Сравнительное исследование белково-липидного состава мембран микросом тканей позвоночных животных

• Автор: Медведева, Татьяна Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Самара
• Количество страниц: 349 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .

1.1. Современные представления о строении и функционировании биологических мембран

1.1.1. Химические компоненты.

Мембранные липиды.

Мембранные белки

1.1.2. Детергенты в изучении строения и свойств

биомембран .

1.1.3. Структура и динамика бислоя.

1.1.4. Белоклипидные взаимодействия основа жизнедеятельности мембран.

1.2. Эволюция белковых структур и состава
липидов мембран беспозвоночных и позвоночных животных .
2. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Объекты исследования
2.2. Выделение фракций микросом
2.3. Контроль чистоты мембранных фракций.
2.4. Выделение мембранных белков.
2.4.1. Определение содержания белка
2.4.2. Аминокислотный анализ белков
2.4.3. Электрофорез белков в ИААГ
2.5. Экстракция липидов
2.5.1. Определение массы липидов.
2.5.2. Определение содержания холестерина
2.5.3. Определение содержания липидного фосфора.
2.6. Выделение фосфолипидов.
2.6.1. Хроматография фосфолипидов.
2.6.2. Идентификация фосфолипидов.
2.7. Математическая обработка результатов.
3. ОЦЕНКА СТЕПЕНИ ЧИСТОТЫ
ПРЕПАРАТОВ МИКРОСОМ
4. СОДЕРЖАНИЕ МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ
В МИКРОСОМАХ ПЕЧЕНИ И МОЗГА ПОЗВОНОЧНЫХ.
4.1. Периферические и интегральные белки печени.
4.2. Периферические и интегральные белки мозга
4.3. Сравнительный анализ содержания мембранных
белков в микросомах печени и мозга.
5. АМИНОКИСЛОТНЫЙ СОСТАВ БЕЛКОВ
МЕМБРАН МИКРОСОМ ПЕЧЕНИ И МОЗГА ПОЗВОНОЧНЫХ
5.1. Периферические белки печени
5.2. Интегральные тритонрастворимые белки печени.
5.3. Интегральные ДЦСрастворимые белки печени
5.4. Периферические белки мозга.
5.5. Интегральные тритонрастворимые белки мозга .
5.6. Интегральные ДДСрастворимые белки мозга.
5.7. Сравнительная характеристика аминокислотного
состава мембранных белков печени и мозга.
6. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ БЕЛКОВ МЕМБРАН МИКРОСОМ ПЕЧЕНИ И МОЗГА ПОЗВОНОЧНЫХ
6.1. Периферические белки печени
6.2. Интегральные тритонрастворимые белки печени.
6.3. Интегральные ДДСрастворимые белки печени.
6.4. Периферические белки мозга
6.5. Интегральные тритонрастворимые белки мозга.
6.6. Интегральные ДДСрастворимые белки мозга
6.7. Сравнительные аспекты электрофореза
мембранных белков печени и мозга.
7. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СОСТАВА МЕМБРАН МИКРОСОМ ПЕЧЕНИ, МОЗГА И
МЫШЦ ПОЗВОНОЧНЫХ
7.1. Содержание фосфолипидов.
7.2. Содержание холестерина
7.3. Соотношения мембранных белков и липидов.
8. МЕМБРАННЫЕ ФОСФОЛИПИДЫ ПЕЧЕНИ
И МОЗГА ПОЗВОНОЧНЫХ .
8.1. Фосфолипидный состав микросом печени
8.2. Фосфолипидный состав микросом мозга.
8.3. Сравнительная характеристика фосфолипидного
состава мембран микросом печени и мозга.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Спинмеченые ФХ, жирные кислоты и стерины вращаются в жидкокристаллических модельных липидных бислоях относительно оси, перпендикуляр ной плоскости бислоя,с временем корреляции с , . Движение углеводородных цепей состоит из торсионных колебаний с относительно малой амплитудой вокруг каждой из связей и трансгошизомеризацни отдельных звеньев Ивков, Берестовский ,. i. , Бергельсон, , , , , V . Болдырев, Сим, . Холсстсрин в фосфатидилхолиновых бислоях обладает подвижностью, которая в различных участках молекулы неодинакова наибольшей подвижностью обладает изопропильная группировка в уг леводородной цепи холестерина . С оказались равными 1, 1, . . Трансбислойная миграция фосфолипидов протекает с различной скоростью в зависимости от типа фосфолипида, природы мембраны и условий эксперимента полупериод трансбислойного движения ФХ изменяется от секунд в мембранах iiv до 4,5 часов в эритроцитах крысы и нескольких суток в других мембранах i, . Известен и гораздо более короткий полупериод трансмембранного движения ФЭА порядка нескольких минут в растущих клетках i i , , . На скорость процесса влияет содержание белка ii . . ФХСФМ, доля полиненасыщенных жирных кислот i . В последние годы появились работы, подтверждающие гипотезу флиппаз, т. ii, . Ланге с соавторами . В то же время Блодж и Зильверсмит , ivi, полагают, что холестерин каждого монослоя образует свой пул, и обмен между ними происходит с полу временем 2,3 часа. Используя холестериноксидазу для окисления холестерина на одной стороне монослойных везикул, и ii определили, что трансмембранное движение холестерина происходит очень быстро с полупериодом 1 минута при 0 С. Традиционно в мембране классифицируют как возможные следующие типы движения белковой молекулы трансглобулярный конформационный переход, ротационная диффузия, латеральная диффузия, движение с переносом части молекулы через фазу мембраны и трансмембраиная диффузия Островский , Болдырев, , vi, , , . . , , , , Сим, . Время релаксации или ротационной диффузии в диапазоне от до i,i . . . v . i . , , ii . , i, ii . . Время жизни кластеров порядка с , количество молекул в кластере от нескольких десятков до сотен , межкластерные области i образовывать зоны дефектов Ивков, Берестовский, , i, , Ивков и др. Болдырев и др. . Холестерин в мембранах существует в виде латеральных и трансбислойных доменов а Упорядоченные микродомены фосфолипидов и холестерина образуются в диапазоне концентраций холестерина 5 моль i, ii, , при концентрации моль появляются чистые холестериновые домены Холодова, Лопухин и др. ii, , . фосфолипидных бислоях в диапазоне концентраций холестерина 6 моль обнаружены как обедненные, так и обогащенные стерином домены , , . Разработка методов оценки локализации фосфолипидов в мембране с использованием липидпереносящих белков, фосфолипаз, химических модификаторов, иммунологических методов позволила подтвердить асимметрию нативного бислоя как для белков, так и для липидов i . , , , v, Бергельсон, Дятловицкая, Барсуков и др. Бергельсон, . Неравномерность распределения липидов между двумя сторонами бислоя определяется липидбелковым взаимодействием, асимметрией липидного синтеза и флипфлоп переходами , , , , Болдырев, . Явление асимметрии бислоя обнаружено в мембранах эритроцитов . . i . , v, i . , , i .