Структурная кинетика нейронов моллюска Lymnaea stagnalis в диссоциированной культуре ткани

• Автор: Рыбакова, Галина Ивановна
• Шифр специальности: 03.00.13, 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 239 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Органотипическая культура.

1.2 Реа регированная культура.

1.3 Культура диссоциированных клеток.

1.4 Поведение нейронов в диссоциированных культу рах

1.4.1 Рост и регенерация нервных отростков

1.4.2 Сокращение нервных отростков

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Объект исследования

2.2 Методика исследования
2.2.1 Методика выделения одиночных нейронов прудовика для острых опытов
2.2.2 Методика выделения одиночных нейронов прудовика для
длительного культивирования.
2.2.3 Описание установки
2.2.4 Обработка изображений.
3 СОБСТВЕННЫЕ ДАННЫЕ
3.1 Поведение травмированных нейронов после диссоциации
ншглия.
3.1.1 Линейное сокращение отростков травмированных нейронов
3.1.2 Изометрическое сокращение отростков.
3.1.3 Первые признаки регенерации.
3.1.4 Сокращение изолированного нервного волокна
3.1.5 Ингибирование сократительной активности нейрона.
3.2 Регенерация нервных отростков в культуре ткани.
3.2.1 Поведение конуса роста и ламеллы роста
3.2.2 Общая характеристика роста нервных отростков.
3.2.3 Типы нервных отростков и способы их образования
3.3 Сократительная активность нейритов в культуре ткани.
3.3.1 Ретракция отростка с изменением его длины.
3.3.2 Регракция без изменения длины офостка изомефическое
сокращение
3.3.3 Аутотомия и аутоамнутация.
3.4 Морфогенетические процессы в культуре.
3.4.1 Образование ганглиев
3.4.2 Образование локальных и сложных сплетений и их распад.
3.5 Формирование синцитиальной связи в культуре ткани.
4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
5 ВЫВОДЫ
6 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Нейроны краниального шейного ганглия раннего постнатального периода в диссоциированной культуре проходят ряд определенных этапов в своем развитии подготовка клетки к началу роста отростков, обеспечение активного роста нейритов, установление межклеточных контактов, окончательная дифференцировка нейронов и стабилизация структурнофункциональных отношений в культуре Аркатов и др. С помощью диссоциированных культур подробно исследовалась морфологическая лабильность шипиков V , i, i, и изменение шипиков при их активации . При исследовании культур нейронов гиппокампа описан новый тип экзоцитоза целуй и беги синаптических пузырьков, при котором медиатор выделяется из пузырька не путем полного экзоцитоза, а через пору слияния, а затем используется повторно, то есть это новый способ рсциклинга пузырька v, ii, . В такой же культуре исследовалась кратковременная пластичность и кинетика слияния пор при экзоцитозе синаптических везикул i . i . В культуре ткани удается моделировать отдельные идентифицированные фрагменты нервной системы . .I. и др. Даже в сравнительно простых нервных системах часто трудно изучать индивидуальные синаптические соединения в деталях и исключить участие неидентифицированных нейронов. Эти ограничения были преодолены реконструкцией частичных цепей идентифицированных нейронов в клеточной культуре , , . Этот подход обеспечивает возможность изучать функции малых нейронных сетей способом недоступным в интактной нервной системе. В других работах созданы системы из двух и более идентифицированных нейронов медицинской пиявки . i, i, или моллюска Панчин и др. , i, . . Культура диссоциированных нейронов значительно расширила возможности физиологических исследований на одиночных идентифицированных нейронах, так как она является удобной моделью для изучения микроэлектродных электрофизиологических свойств мозга. Эксперименты свидетельствуют о принципиальной идентичности электрофизиологических процессов, наблюдаемых в культуре и в интактном мозге . i, , . Специальные сопоставления мембранных потенциалов и ответов в клетках изолированного ганглия и диссоциированных нейронов в культуре нродемонсгрировали их сходство Гелетюк, Вепринцев, Костенко и др. i . Так же подтверждением того, что электрофизиологические характеристики в интактном мозге и в культуре совпадают, является работа на сетчатке глаза i. Так при диссоциации сетчатки глаза i были выделены, идентифицированы и культивированы пейсмекерные нейроны и разные фоторецепторы большие типа и . Пейсмекерные нейроны сохраняли их врожденную автоактивность и способность продуцировать потенциалы действия в культуре. Сформировавшиеся кластеры нейронов продуцировали импульсную активность сходную с импульсной акгивностью сетчатки. Однако в работе группы М. i сообщается, что мембранный потенциал был значительно ниже у культивированных клеток, чем в изолированном ганглии i vi, а гиперполяризация не опускалась ниже уровня потенциала покоя. При изучении кальциевых каналов в нейронах i было показано, что механизм их активации отличен от подобного у млекопитающих , , , каналы структурно и функционально подобны кислотночувствительным каналам млекопитающих . Диссоциированные культуры нейронов грудных ганглиев ii использовались для изучения электрических ответов на различные фармакологические агенты, влияющие на деятельность никотиновых ацетилхолиновых рецепторов . На культурах также удобно исследовать начальные стадии образования синапса. В работе с идентифицированными нейронами пиявки в культуре при исследовании первой стадии регенерации нейритов удалось показать, что первичное выпячивание клетки характеризуется высокой концентрацией Иаканалов. Именно здесь формируется конус росга, именно на этом полюсе чаще формируются синапсы.