Экспериментальные исследования регуляции эритропоэза в культуре эритробластических островков

• Автор: Тишевская, Наталья Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Курган
• Количество страниц: 261 с. : 25 ил.

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные представления об эритропоэзе и структуре эритрона.

1.1.1. Стволовая кроветворная клетка и ее пролиферативный потенциал.

1.1.2. Особенности пролиферации и дифференциации поли и бипотентных коммитированных клетокпредшественниц.

1.1.3. Транскрипционные факторы, определяющие фенотип . эритроидных клеток

1.2. Современный взгляд на гуморальную регуляцию эритропоэза

1.2.1 .Механизмы действия цитокинов и их значение в регуляции развития эритроидных клеток

1.2.2. Эритропоэтинпродуцирующие клетки и

регуляция их функции.

1.2.3. Биохимическая структура молекулы эритропоэтина. . Характеристика гена эритропоэтина.
1.2.4. Характеристика эритропоэтинчувствительных клеток. Функции эритропоэтина.
1.2.5. Особенности рецепции эритропоэтина клеткамимишенями
1.3. Роль гемопоэтического микроокружения и межклеточных взаимодействий в регуляции эритропоэза
1.3.1.Гликозаминогликаны и протсогликаны.
1.3.2.Структурные фибриллярные белки коллаген, эластин.
1.3.3.Адгезивные белки фибронектин, хемонектин, ламинин, тромбоспондин, СБ
1.4. Эритробластический островок функциональноанатомическая единица эритрона
Глава 2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1.Техника культивирования эритробластических островков костного мозга крысы.
2.1.1. Оборудование
2.1.2. Состав культуральной среды
2.1.3. Характеристика лабораторных животных, костный мозг которых использовался в качестве источника ЭО
2.1.4. Выделение ЭО из костного мозга бедренных костей крысы и получение материала для культивирования.
2.2. Морфологическая оценка клеток в культуре ЭО .
2.3. Оценка пролиферативной активностиэритроидных клеток.в культуре ЭО .
2.4. Исследование фагоцитарной активности центральных макрофагов в . культуре ЭО
2.5. Метод выделения фракций средних молекул из плазмы интактных и и обожженных животных
2.6. Статистические методы, примененные для анализа полученных экспериментальных данных.
2.6.1. Последовательный критерий отношения правдоподобия критерий Вальда
2.6.2. Метод оценки интегральных различий между опытными и контрольными группами исследуемых показателей
2.6.3. Однофакторный дисперсионный анализ
2.6.4. Одномерный двухфакторный дисперсионный анализ.
2.6.5. Построение нелинейных двумерных математических моделей эритропоэза i vi.
Глава 3. ВЛИЯНИЕ ЭРИТРОПОЭТИНА НА РАЗВИТИЕ КУЛЬТУРЫ ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКИХ ОСТРОВКОВ
3.1. Морфологический анализ эритробластических островков, культивируемых в присутствии различных концентраций рекомбинантного эритропоэтина человека.
3.2. Дозозависимые кривые развития эритробластических островков в культуре
3.3. Сравнительный анализ эффективности влияния эритропоэтина разных фирмпройзводителй на развитие культуры ЭО.
3.4. Исследование влияния эритропоэтина на пролиферативную активность эритроидных клеток в культуре ЭО
3.5. Исследование влияния эритропоэтина на фагоцитарную активность центральных макрофагов в культуре ЭО
3.6. Изучение влияния эритропоэтина на адгезию клеток неоритроидных линий к короне ЭО
Глава 4. МАТЕМАТИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАИЕ ЭРИТРОПОЭЗА В КУЛЬТУРЕ ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКИХ ОСТРОВКОВ.
Глава 5. ВЛИЯНИЕ МАКРОФАГАЛЬНОГО КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩЕГО ФАКТОРА НА КУЛЬТУРУ ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКИХ ОСТРОВКОВ
5.1. Морфологический анализ эритробластических островков, культивируемых в присутствии различных концентраций МКСФ
5.2. Изменение пролиферативной активности эритроидных клеток в культуре ЭО под влиянием МКСФ
5.3. Влияние МКСФ на фагоцитарную активность центральных макрофагов ЭО в культуре
5.4. Изучение влияния МКСФ на адгезию клеток неэритроидных линий к короне ЭО.
Глава 6. ВЛИИЕ КАТЕХОЛАМИНОВ НА ЭРИТРОПОЭЗ В КУЛЬТУРЕ ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКИХ ОСТРОВКОВ.
6.1. Морфологический анализ эритробластических островков, культивируемых в присутствии различных концентраций катехоламинов
6.2. Влияние катехоламинов на пролиферативную активность эритроидных клеток в культуре ЭО.
6.3. Изучение влияния катехоламинов на адгезию клеток неэритроидных линий к короне ЭО
Глава 7. ВЛИЯНИЕ ФРАКЦИЙ СРЕДНИХ МОЛЕКУЛ НА ЭРИТРОПОЭЗ В КУЛЬТУРЕ ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКИХ ОСТРОВКОВ
