Изучение регуляции синтеза фосфатаз у дрожжей Saccharomyces cerevisiae

• Автор: Самбук, Елена Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Ленинград
• Количество страниц: 176 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ .

Г л а в а I. МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ПУТЕЙ У ДРОЖЙЕЙ Обзор литературы

1. Введение.

1.1. Организация кластеров у дрожжей

1.2. Генетический подход к изучению

метаболизма у дрожжей . .

2. Регуляция утилизации галактозы.

2.1. Генетический контроль утилизации галактозы

2.2. Механизмы регуляции утилизации галактозы

2.3. Влияние катаболитной репрессии на

утилизацию галактозы
3. Регуляция метаболизма инвертазы .
4. Регуляция метаболизма аргинина
5. Постановка задачи
Г л а в а П. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
1. Основные обозначения.
2. Основные штаммы и условия их культивирования
2.1. Штаммы
2.2. Условия культивирования штаммов .
3. Методы
3.1. Определение активности кислых фосфатаз .
3.2. Определение концентрации фосфата
в культуральной среде .
3.3. Качественное определение активности щелочной фосфатазы.
3.4. Получение мутантов с изменнной активностью
кислой фосфатазы 3
3.5. Метод гибридизации
3.6. Получение ревертантов.
3.7. Тетрадный анализ
3.8. Анализ случайной выборки аскоспор
3.9. Получение митотических рекомбинантов .
3 Статистическая обработка материалов .
Г л а в а Ш. ШЯСНЕНИЕ ФУНКЦИЙ ГЕНОВ, КОНТРОЛИРУЩИХ СИНТЕЗ РЕПРЕССИБЕЛЬШХ КИСЛЫХ ФОСФАТАЗ
1. Изучение генетического контроля синтеза
кислой фосфатазы 3 кфЗ .
1.1. Идентификация генов, мутации в которых
приводят к снижению активности кфЗ
1.2. Выяснение функций гена АСР5
1.3. Выяснение функций гена АСР1
2. Изучение ревертирования мутаций регуляторных генов
2.1. Ревертирование мутаций гена АСР2.
2.2. Ревертирование мутаций генов АСР, АСР, АСР,
АСР, АСР, АСР4
3. Идентификация генов, контролирующих
транспорт фосфата у дрожяей.
4. Картирование АСРгенов
5. Взаимодействие мутаций в гене АСР5 с мутациями
конститутивного синтеза в генах АСР4 и АСР .
Г л а в а 1У. ШЯВПЕНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ЭЛЕМЕНТОВ ОБЩИХ В РЕГУЛЯЦИИ КИСЛЫХ И РЕПРЕССИБЕЛЪНОЙ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗ
1. Введение
2. Выяснение влияния мутаций в АСРгенах на активность
репрессибельной щелочной фосфатази
3. Выяснение природы мутаций, одновременно
блокирующих активность кф и кф2III
3.1. Разработка метода картирования мутаций в гене Р0 III
3.2. Изучение рекомбинации мутаций, одновременно
приводящих к снижению активности кф и кф2
4. Изучение взаимодействия генов АСР5 и РН0.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ЛИТЕРАТУРА


Исключение составляют немногочисленные кластеры генов, обнаруженные У грибов, I234 И 5 У НеЙрОСПОры , i , , , у аспергилла x , , , I2 . 2 ii , , , I4 , В, i , , , 5 , 7 , v , , I42 7I0I , , дрожжей. В ряде работ, рассмотренных в обзоре Козак , показано, что в начальных этапах инициации и элонгации существуют значительные различия между про и эукариотами. Они заключаются, в частности, в том, что структура иВНК про и эукариот различна. Большинство иРНК прокариот полицистронны, при этом во внутренних сайтах эффективно осуществляется реинициация. Таким образом, у прокариот нет барьеров для инициации с внутренних промоторов. В то же время, рибосома эукариот не способна связываться с внутренними областями иИЖ, т. РНК функционально моноцистронны , мс i , . Кластеры, таким образом, могут быть либо тесно сцепленными генами, имеющими собственные промоторы, либо кодировать мультифункциональные полипептиды. Кластеры обоих типов идентифицированы у дрожжей. К кластерам первого типа относятся гены 7ii , ,I2 i . . ДНК . vi , . К таким кластерам относятся гены I2, кодирующие синтетазу жирных кислот . i, , . Поскольку организация кластера I2 отражает общие свойства кластеров этой группы, мы остановимся подробнее на его строении и биохимической организации продукта синтетазы жирных кислот, осуществляющей превращение малонил КоА в пальмитиновую кислоту рис. I. Б работе Кюна с соавторами было показано, что мультиэнзимный комплекс синтетазы жирных кислот кодируется двумя генами I и 2. Эти гены тесно сцеплены и функционально сложны, каждый из них кодирует более,чем один компонент синтетазы жирных кислот . Используя генетические и биохимические данные, удалось сопоставить энзиматические активности и соответствующие им гены. Используя метод электрофореза в полиакриламидном геле был определен молекулярный вес обеих субъединиц 00 Танго . Рис. Синтетазный комплекс, катализирующий образование жирных кислот у дрожжей по Ленинджер, . Цифрами в скобках указаны ферменты, катализирующие соответствующие реакции . АПБ белокпереносчик ацильных групп 2 дегидрогеназа 3 редуктаза2 4 трансацетилаза 5 малонилпальмитил трансфераза. Рис. Локализация компонентов синтетазы жирных кислот на полипептидахXи по Цупеп, . В генах i и 2 возникают мутации, изменяющие отдельные компоненты синтетазы жирных кислот, а также плейотропные мутации, блокирующие одновременно несколько функций. Плейотропные мутации возникают с частотой до , на основании чего, Кюн С соавторами предположили, ЧТО I2 полицистронный кластер оперонного типа, а плейотропные мутации это полярные мутации типа нонсенс, или сдвига считывания, расположенные на ОДНОМ конце . Однако в работе Швейцера с соавторами i при изучении субъединичного состава комплекса синтетазы жирных кислот дрожжей было показано, что локусы i и2 , кодируют скорее мультифункциональные полипептидные цепи, нежели несколько монофункциональных компонентов энзима. В этом случае плейотропный эффект должен быть более сложным явлением, а не сводиться к полярной мутации. Доказательства этой гипотезы были получены Тауро с соавт. . Были охарактеризованы мутации в гене i . Из них ревертировали за счт несцепленных супрессоров, за счт внутригенных супрессоров. Из мутаций были амберохр мутациями, амбер и 3 не супрессировались ни амбер, ни охр супрессорами. Одна из них оказалась мутацией типа сдвиг считывания, а две другие миссенсмутации. На основании анализа частот митотической рекомбинации этих мутаций, индуцированной Хлучами была построена карта . При этом оказалось, что все мутации, приводящие к исчезновению только одной активности были картированы в какойлибо одной области гена i П, уа уъ у .