Молекулярно-генетический анализ недостаточности 21-гидроксилазы при врождённой гиперплазии коры надпочечников

• Автор: Осиновская, Наталья Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 143 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Биохимические и клинические аспекты врожднной гиперплазии коры надпочечников ВГКН
1.1.1. Врожденная гиперплазия коры надпочечников общее представление и клинические формы

1.1.2. Частота недостаточности гидроксилазы при ВГКН в различных популяциях

1.1.3. История изучения ВГКН

1.1.4. Биосинтез глгакокортикоидов и минералкортикоидов

1.1.4.1. Общая характеристика биосинтеза глюкокортикоидов и минералкортикоидов

1.1.4.2. Участие гидроксилазы и биохимические нарушения системы синтеза кортизола и альдостерона

1.1.5. гидроксилаза структура и функция белка

1.2. Молекулярная основа и генетический анализ недостаточности гидроксилазы

1.2.1. Структура и локализация генов СУРА2 и СУРАР
1.2.2. Анализ мутаций, обуславливающих недостаточность гидроксилазы
1.2.2.1. Общая характеристика мутаций, обуславливающих недостаточность гидроксилазы
1.2.2.2. Конверсия гена как механизм возникновения химерных генов
1.2.2.3. Спектр мутаций, характерных для Европейских популяций
1.2.3. Корреляция генотип фенотип
1.2.4. Генетическая диагностика недостаточности гидроксилазы
2. МАТЕРИЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Реактивы, ферменты, оборудование
2.2. Характеристика группы обследуемых больных
и популяционной выборки
2.3. Методы исследования
2.3.1. Выделение ДНК из лейкоцитов периферической
крови человека
2.3.2. Выделение ДНК из пятен крови
2.3.3. Полимеразная цепная реакция ПЦР
2.3.4. Рестрикционный анализ
2.3.5. Гетеродуппексный анализ
2.3.6. Проведение электрофореза и визуализация результатов
2.3.7. Методы статистического анализа
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Частоты мутаций гена СУРА2 в Северозападном регионе России при классических формах недостаточности гидроксилазы СТФсольтеряющая и ПФпростая формы
3.2. Частоты мутаций гена СУРА2 в Северозападном регионе России у больных с подозрением на неклассическую
форму НФ недостаточности гидроксилазы
3.3. Идентификация новой химерной конструкции в локусе 6р.
3.4. Анализ химерных генов в локусе 6р.3
3.5. Анализ корреляции генотипфенотип
3.6. Анализ полиморфизма в экзоне 2 гена Н1ЛА1
3.6.1. Распределение аллельных вариантов гена Н1ЛЭА1 у пациентов с СТФ, ПФ, НФ недостаточности гидроксилазы и
в популяционной выборке
3.6.2. Частоты аллелей гена НЬА0А1 на хромосомах, несущих различные мутации в гене СУРА2
3.6.3. Анализ частот генотипов по гену 1 в различных группах больных с недостаточностью гидроксилазы и в популяционной выборке
3.7. Анализ повторов в гене I
3.7.1. Распределение аллелей гена М1СА у пациентов с СТФ, ПФ, НФ недостаточности гидроксилазы и в
популяционной выборке
3.7.2. Частоты аллелей гена I на хромосомах, несущих различные мутации в гене 2
3.7.3. Анализ частот генотипов по гену I в различных группах больных с недостаточностью гидроксилазы
и в популяционной выборке
3.8. Диагностическая ценность полиморфных систем генов I и I1 и оценка перспективности их использования для пренатальной диагностики недостаточности гидроксилазы
3.9. Принципиальная стратегия пренатальной диагностики в семьях
с недостаточностью гидроксилазы
4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ВВЕДЕНИЕ


Впервые проведен анализ частот аллелей и генотипов по гену I у больных с различными формами недостаточности гидроксилазы. Впервые определена информативность повторов гена I для диагностики недостаточности гидроксилазы. Выявлено неравновесие по сцеплению между мутациями в гене 2I2 и аллелями гена I. ПФ и популяционной выборкой. Впервые проведена оценка информативности семей с высоким риском рождения ребнка с недостаточностью гидроксилазы, основанная на комплексном исследовании мутаций в гене 2 и полиморфизмов генов 1 и I. В результате исследования спектра мутаций в гене и полиморфизмов генов 1 и I разработана оптимальная схема молекулярного обследования семей, попадающих в группу риска по рождению ребнка с ВГКН. Определен тип мутационных повреждений и проведена пренатальная диагностика недостаточности гидроксилазы в семьях, имеющих детей с ВГКН. Полученные результаты явились материалом для подготовки методических рекомендаций по пренатальной диагностике ВГКН. Основные положения, выносимые на защиту. Показано, что для каждой клинической формы недостаточности гидроксилазы характерен свой специфический спектр мутаций в гене 2I2 . Показано, что клиническое проявление недостаточности гидроксилазы зависит от тяжести молекулярного дефекта в гене 2. Так, при тяжелых мутациях соответствие фенотипа генотипу равно , при легких 0 и в группах с мутациями средней тяжести ,5. Описана новая химерная конструкция тип 2, состоящая из последовательности гена и псевдогена. У больных с неклассической формой недостаточности гидроксилазы химерные конструкции генпсевдоген тип 2 выявлены с частотой в 2,5 большей, чем в популяционной выборке. Выявлены достоверные отличия в распределении частот аллелей гена 1 между группой больных с СТФ недостаточности гидроксилазы и популяционной выборкой. Выявлены статистически значимые различия между группой больных с СТФ и популяционной выборкой по частотам аллелей гена МО. Показано, что комплексный анализ полиморфизмов в генах ЬИАйА1 и М1СА позволяет повысить информативность семей для пренатальной диагностики до . Апробация работы. Результаты работы представлены на 9м международном семинаре по клинической генетике Кипр, , на Международной конференции по реабилитации детейинвалидов с редкими генетическими заболеваниями Врачи мирапациентам С. Пб, , на Конференции по прогрессу в профилактике наследственных болезней Прага, , на Европейском конгрессе по генетике человека Вена, , на 4м Всероссийском конгрессе эндокринологов С. Пб, , на конференции Врачи мира пациентам СПб. Европейском конгрессе по генетике человека Мюнхен, и Прага, , на конф. Современное состояние и новые подходы в дородовой профилактике наследственных болезней и врожднных пороков развития С. Пб, , на конф. Молекулярнобиологические технологии в медицинской практике Новосибирск, , на конф. Москва,, на конф. Молекулярная медицина и биобезопасность Москва, . Диссертация апробирована на научных семинарах Лаборатории пренатальной диагностики наследственных и врожднных болезней ГУ НИИАГ им. Д.О. Огга. Публикации. По материалам диссертации опубликовано работ. Объм н структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 3 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части материалы и методы, описание результатов и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 6 ссылок. Диссертация иллюстрирована Таблицами и рисунками. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Врожденная гиперплазия коры надпочечников общее представление и клинические формы. Известно, что пониженное образование кортизола приводит к повышению секреции адренокортикотропных гормонов АКТГ с последующим развитием гиперплазии коркового слоя коры надпочечников. При синдроме врожденной гиперплазии коры надпочечников характерна триада признаков низкий уровень кортизола, высокое содержание АКТГ в крови, двусторонняя гиперплазия надпочечников. Кузнецова, , Потемкин, , . I и II типа . Недостаточность гидроксилазы встречается наиболее часто из всех перечисленных форм врожднной гиперплазии коры надпочечников. Рис. Схема биосинтеза гормонов в коре надпочечников.