Оценка активации МАР-киназ и транскрипционных факторов у моллюсков (Helix), обладающих разной способностью к обучению

• Автор: Харченко, Ольга Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 132 с. : ил.

1.1. Моделиу используемые для анализа молекулярноклеточных механизмов обучения.

1.1.1. Выработка ассоциативного обучения у моллюска ii.

1.1.2. Выработка различных форм обучения у моллюска i

1.1.3. Выработка ассоциативного обучения у моллюска i. .

1.1.4 Выработка ассоциативного обучения у моллюска i

ii

1.2. Виноградная улитка ix

1.2.1. Устройство ЦНС ix

Церебральные ганглии.

Париетовисцеральный комплес

1.2.2. Выработка неассоциативных и ассоциативных форм обучения у ix

1. 3 Метаболизм и функции серотонина в ЦНС.
1.4. Рецепторы 5НТ
1.4.1 Семейство 5НТ
Рецептор 5НТ 1 А
1.4.2 Семейство 5НТ
1.4.3 Рецептор 5НТЗ.
1.4.4 Рецепторы 5НТ4, 5НТ6, 5НТ
1.4.5 Семейство 5НТ
1.4.6 Рецепторы 5IIу моллюсков.
1.5. Участие матогенактивируемых МАРК каскадов в
механизмах нейрональной тшстичиости.
1.5.1. Митогенактивируемый протеинкиназный каскад Функции каскада
1.5.2. Участие в механизмах пластичности у
позвоночных животных
1.5.3. Механизмы активации сигнального каскада
1.5.4. Стрессовые протеинкиназы и р
1.6. ДНКсвязывающие транскрипционные факторы
1.6.1. Транскрипционные факторы, регулирующие экспрессию генов через элемент.
1.6.2. Транскрипционные факторы семейства
1.6.3. Транскрипционные факторы семейства АР1.
1.6.4. Транскрипционные факторы семейства СЕВР
2. ТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Выработка условного оборонительного рефлекса .
2.2. Вестернблот анализ.
2.2.1 Экстракция белков
2.2.2 Метод Вестерн блот анализа.
Микровариант Вестернблот анализа
2.3. Выделение РНК.
2.4. Синтез копии ДНК. Реакция обратной транскрипции
2.5. Полимеразная цепная реакция, ПЦР
2.6. Иммуноцитохимический анализ. Модификация I
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТА ТЫ.
3.1. Сравнительный анализ экспрессии в ЦНС виноградной улитки и высших позвоночных животных крыса.
3.2. Анализ экспрессии и активации Мкиназ в функционально различных ганглиях ЦНС виноградной улитки при обучении.
3.2.1. Анализ активации протеинкиназы при формировании условного оборонительного рефлекса пищевой аверзии в париетовисцеральном ганглии виноградной улитки в разные сроки после обучения
3.2.2 Анализ активации МЛ Ркиназ к в парието висцеральном комплексе ганглиев виноградной улитки при обучении после введения нейротоксииа 5,7ДОТ
3.2.3 Исследование содержания и активации М.киназ в педальном комплексе ганглиев виноградной улитки в разные сроки после обучения
3.2.4 Анализ активации в педальном комплексе ганглиев виноградной улитки при обучении после введения нейротоксина 5,7ДОТ.
3.2.5 Исследование экспрессии и активации киназ в церебральном ганглии виноградной улитки при обучении.
3.2.6 Исследование функционирования каскада в идентифицируемых нейронах ЦНС виноградной улитки при обучении .
3.3. Влияние серотонина на активацию МАРКЕ в идентифицируемых нейронах виноградной улитки.
3.4. Сравнение активации при обучении ювенильных и взрослых ix.
3.5. Анализ активации транскрипционного фактора 1 при формировании условного оборонительного рефлекса пищевой аверзии в париетовисцеральном ганглии ix, у животных с нормальной и нарушенной способностью к обучению.
3.6. Серотониновый рецептор 5I 1 в ЦНС ix
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРА ТУРЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ


