Анализ молекулярно-генетических нарушений, ассоциированных с развитием злокачественных новообразований почки

• Автор: Михайленко, Дмитрий Сергеевич
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 105 с. : 18 ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Эпидемиология и клиническая диагностика рака ночки.

1.2. ДНКдиагностнка наследственных форм рака почки.

1.3. Молекулярногенетические маркеры спорадического рака почки.

1.4. Инактивация гена УНЬ при светлоклеточном раке почки

1.5. Аллельные делении геновсупрсссоров

1.6. Метилирование СрСдинуклеотидов у человека.

1.7. Методы анализа метилирования.

1.8. Метилирование геновсупрсссоров при раке почки.
1.9. Полиморфизмы генов предрасположенности.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Клинический материал.
2.2. Выделение ДНК из различного клинического магериала.
2.3. Анализ мутаций в кодирующей части гена УНЬ.
2.4. Анализ потери гетерозиготности.
2.5. Обработка геномной ДНК метилчувствителыюй рестриктазой.
2.6. Метнлчувствительная ГИДР.
2.7. Электрофорез в полиакриламидном теле.
2.8. Тонкое окрашивание нитратом серебра
2.9. Электрофорез в агарозном теле
2 Секвеннрование ПЦРпродуктов
2 Обработка геномной ДНК бисульфитом натрия.
2 Бисульфитное секвеннрование.
2 Мультилокусная ПЦР полиморфизмов в генаx. 1, I и V
2 Определение методом минисеквенирования.
2 Статистический анализ данных.
2 Программное обеспечение
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Изучение инактивации гена V при спорадическом раке почки
3.2. Исследование аллельных делеций генов V, 1, I и ТР.
3.3. Изучение метилирования геновсупрессоров V, , I. 1 и 1 в опухолях почки.
3.4. Метилирование генакандидата XI3 при спорадическом раке почки
3.5. Анализ полиморфных вариантов генов АВСВ1, 1, I и V
заключение.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Впервые в России определены в норме частоты генотипов исследуемых генов I0 и , получены данные о возможном влиянии полиморфизмов в генах V и I на развитие опухолей почки. Практическая значимость Проведено комплексное молекулярногенетическое исследование 7 первичных опухолей почки светлоклеточных, папиллярных и хромофобных карцином. Оптимизирован метод комплексной оценки молекулярногенетических нарушений V соматических мутаций, аберрантною метилирования и потери гетерозиготности при СРП. Выявлена высокая частота повреждений гена V при СРП. Разработаны системы из двух маркеров для тестирования аллельных делений в областях локализации генов V, , I и ТР при РП. Определена ассоциация множественных аллельных делеции геновсуирессоров на Зр Р 0. и 1 с клиникоморфологическими характеристиками опухоли Р 0. РП. РП, в частности, определение мутаций и метилирования гена УИЬ при оптимизации таргетной терапии. Мутации, потеря гстерозиготности иили метилирование гена УНЬ происходят на ранних стадиях СРП в большинстве случаев заболевания. Потеря гстерозиготности двух и более геновсупрессоров, локализованных в области Зр, отражает прогрессию первичной опухоли. Аберрантное метилирование является существенным механизмом инактивации геновсупрессоров УНЬ, РНГГ, ЯКЯР СВН1 и наблюдается в первичных почечноклеточных карцином. Построена карта метилирования промотора генакандндата НОХВ при спорадическом РГ1. Метилирование генов ЯАБВП и С Н1 ассоциировано с прогрессией и метастазированием первичной опухоли, соответственно, что позволяет рассматривать их как составную часть системы молекулярных маркеров РП. Личное участие автора в получении результатов, изложенных в диссертации Автором проанализирована отечественная и зарубежная литература по теме диссертации. Все эксперименты и методики были разработаны и проведены лично Михайленко Д. С. Описание собственных исследований, обработка и обсуждение результатов выполнены автором самостоятельно. Михайленко Д. С. провел статистический анализ всех полученных данных, сформулировал выводы и написал статьи в научных журналах, отражающие результаты его диссертационной работы. Результаты исследования были представлены на ежегодных Европейских конференциях по генетике человека в гг. Российского общества онкоурологов в гг. Российском онкологическом конгрессе в г. Генетика в России и в мире в г. Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины в г. ГУ МГНЦ РАМЫ. Прочитана лекция на кафедре генетики Факультета усовершенствования врачей Российского государственного медицинского университета Росздрава. Результаты диссертационной работы отражены в печатных работах соискателя, в том числе, 6 статей опубликовано в журналах, рекомендованных ВАК МОН РФ соискателям ученой степени кандидата медицинских паук. Внедрение результатов работы в клиническую практику На основании результатов проведенной работы разработаны новые медицинские ДНКтехнологии Молекулярногенетическая методика оценки прогрессии первичной опухоли при светлоклеточном раке почки и Молекулярногенетическая методика оптимизации таргстной терапии при светлоклеточном раке почки Разрешения на применение новой медицинской технологии ФС 0 от и ФС 2 от , соответственно. Методические подходы, разработанные в диссертационной работе, используются в Межэтнической лаборатории молекулярных методов диагностики ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова анализ герминальных мутаций в гене УНЬ при диагностики синдрома ХнппеляЛиндау, определение аллельных делеций геиовсупрессоров в области Зр при спорадическом РП. Объем и структура диссертации Диссертационная работа изложена на 3 страницах машинописного текста, состоит из оглавления, введения, списка сокращений, обзора литературы, подробного изложения использованных материалов и методов, описания собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка цитируемой литературы, включающего 3 ссылки. Диссертация шипострирована таблицами и рисунками.