Механизмы действия пептида Семакс на центральную нервную систему: роль нейротрофинов

• Автор: Долотов, Олег Валентинович
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 127 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ
ЦЕЛЬ РАБОТЫ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Пептидное семейство меланокортинов

Меланокортины как нейропептиды

Локализация меланокортинов в мозге млекопитающих

Общие трофические свойства меланокортинов

Влияние меланокортинов на нейроны ЦНС

Ноотропные и нейропротекторные эффекты меланокортинов

Ноотропные и нейропротекторные эффекты Ссмакса
Общая характеристика семейства нейротрофинов
Характеристика нейротрофина
Экспрессия в нервной системе
Строение гена и регуляция его транскрипции
Рецепторы для
Суточные колебания уровня
Факторы, влияющие на экспрессию в ЦНС
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Приготовление, хранение и проверка чистоты препаратов Семакса
Выделение плазматических мембран мозга
Определение концентрации белка
Радиолигандный анализ
Изучение деградации Семакса в присутствии плазматических мембран и клеточных культур
Получение и ведение первичных клеточных культур
Оценка выживаемости нейронов i vi
Оценка уровня пролиферации клеток Определение уровня в отделах мозга крысы i viv Оценка уровня экспрессии мРНК нейротрофинов в культуре нейроглии
Оценка уровня экспрессии мРНК и мРНК i viv Оценка уровня экспрессии мРНК в культуре нейроглии Статистическая оценка результатов РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. Связывание Семакса с плазматическими мембранами базальных ядер переднего мозга крысы
2. Деградация Семакса в присутствии плазматических
мембран, культивируемых нейронов и нейроглии базальных ядер переднего мозга крысы
3. Влияние Семакса на пролиферацию нейроглии базальных ядер переднего мозга крысы i vi
4. Влияние Семакса на выживаемость культивируемых нейронов базальных ядер переднего мозга крысы
5. Влияние Семакса на экспрессию мРНК и в культуре клеток нейроглии базальных ядер переднего мозга крысы
6. Влияние Семакса на уровень в базальных ядрах переднего мозга крысы i viv
7. Влияние Семакса на экспрессию в гиппокампе, мозжечке и коре больших полушарий мозга крысы i viv
8. Влияние Семакса на экспрессию в гиппокампе крысы ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Список опубликованных работ по теме диссертации
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Получить данные относительно существования связывающих центров Семакса на плазматических мембранах мозга крысы. Изучить основные характеристики связывания Семакса специфичность, зависимость от времени, обратимость, аффинность и концентрацию связывающих центров. Изучить деградацию Семакса в присутствии плазматических мембран и культур клеток нейроглии и нейронов базальных ядер переднего мозга крысы. Изучить влияние Семакса на выживаемость нейронов различной эргичности, полученных из базальных ядер переднего мозга крысы. Пептидное семейство меланокортинов. Меланокортины являются семейством нейропептидов, принадлежащим к группе так называемых стрессовых пептидов, продуцирующихся с помощью протеолиза из молекулыпредшественника проопиомеланокортина ПОМК. Проопиомсланокортин является источником нескольких интересных семейств нейропептидов рис. В свою очередь, Ыконцевые фрагменты ДКТГ, представляющие первые аминокислот последовательности АКТГ, лишены способности стимулировать адренокортикальную секрецию. Последовательность АКТГЫЗ соответствует амеланоцитстимулирующему гормону аМСГ, структура которого идентична для всех позвоночных, в отличие от Р и уМСГ. Пептиды с аминокислотными последовательностями, входящими в последовательность аМСГ, получили название меланокортины, или МСГпептиды. К меланокортинам часто относят 2, и их аналоги, содержащие замены в природной аминокислотной последовательности, модифицированные и Оаминокислоты, в связи с чем представляется справедливым включение в это семейство и пептида Семаке. Наиболее длинный представитель меланокортинов аМСГ изначально был известен как соединение, стимулирующее синтез меланинов и увеличение размеров и количества пигментных клеток в кожных покровах. Тем не менее, исторически сложившееся название меланокортины будет употребляться и далее в смысле семейства пептидов с аминокислотными последовательностями, родственными фрагменту АКТГЫЗ рис. Минимальным эндогенным меланокортином считается пептид АКТГ4. Рис. Схема процессинга проопиомеланокортина. Рис. Структура меланокортинов и некоторых их аналогов. Меланокортины как нейропептиды. Начиная с х годов благодаря работам Д. Вида . i началось интенсивное изучение нейроактивных свойств меланокортинов . В х годах было показано, что АКТГ обладает не только к тому времени хорошо изученными эндокринными эффектами, но и способностью влиять на поведение. Влияние на поведение было затем показано и для аМСГ и для более коротких меланокортинов. С другой стороны, в дальнейшем было обнаружено, что и ПОМК, и АКТГ, и фрагменты ЛКТГ в том числе и аМСГ иммунохимически детектируются в мозге . Более того, было обнаружено присутствие мРНК для проопиомеланокортина в ряде отделов мозга . Эти данные позволили придти к выводу, что АКТГ и меланокортины являются эндогенными по отношению к мозгу соединениями, и центральная нервная система не только служит мишеныо для этих пептидов, но и может сама продуцировать их. Локализация меланокортинов в мозге млекопитающих. Проблема места синтеза меланокортинов. Нормальный и поврежденный мозг. Иммунохимическая локализация меланокортинов в основном проводилась с использованием антител к аМСГ и АКТГ4. Присутствие аМСГ было обнаружено в мозге взрослой крысы, причем концентрация этого пептида для разных отделов мозга существенно различна . Наибольшая концентрация аМСГ обнаружена в гипоталамусе, а в пределах гипоталамуса в аркуатном ядре. В остальных отделах мозга концентрация аМСГ на 1 2 порядка ниже Таблица 1. Эксперименты на тканевых культурах показали, что нейроны аркуатного ядра синтезируют ПОМК . Учитывая, что отростки нейронов аркуатного ядра гипоталамуса проникают в другие отделы мозга, можно предположить, что источником аМСГ для них служит именно аркуатное ядро. Действительно, разрушение аркуатного ядра приводит к существенному снижению уровня аМСГ в остальных отделах мозга . С другой стороны, при удалении гипофиза происходит снижение уровня аМСГ в гипоталамусе .