента, образуемого подобными белками. и а показали идентичность организации филаментов, образуемых на ДНК белками , и vX. является аналогом белка в дрожжах vii i . . vX в бактериофаге , . Тот факт, что подобные филаменты найдены у эукариот, позволяет предположить, что природа этого нуклеопротеинового комплекса и молекулярный механизм обмена нитей между гомологичными молекулами ДНК аналогичен для про и эукариот. Таким образом, данные, полученные при изучении бактериального белка , могут быть полезны для исследования механизмов рекомбинации и репарации у высших, включая и человека. Основные усилия исследователей направлены на биохимическое исследование процесса гомологичной рекомбинации путем реконструкции ее отдельных этапов i vi. Целью настоящей работы является изучение молекулярных механизмов постконъюгационной рекомбинации у ii i К проводимой белками из Е i, i , i, а также химерными белками . . i.