Влияние генетической среды на эффекты геномного импринтинга в развитии партеногенетических клеточных клонов у химерных мышей

• Автор: Исаев, Дмитрий Александрович
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 96 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДШИЕ

ЧАСТЬ I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Партеногенез у млекопитающих и геномный импринтинг.

1.1. Партеногенез в различных группах животных и

у млекопитающих

1.2.Типы партеногенетнческих зародышей и пути партеногенетического развития яйцеклеток млекопитающих

1.3. Получение искусственных партеногснов млекопитающих. .

1.4. Развитие и причины гибели партеногенетических зародышей млекопитающих.

1.5. Геномный импринтинг

2. Использование химерных мышей

для изучения эффектов геномного нмпринтинга.
2.1. Химеры млекопитающих.
2.2. Партеногенетические химеры.
2.3. Андрогенетические химеры.
3. Заключение.
ЧАСТЬ II СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА.
1. Животные.
1.1. Анестезия, умерщвление.
1.2. Вазэктомия.
1.3. Суперовуляция, датировка беременности
2. Получение партеногенетическнх химер
2.1. Инструменты для работы с эмбрионами
2.2. Получение партеногенетическич и нормальных восьмиклеточных зародышей
2.3. Агрегация эмбрионов и культивирование т уИго.
2.4. Трансплантация бластоцист
3. Анализ распределения партеногенетическнх клеточных клонов . . .
3.1. Анализ распределения партеногенетическнх клонов мсланобластов в шерстном покрове
химер СВЬ6РСВАЕВс
3.2. Анализ распределения партеногенетическнх клеточных клонов в ретинальном пигментном эпителии
и сосудистой оболочке глаза
3.3. Электрофоретический анализ изоферментов глюкозофосфатизомеразы
3.4. Статистическая обработка данных
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Постнатальное развитие партеногенетическнх химер.
2. Анализ партеногенетическнх клеточных клонов у
химерных мышей СВ1У6РОВАЬВс
2.1. Распределение партеногенетическнх клонов мсланобластов в шерстном покрове.
2.2. Распределение партеногенетическнх клеточных клонов в ретинальном пигментном эпителии
и сосудистой оболочке глаз.
2.3. Распределение партеногснетических клеточных клонов во
внутренних органах и тканях шестимесячных химер.
3. Постнмплантационное развитие и клональный анализ партеногенетическнх химерных зародышей
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
1. Развитие партеногенетическнх химер
2. Эффекты геномного импрннтинга в развитии партеногенетическнх клеточных клонов СВЬ6РО и СВД
3.1 атгерн пигментации шерстного покрова партеногенетическнх химер СВЬ6РС ВАЬВс.
4. Билатеральное распределение
партеногенетических клеточных клонов.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Данные фундаментальных исследований в этой области имеют в перспективе прикладное значение в медицинской генетике и животноводстве. Предупреждение наследственных болезней человека на основе генетического прогнозирования и их коррекция, получение трансгенных животных и воспроизведение уникальных особей путем клонирования, а в будущем, возможно, и полноценная регенерация утраченных или пораженных органов, все это требует новых фундаментальных знаний о реализации генетической информации в развитии. Недавние успешные, но, вто же время, все еще уникальные эксперименты по клонированию i . . Млекопитающие являются единственным классом позвоночных, где не наблюдается партсногенетичсского т. Для нормального развития млекопитающих требуется оба набора хромосом материнский и отцовский. Механизм, регулирующий функциональные различия родительских i у плацентарных млекопитающих, был назван геномным импрннтингом i . Гены млекопитающих, которые наследуются от матери или отца в репрессированном состоянии, называют импрингированными. Импринтированные гены составляют примерно 0. , . Многие данные показывают, что возникновение геномного импринтинга обусловлено специфическим метилированием цитозиновых оснований ДНК i . i, . i. , . Возможность искусственной активации ооцитов млекопитающих к партеногенетнческому развитию положила начало довольно многочисленным исследованиям с использованием экспериментально получаемых партеногенез ичсских зародышей в качестве модельной системы для изучения эффектов геномного импринтинга в развитии млекопитающих. Первые эксперименты, повидимому, были связаны с попыткой получения таким путем генетически идентичных особей. Исследования по искусственному партеногенезу у млекопитающих проводятся, начиная с х годов i, . Дыбан, Хожай, и получения партсногенетических эмбрионов сомитных стадий , . В настоящее время наиболее распространенным объектом в этих исследованиях являются различные лабораторные линии домовой мыши и их гибриды. Несмотря на многие достоинства этой модельной системы, ранняя г ибель партсногенетнческих зародышей в большинстве случаев партеногенетическис эмбрионы мышей гибнут вскоре после имплантации и начала органогенеза накладывает определенные ограничения на ее использование. Вместе с тем, преодоление этих ограничений и получение более продвинутого развития партеногенетическнх зародышей является важнейшим подходом к изучению импринтированных генов, контролирующих определенные этапы развития и тканевой и органной дифференцировки. К методам, позволяющим получать более продвинутое развитие и повышающим процент сомитных стадий у партеногенетических эмбрионов относятся искусственная задержка имплантации . Пенков, Платонов, и ростовых факторов Пенков, Платонов, , культивирование постимплантационных эмбрионов i vi со вскрытым желточным мешком v . Дтя изучения потенций к развитию разных партеногенетическнх клеточных клонов используют химерных мышей. Химеры организмы, состоящие из двух или более генотипически различных родительских компонентов, широко используются в генетике развития млекопитающих для определения места действия генов и их эффектов , Конюхов и др . Химерных мышей, состоящих из партеногенетическнх и нормальных клеток, называют партеногенстическими химерами. Такие химеры способны развиваться до рождения и половой зрелости, причем партено v . i . v, . Большинство работ, связанных с использованием партеногенетическнх химер, приходится на конец х начало х годов. На основании многочисленных экспериментальных данных было установлено, что различные этапы индивидуального развития млекопитающих требуют последовательной экспрессии генов, импринтированных по отцовской линии такие импринты отсутствуют в геноме партеногенетическнх клеток. Тканевая специфичность экспрессии таких генов приводит к последовательной полной или частичной элиминации партеногенетическнх клеток в организме химер в процессе эмбрионального развития.