Влияние напряжения кислорода на работу Na+/K+АТФазы в сердце крысы

• Автор: Лапина, Наталья Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 140 с. : ил.

Содержание

Список используемых сокращений

Введение

Глава I Обзор литературы

1.1. Введение

1.2. Строение ЫаКАТФазы

1.2.1. Общее строение Ыа КАТФазы

1.2.2. а субъединица

1.2.3. р субъединица

1.2.4. Семейство РХУЕ белков усубъединида

1.2.5. Анкирины

1.3. Работа К АТФазы
1.4. Влияние напряжения кислорода на синтез ЛТФ
1.5. Значение уровня свободных радикалов для клетки
1.6. Аюивность миелоиероксидазы МП в сердце при ишемии 1.7. Предполагаемые механизмы регуляции АТФазы
в условиях разного напряжения кислорода
Глава II Материалы и методы исследований .
2.1. Объект исследований
2.2. Используемые растворы и реактивы
2.3. Мегод изоляции сердца
2.4. Метод перфузии изолированного сердца по Лангсндорффу 2.4.1. Протоколы проведения перфузии сердца
2.5. Приготовление проб к анализу. Гомогенизация
2.5.1. Подготовка проб для измерения гидролитической активности МТЛГ АТФазы
2.5.2. Подготовка проб для проведения измерения АТФ и
аХНОЯЯН
2.5.3. Подготовка проб для измерения пероксидаз
2.6. Измерение гидролитической активности ЫаК АТФазы
2.7. Измерение АТ Ф в гомогенате перфузированного сердца
2.8. Измерение СБНОЗЯС в гомогенате перфузированного сердца
2.9. Измерение пероксидаз в гомогенате перфузированного сердца
2 Определение белка
2 Измерение количества воды в пробе сердца
2 Методы обработки результатов экспериментов
Глава III Результаты и обсуждения
3.1 .Изменения гидролитической активности в зависимости от времени перфузии и напряжения кислорода в перфузионном растворе
3.1.1. Кислород зависимые изменения гидролитической
активности ЫаК АТФ азы
3.1.2. Зависимость гидролитической активности АтаКАТФазы от напряжения кислорода в перфузионном растворе за минут перфузии
3.2. Изменения концентрации АТФ в гомогенате желудочков сердца при перфузии сердца в разных условиях
3.2.1. Кинетические изменения концентрации АТФ в гомогенате желудочков сердца
3.2.2. Зависимость концентрации АТФ в гомогенате желудочков сердца от напряжения кислорода в перфузионном растворе за минут перфузии
3.3. Изменения окисленной и восстановленной форм глутатиона в гомогенате желудочков сердца
3.3.1. Кинетические изменения окисленной и восстановленной форм глутатиона в гомогенате желудочков сердца
3.3.2. Зависимость уровня окисленной и восстановленной форм глутатиона в гомогенате желудочков сердца от напряжения кислорода в перфузионном растворе за минут
3.4. Кислород зависимые изменения уровня пероксидаз в гомогенате желудочков сердца желудочков сердца
3.4.1. Кинетические изменения уровня пероксидаз в гомогенате желудочков сердца
3.4.2. Зависимость уровня пероксидаз в гомогенате желудочков сердца от напряжения кислорода в перфузионном растворе за минут
3.5. Кинетические изменения количества воды в ткани желудочков сердца
3.6. Заключение
3.7. Выводы
Список цитируемой литературы


Содержание кислорода в крови человека у крысы оно практически такое же, поскольку содержание гемоглобина близкое составляет при р кРа или 0 мм рт ст , то есть объемных процентов ,2 мл на 0 мл крови, а я водном растворе при ,7С эта величина примерно в 0 раз меньше 0,3 объемных процента. Это значит, что хотя в плазме растворимость такая же, как в любом растворе, количество кислорода, которое получает ткань при перфузии кровью, во много раз больше, чем при перфузии раствором, пусть даже насыщенным 0 . Поэтому результаты, полученные в рамках данной работы, могут быть взяты за базовые исследования с целью дальнейших разработок в данном направлении, но уже применительно к человеку. Транспортная и гидролитическая активность 6К АТ Фазы в нейронах, эритроцитах, гепатоцитах зависит от уровня кислорода в ткани . Ишемия сердца также сопровождается понижением гидролитической активности УАГАТФазы в ткани сердца . Тридцатиминутная ишемия снижает уровень миокардиальной ЛТФ на 3. АТФ в клетках . При этом по данным исследований, проведенным на сердце для поддержания должного количества АТФ и обеспечения необходимой работы синтез АТФ перестраивается. Многие проводимые исследования посвящены работе и регуляции АяУТГАТФазы в условиях ишемии , , при этом работа и регуляция фермента в условиях гипоксии до сих пор остается не достаточно выясненной. В связи с этим остается непонятным значение недостатка кислорода в механизме изменения гидролитической активности Иа1САТФазы. Цель настоящей работы заключалась в изучении влияния величины напряжения кислорода в перфузионном растворе с учетом временного фактора на работу МзТКАТФазы и выяснения механизма влияния кислорода. Работа построена по стандартному принципу, принятому для кандидатских диссертаций. В работу включены рисунка и таблиц. Далее показано, что уровень АТФ претерпевает флуктуационные изменения в течение минут в зависимости от напряжения кислорода в ряду 9,2 8, мм. Рог от 6,3 до 8, мм. АТФ. Впервые показано, что уровень 7, претерпевает флуктуационные изменения во время перфузии в течение минут в зависимости от напряжения кислорода в ряду 9,2 8, мм. Через минут перфузии пик С7 находился на уровне ,2 мм. При этом значения процентного отношения СЖК от 7 претерпевают во времени флуктуационные изменения в течение минут в зависимости от напряжения кислорода, однако для напряжения кислорода ,2 мм. Через минут перфузии соотношение возвращается практически к первоначальному уровню. Максимальное значение процентного отношения от 5 при минутной перфузии приходится на ,4 мм. Другой показатель изменения свободных радикалов в клетке уровень активности пероксидаз, претерпевает вне зависимости от напряжения кислорода ,2, ,4 и 8, мм. Далее было показано, что содержание воды во времени претерпевает флуктационные изменения в течение минут в зависимости от напряжения кислорода в ряду 9,2 8, мм. При минутной перфузии достоверных различий в содержании воды в сердце не обнаружено. В разделе результаты и обсуждения так же дано обсуждение полученных результатов. Впервые были проведены исследования работы МзУГ АТФазы в условиях гипоксии на целом сердце. Рассмотрение изменений, которые происходят в целом органе, позволяют оценить комплексные изменения, вклад в которые вносят все ткани и структуры органа. Полученные результаты позволяют оценить вклад гипоксии в ишемический процесс и более глубоко понять механизмы изменений работы А7а 1САТФазы. В работе использовали 9 животных, из них 9 крыс линии Vi и крыс линии Ьелш. Из этих 9 животных выделено 9 препаратов сердца, которые были перфузированны с использованием метода перфузии изолированного сердца по Лангендорффу. Дальнейшие исследования проводились на гомогенатах желудочков сердца. Из них полностью соответствовали протоколу перфузии 0 сердец. Из одного перфузированного сердца получали 4 пробы для разных исследований, которые гомогенизировали согласно описанным протоколам. Измерение гидролитической активности Ма ГАТФазы, уровня АТФ, соотношения ЗЯСЗУ, активности пероксидазы и содержанию воды подверглись 0 проб. Статистической обработке подверглись только те эксперименты, которые полностью соответствовали протоколу исследований.