Влияние полиолов, антиоксидантов и режимов криоконсервации на функциональную полноценность семени быков-производителей

• Автор: Делеу, Василий Георгиевич
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1983
• Место защиты: Кишинев
• Количество страниц: 219 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ .

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. II

1.1. Теоретические основы замораживания биологических объектов . II

1.2. Морфологические, биохимические и физиологические изменения в семени сельскохозяйственных животных под действием низких температур
1.3. Защитный эффект различных компонентов синтетических сред при замораживании семени производителей сельскохозяйственных животных
1.4. Действие различных способов технологической обработки семени на жизнеспособность гамет быковпроизводителей

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Общие методические положения

2.2. Морфологические и биохимические исследования семени быковпроизводителей .

а Морфологическое состояние акросомы

б Методика определения сульфгидрильных групп в семени быковпроизводителей .
в Определение устойчивости связи между белками
и липидами.
г Методика определения активности глутаминоаспарагиновой трансаминазы в плазме семени сельскохозяйственных животных К.6.2,6.1.1.
д Определение аминокислот в гаметах быковпроизводителей .
2.3. Определение оптимальной концентрации веществ при разработке синтетической среды для разбавления и замораживания семени быковпроизводителей в полимерных соломинках.
2.4. Изучение действия разных режимов охлаждения семени на биохимические и морфологические показатели гамет быковпроизводителей.
2.5. Изучение влияния разных режимов охлаждения, замораживания и оттаивания семени быковпроизводителей на физиологические показатели
2.6. Научнопроизводственный опыт по осеменению
коров и телок
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Морфологические и биохимические изменения гамет под действием замораживания и оттаивания семени быковпроизводителей.
3.2. Действие антиоксидантов на биохимические и морфологические показатели гамет быковпроизводителей.
3.3. Выявление оптимальных режимов охлаждения, замораживания и оттаивания семени быковпроизводителей в полимерных соломинках.
3.4. Научнопроизводственный опыт по изучению эффективности установленных режимов охлаждения, замораживания и оттаивания семени быков
в полимерных соломинках
3.5. Сравнительная оценка эффективности применения способов замораживания семени быковлроизводителей в полимерных соломинках и в форме
открытых гранул
3.6. Эффективность использования различных синтетических сред для разбавления и замораживания семени быковпроизводителей в полимерных соломинках.
3.7, Разработка новой синтетической среды для разбавления и замораживания семени быковпроизводителей в полимерных соломинках
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


При криоконсервации других биологических объектов костный мозг, эритроциты и др. Н.С. Пушкарь и А. Они возникают при быстром замораживании клеток в водных растворах, когда внутриклеточная вода не успевает выйти в межклеточное пространство . Подтверждающим положением о разрушении гамет при замораживании, под действием кристаллов льда, служат также исследования Е. М.Платова с сотрудниками , , , . Так, при помощи люминисцентной микроскопии в падающем свете Е. М.Платов и Т. М.Лаптева , изучали процессы кристаллизации в семени при его замораживании. Ишобнаружено, что режим замораживания влияет на интенсивность процесса образования и форму кристаллов, которые в свою очередь оказывают действие на выживаемость гамет. Кристаллы льда, образующиеся в начальный период медленного замораживания, оттесняют гаметы в жидкую фазу, где они распологаются в межкристалльных пространствах. При дальнейшем охлаждении вода витрифицируется не только внутри, но и снаружи клеток, образуя вокруг них защитный слой некристаллической воды. На основе полученных данных Е. М.Платов , пришел к выводу о том, что замерзание семени является сложным физикохимическим процессом, при оптимальном режиме которого клетки находятся почти в обычном для себя окружении, т. Согласно А. М.Белоусу, В. А.Бондаренко и др. Таким образом, согласно этим представлениям, мембрана клеток оказывается уже лабилизованной в зоне дооколонулевых температур. Снижение температуры ниже 0С и фазовое превращение в системе водалед инициируют развитие вторичных механизмов криоповреждений и углубление ранее возникших структурных нарушений. Вторичные изменения приводят к образованию дефектных зон в мембране, изменению ее проницаемости и объема. Эти процессы могут носить обратимый характер, то есть проходить как при понижении температуры в интервале 0 минус С, так и при ее повышении. Одновременно в мембране наблюдается активирование или проявление ряда биохимических реакций, развитие лерекисного окисления липидов, активирование фосфолипаз, окисление ЭН групп , вызывающих качественные изменения фосфолипидов и белков. Вышеизложенные изменения мембран в зоне дооколонулевых и субнулевых температур в совокупности обуславливают углубление их нестабильности, что может привести к осмотическому шоку в момент отогрева и гибели клетки. Таким образом, при разработке способов предотвращения вредных последствий замораживания биологических объектов необходимо в каждом конкретном случае учитывать наиболее характерные особенности криоповреждения и противопоставлять им эффективные способы защиты. Дальнейшее повышение эффективности метода длительного сохранения семени сельскохозяйственных животных в глубокоохлажденном состоянии требует проведения фундаментальных и прикладных исследований в направлении выяснения физикохимических, морфологических и биохимических изменений гамет в процессе замораживания и оттаивания и их влияния на функциональную полноценность семени после его деконсервации. Гаметы самцов сельскохозяйственных животных отличаются от других интактных клеток тем, что им присущ катаболический тип обмена веществ. Поэтому поддержание гомеостаза гамет сводится прежде всего к стабилизации их морфологических, биохимических и физиологических показателей. В многочисленных работах отечественных и зарубежных исследователей установлено, что на каждом этапе технологической обработки семени при его криоконсервации гаметы подвергаются определенным морфологическим , биохимическим и физиологическим изменениям . Так, В. Н.Миловаловым, А. Н.Варнавским, В. А.Науком , , Ф. И.Осташко и др. Что касается морфологических изменений акросомы, то имеющиеся литературные данные свидетельствуют о наличии видовых особенностей повреждения указанной структуры гамет. Так, в электронномикроскопических исследованиях А. Н.Варнавского , , , Р. ИаЬзоп еЪ а1. Повышенное число дефектов от набухания акросомы до повреждения всего акросомного комплекса установлено еще до замораживания, а затем после оттаивания семени быков, отличающегося низкими физиологическими показателями в процессе технологической обработки V еЪ а1.