Радиационный мутагенез у Bacillus subtilis и фага 105

• Автор: Кренева, Римма Александровна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Ленинград
• Количество страниц: 198 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. Обзор литературы.

1.1. Мутагенное действие УФсвета и ионизирующей радиации на клетки .i

1.1.1. Повреждения ДНК, вызванные УФсветом и ионизирующей радиацией.

1.1.2. Радиационный мутагенез у .i .

1.2. система репарации в.i и некоторые ее проявления.

1.2.1. Модель регуляции репаративных функцц.

1.2.2. система и УФмутагенез

1.2.3. реактивация и Vмутагенез.

1.2.4. Ингибирование клеточного деления и филаментация клеток

1.2.5. Индукция профагов
1.3. Основные системы репарации ДНК у .ii .
1.4. Мутагенное действие УФсвега и ионизирующей радиации на клетки .ii .
1.5. Проявление активности индуцибельной системы репарации У .ii
1.6. Генетическая трансформация у .ii и ее особенности
1.6.1. Компетентное состояние.
1.6.2. Связывание и поглощение ДНК
1.6.3. Рекомбинация.
1.6.4. Коррекция ошибочно спаренных оснований
1.6.5. Мутагенное действие излучений на трансформирующую ДНК
1.7. Дефектные по рекомбинации мутанты гес .
Стр.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. Материалы и методы.
ГЛАВА 3. Экспериментальные результаты.
3.1. Обнаружение эффектов реактивации и V мутагенеза у УФоблученного фага 5.
3.2. Субстратная специфичность V реактивации и V мутагенеза у фага 5
3.3. V реактивация и мутагенез у УФоблученного фага 5 в мутантах гес .
3.3.1. Влияние мутаций гес на выживаемость УФоблученных клеток и фага 5.
3.3.2. Влияние мутаций гес на реактивацию и
мутагенез
3.4. Мутагенное действие УФсвета на мутанты гес
3.5. Взаимоотношения между мутациями гес и температурочувствительной мутацией i .
3.6. Влияние гиперрадиорезистентной мутации 9 на радиационный мутагенез у фага 5.
3.7. мутагенез при трансформации .ii с помощью ДНК, модифицированной различными агентами.
3.7.1. Влияние эксцизионной репарации на мутагенное действие УФсвета на трансформирующую
3.7.2. Мутагенное действие УФсвета на разделенные нити трансформирующей ДНК.
3.7.3. Мутагенное действие квантов на трансформирующую ДНК.
3.7.4. VV мутагенез трансформирующей ДНК в УФоблученных реципиентных клетках
3.8. мутагенез при трансфекции компетентных клеток УФоблученной профаговой ДНК.
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов и выводы.
СПИСОК ЛШЕРАТУШ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Некоторые мутации в гене гесА например, гесА или i1 придают белку способность активироваться при повышенной температуре в отсутствие повреждений ДНК. У таких мутантов наблюдается тепловая индукция системк. Другие мутации в гене гесА делают белок дефектным по протеазной активности или ее активации, причем некоторые из них гесА0 не затрагивают рекомбинационную активность белка . В гене x получены мутации двух типов I доминантные мутации x i , делающие репрессор x нечувствительным К протеазе и устраняющие индукцию системы 2 рецессивные дефектные или температурочувствителыше мутации x , приводящие к конститутивности системы. К регулону ОТНОСЯТСЯ следующие гены . 3 v, v субъединицы эксцизионной эндонуклеазы 4 v АТФзависимая геликаза П 5 шшс и функхщи, непосредственно участвующие в УФмутагенезе 6 i ингибитор клеточного деления 7 i сайтспецифическая рекомбинация 8 А и гены плазмиды рКМтпт, функционально аналогичные хромосомным генам 9 и v компоненты пути рекомбинации и репарации гены i и с1о колициногенных и клоациногенных плазмид II гены i, i и i , функции которых неизвестны. К ЭТОЙ системе примыкают также индуцибельные профаги . ЬехА . Однако, репрессор А такке является субстратом для протеази есА и при активации последней протеолиткчески расщепляется на неактивные фрагменты. Рассмотрим теперь проявления активности боб системы, близкие к тем эффектам, которые мы изучали у Вас. Ьв. УФмутагенез. К репаративному мутагенезу под действием УФсвета и ионизирующей радиации непосредственное отношение имеют продукты боб генов гесА и шпиБС . Предполагается, что в необходимом для фиксации мутаций преодолении неспариваемых повреждений принимают участие измененные формы ДНКполимераз, имеющие ослабленную матричную специфичность и, вследствие этого, подставляющие основания дате против некодирующих модифицированных звеньев ДНК. Высказывалось предположение, что в ослаблении специфичности ДНКполимераз непосредственно участвуют продукты генов итиюс . В последнее время, однако, появились данные, показывающие, что продукт гена шшс не нужен для подстановки ошибочных оснований напротив ПД, а требуется для элонгации нитей ДЕК за блокирующим репликацию повреждением . Немутабильность мутантов гесАЙ 1ехА , дефектных по индукции БОБсистеш, может быть связана с их неспособностью синтезировать в нужном количестве продукты генов шшБС . Однако, роль белка НесА в УФмутагенезе не ограничивается его регуляторной боб активаторной функцией, так как штаммы ехАБегесА , дерепрессированные по шпиБС и другим боб генам, не мутируют под действием УФсвета . ДНКполшеразы Ш, ингибируя ее корректорскую 35 экзонуклеазную функцию . Дефект по УФмутагенезу у мутантов въ объясняется нарушением у них индукции системы, вероятно, на уровне образования активирующих сигналов 4. Наиболее наглядным проявлением репаративной активности индуцибельной системы являются эффекты реактивации и мутагенеза, впервые обнаруженные Вейглом еще в г. Они заключаются в том, что облучение клеток хозяина умеренными дозами УФсвета, индуцирующими систему, увеличивает выживаемость УФоблученного фага и повышает у него частоту индуцированных мутаций. Оба эти эффекта зависят от функций гена гесА и 1ехА 4 клеткихозяина и требуют синтеза белка v . ДНК агентами рентгеновскими лучами 1, метаболитами афлатоксина 1, тиминовым голоданием 4, митомицином С 9, переносом мутанта i1 на повышенную температуру или ингибированием репликации ДНК у термочувствительного мутанта . Они проявляются конститутивно у мутанта i1 , считающегося конститутивным по функциям 0. УФоблученного фага X, но и фагов, поврежденных другими агентами Vизлучением , азотистой кислотой 8,9, гидроксиламином 8, азотшш ипритом 8, метилметансульфонатом 8, видимым светом в присутствии фотосенсибилизаторов ,7 или депуринизацией 3,4.