7.1. Морфологический анализ эритробластических островков,
культивируемых в присутствии различных концентраций фракций
средних молекул
7.2. Влияние фракций средних молекул на пролиферативную активность
эритроидных клеток в культуре ЭО
7.3. Изучение влияния фракций средних молекул на адгезию клеток неэритроидных линий к короне ЭО
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ .
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Первая ныне известная предшественница всех клеток крови примитивная стволовая кроветворная клетка пСКК , А. Метод се определения основан на способности восстанавливать кроветворение у облученных или генетически дефектных мышей с помощью введения лимитирующих доз нормальных кроветворных клеток, поэтому иначе пССК называют клеткой, репопулирующей костный мозг i М. Одна такая клетка способна в течение длительного времени поддерживать кроветворение у реципиента , . В то же время методами лимитирующего разведения показано, что концентрация пСКК в костном мозге составляет примерно ООО, а общее содержание пСКК в организме мыши менее клеток, чего явно недостаточно для обеспечения стохастической дифференцировки этих клеток в процессе клональной сукцессии к примеру, выбор пола обеспечивается сотнями тысяч участвующих сперматозоидов, и стохастическая дифференцировка яйцеклеток основана на . Вполне возможно, что в организме содержатся и более ранние предшественники, которые на настоящий момент не могут быть выявлены используемым методом потому, что для выведения их из глубокого покоя требуются более действенные стимулы, нежели трансплантация кроветворных клеток , . Малочувствительны эти клетки и к кроветворному стрессу их не удается стимулировать к пролиферации путем облучения или повторного введения оксимочевины, убивающей пролиферирующие клетки и мобилизующей поэтому некоторые клеткипредшественницы в цикл Чертков И. Л., Дризе Ы. И., . В то же время введение интактным животным фактора стволовой клетки в комбинации с колониестимулирующим фактором гранулоцитарным приводит к выходу пСКК в циркулирующее русло в таком количестве, что их содержание в крови становится сравнимым с содержанием в костном мозге. В этом случае периферическая кровь является хорошим источником клеток для трансплантации i , , . Эксперименты с продукцией колониеобразующих единиц в селезенке выявили клетку, способную поддерживать кроветворение в культуре не менее недель Iiii 1. Дерюгина Е. И., . Поскольку антигенным маркерам, локализации в организме и концентрации в различных кроветворных выявленная стволовая клетка I была очень близка пСКК, вполне возможно, что речь шла об одной и той же клетке. Примитивные СКК выявляются во фракциях клеток, содержащих маркер 1 и не имеющих любых маркеров более дифференцированных клеток линейных маркеров i, сиалофоринлейкосиалина , рецептора для фактора стволовых клеток i и некоторых других. Опираясь на полученные данные об антигенных маркерах стволовых клеток, был охорактеризован антигенный фенотип пСКК человека 7ii Чертков И. Л., . В., v . Таким образом, в настоящее время не вызывает сомнений гот факт, что в организме существует целый отдел стволовых клетокпредшественниц гемопоэза, характеризующихся исходно большим пролиферативным потенциалом. Согласно последним данным, все стволовые клетки мультипотснтны и могут дифференцироваться по многим направлениям миело и лимфопоэза. Особенности пролиферации и дифференциации поли и бипотентных коммитированных клетокпредшественниц. Все элементы отдела поли и бипотентных коммитированных предшественников определяются с помощью методов клональных культур, при которых кроветворные клетки помещаются в полутвердую среду метил целлюлоза, агар, плазма, где каждая клонообразующая клетка продуцирует более или менее компактное скопление клеток колонию. Пролиферация клетокпредшественниц, входящих в этот отдел, как и всех последующих членов кроветворной иерархии, регулируется не только локально, но и дистантно ростовыми факторами и цитокинами . Дифференциация поли и бипотентных коммитированных клеток представляет собой детерминированный, а не стохастический процесс, так как полностью зависит от ци гокинов и гемопоэзиндуцирующего микроокружения. К поли потентным коммитированным предшественницам относят три разновидности клеток образующую в культуре колонии бластных клеток единицу i i КОЕбл, колониеобразующую единицу высокого пролиферативного потенциала КОЕвпп и клетку, образующую смешанные колонии, состоящие из гранулоцитов, эритроцитов, мегакариоцитов и макрофагов, КОЕгммэ.