Применение блокаторов вышележащих протеинкиназ показало, что активация данных ТФ связана с каскадом Гринкевич, Васильев, Гринкевич и др. Так как индукция экспрессии генов через элемент , МАРКзависима, высказано предположение о важной роли этого каскада в формировании условных оборонительных рефлексов Гринкевич и др. В связи с этим представлялось необходимым провести комплексные исследования экспрессии и активации киназ в ЦНС ix при обучении. Цель и задачи исследования. Целью исследования являлось выяснение молекулярных механизмов, дисфункция которых приводит к неспособности животных к выработке условных оборонительных рефлексов и роль МАРкиназных каскадов в этих процессах. Выявление экспрессии Мкиназы в ЦНС моллюска ix . Изучение динамики экспрессии и активации киназы при обучении в париетовисцеральных, педальных и церебральных комплексах ганглиев ix, играющих различную роль в формировании условного оборонительного рефлекса пищевой аверзии. Изучение влияния нейротоксина 5,7ДОТ, вызывающего дисфункцию серотониновых нейронов и редуцирующего выработку условных оборонительных рефлексов на активацию киназы . Изучение экспрессии и активации в отдельных идентифицированных нейронах виноградной улитки, играющих различную роль в формировании условного оборонительного рефлекса пищевой аверзии. Исследование влияния серотонина на экспрессию и активацию в отдельных идентифицированных нейронах виноградной улитки, играющих различную роль в формировании рефлекса пищевой аверзии. Положения, выносимые на защиту. В ЦНС ix при обучении экспрессируется и активируется МАРкиназа . Степень активации . Дисфункция или незрелость серогонинэргической системы ix, через дисфункцию внутриклеточного регуляторного каскада , определяет неспособность животных к формированию долговременных форм условных оборонительных рефлексов. Научная новизна работы. Впервые показано, что в ЦНС у взрослых ix экспрессируется МАРкиназа и наблюдается ее значительная активация при выработке условного рефлекса пищевой аверзии. Степень активации в функционально разных ганглиях коррелирует со степенью их включения в дугу изучаемого рефлекса. Введение нейротоксина 5,7ДОТ, вызывающего дисфункцию серотониновых терминалей и редуцирующего способность к выработке условных оборонительных рефлексов предотвращает активацию . Вышеприведенные данные свидетельствуют о важной роли серотонинзависимой активации в формировании данного рефлекса. Впервые, при помощи микрохимического варианта метода Вестерн блот проведен анализ экспрессии и активации в отдельных идентифицированных нейронах при обучении. Показано, что максимальная степень активации наблюдается в командных нейронах оборонительного поведения ППа2ППаЗ, являющихся основным пластическим звеном данного рефлекса, и в процеребруме, центральной обонятельной структуре, анализирующей информацию о запахах. Исследования свидетельствуют о важной роли каскада в формировании долговременных форм пластичности оборонительного поведения. Научнопрактическая ценность. Полученные данные являются приоритетными и имеют важное теоретическое значение, так как позволяют глубже понять молекулярные механизмы лежащие в основе обучения и долговременной памяти. Прикладное значение имеют данные по возможности индукции каскада в изолированной ЦНС, что позволяет использовать ЦНС ix в качестве тестсистемы для скрининга биологически активных веществ, способных улучшить работу данного каскада, в частности, антидепрессантов. Апробация работы. Основные материалы диссертации докладывались на III съезде БОГиС Генетика в XXI веке, Москва, I Съезде физиологов СНГ. Дагомыс, Международном симпозиуме Механизмы адаптивного поведения, СПб, . На конференциях молодых ученых X Путинской школеконференции, Пущино. Человек и его здоровье, СПб, Механизмы регуляции и взаимодействия физиологических систем организма человека и животных в процессах приспособления к условиям среды, СПб, . XX Съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова, Москва, П Съезде Общества клеточной биологии, СПб, Конференции Системный контроль генетических и цитогенетических процессов, СПб, i i , i ii Iv, i, , .