Механизмы действия оксида азота на кальций-активируемые калиевые каналы большой проводимости в гладкомышечных клетках магистральных сосудов крысы

• Автор: Грибкова, Ирина Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 139 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение

Литературный обзор.

Введение.

I Гладкомышечные клетки физиологическая функция,

злекгрофизиологические особенности, электровозбудимая

мембрана.

1. Физиологическая функция гладкомышечных клеток

2. Электрофизиологическис особенности гладкомышечных клеток.

3. Электровозбудимая мембрана гладкомышечных клеток.

3.1 Входящие токи
3.2 Выходящие токи.
П Калышйактивируемые калиевые каналы КСа гладкомышечных клеток.
1. Физиологическая роль Ко,каналов.
2. Элементарные свойства и структура Ксаканалов
3. Регуляция Кспканалов
III Эндогенный и экзогенный 0 и некоторые механизмы его действия
на Ксаканалы
1. Эндогенный 0 и доноры 0
2. Механизмы действия 0 на сосуды, участие КСаканалов
2.1 сОМРзависимое действие 0 на Кканаль
2.2 Исследование возможности прямого действия 0 на
Ксаканалы.
Заключение.
Материалы и методы.
1. Метод локальной фиксации потенциала. Регистрация токов
2. Растворы и реактивы для экспериментов.
3. Выделение клеток для экспериментов
4. Обработка записей токов одиночных каналов и интегральных
гоков от целой клетки
Результат ы экспериментов и их обсуждение
I Характеристики выходящих токов гладкомышечных клеток хвостовой артерии крысы
1. Характеристики интегральных выходящих гоков.
2. Характеристики токов через одиночные ионные каналы
II Исследование механизмов действия 0 на кальцийакт ивируемые
калиевые каналы в РЦКконфигурации.
1. Действие донора 0 ЭМ на интегральные Кстоки
гладкомышечных клеток хвостовой артерии крысы.
Эффект МАТР
2. Действие на интегральные Кстоки гладкомышечных клеток хвостовой артерии крысы в присутствии гидроксокобаламина
3. Действие физиологического раствора на интегральные КСатоки гладкомышечных клеток хвостовой артерии крысы.
4. Действие на Ксток в присутствии ибериотоксина.
5. Действие на Ксаток в присутствии ингибитора .
Ш Исследование механизмов действия 0 на кальцийактивируемые
калиевые канаты на изолированных фрагментах мембраны
1. Действие доноров и на одиночные К дканачы изолированных фрагментов мембраны гладкомышечных клеток хвостовой аргерии крысы.
2. Добавление на изолированные фрагменты мембраны, предварительно обработанные блокатором 1
3. Добавление экспериментального раствора на изолированные фрагменты мембраны
Заключение
Выводы.
Список литературы


Среди этих факторов оксид азота 0 сильный вазодилататор в различных областях сосудистого русла. Доноры 0 широко используются в клинической практике. В настоящее время известно, что вазодилатирующий эффект 0 опосредуется различными механизмами. Одним из таких механизмов является активация оксидом азота кальцийактивируемых калиевых каналов большой проводимости в сосудистых гладко. . . . . . . Сейчас становится ясно, что данный механизм дат основной вклад в расслабление сосудов под действием i . , . Однако сам процесс, посредством которого 0 активирует каналы, нсдостагочно изучен. Существуют две гипотезы, объясняющие эффект 0 на Кс. и активацией зависнмон прогеинкиназы . , в свою очередь, увеличивает активность Ко,каналов путм фосфорилирования каналформирующих белков . . . ii . . i . . i . . Другая гипотеза утверждает, что активирует Ксаканалы независимо от . , то есть предполагается прямое действие 0 на Кс8канал i . iv . i . . i . . Однако этот механизм прямого действия является спорным Не все данные могут подтвердить наличие такого действия i . . i . . . . . i . К тому же обнаружено, что внутриклеточные компоненты, такие как протеинкинаэы или даже инозитолтрифосфатзависимые кальциевые депо, могут присутствовать на изолированных фрагментах мембраны . Xi . Следовательно, в экспериментах с изолированными фрагментами мембраны, которые обычно использовались для доказательства прямого действия 0 на Кс,каналы, необходимо применять ингибиторы гуанилатциклазы и . Такие данные в настоящее время в литературе отсутствуют. 0 на Ксаканалы не может рассматриваться, как установленный факт. В представленной работе при изучении прямого действия 0 на Кгдканалы на изолированных фрагментах мембраны гладкомышечных клеток хвостовой артерии крысы впервые показано, что добавление специфического ингибитора РКО не изменяет действия донора 0 БЫР на Кс. РКС не принимает участия в эффекте 0 на изолированных фраз ментах мембраны. Также в данной работе проводились тщательные контроли, включающие добавление физиологического раствора без какихлибо активных агентов с внутриклеточной стороны мембраны, позволившие подругому интерпретировать полученные нами данные с использованием доноров 0. То есть впервые проведены контрольные эксперименты, оказавшиеся принципиально важными при решении данного вопроса. Новым в экспериментальной практике явилось использование в работе хелатора 0группы гидроксокобаламина Кгизгупа е1 а1. 0 8ЫР обусловлено высвобождаемым им оксидом азота, а не какимлибо другим химическим соединением, также выделяемым этим донором 0. Представленные в настоящей работе данные имеют теоретическое значение. 0 связано с активацией Ксаканалов через сОМРзависимос фосфорилированис кап алформирующих белков, прямое действие 0 на Ко,каналы маловероятно. То есть данные настоящей работы вносят вклад в понимание механизмов функционирования мембраны клеток сосудов, а значит механизмов, контролирующих сосудистый тонус, который, в свою очередь, связан, по крайней мере частично, со множеством различных патологий. Полученные результаты могут иметь практическое значение. Они могул быть использованы при разработки новых препаратов, обладающих выраженным сосудорасширяющим действием. Цель работы состояла в изучении механизмов действия 0 на Коканалы в свежеизолированных гладкомышечных клетках хвостовой артерии крысы. Адекватным методом для решения поставленной задачи явился метол локальной фиксации потенциала, позволивший исследовать как характеристики интегральных ионных токов от целых клеток, так и токи одиночных ионных каналов на изолированных фрагментах мембраны гладкомышечных клеток.