Функциональное состояние лейкоцитов после выхода из холодового анабиоза при умеренно-низкой температуре

• Автор: Щеглова, Оксана Олеговна
• Шифр специальности: 03.00.13, 14.00.29
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Киров
• Количество страниц: 116 с. : ил.

Содержание

Список использованных сокращений.

Введение.
Глава 1. Современное состояние проблемы введения лейкоцитов в Холодовой анабиоз обзор литературы

1.1. Организация лейкоцитных клеток.

1.2. Методы получения лейкоцитного концентрата

1.3. Функциональные и морфологические изменения лейкоцитов, вызванные воздействием холодового стресса.

1.4. Хладоограждающис растворы для лейкоцитов.

1.5. Способы оценки физиологической полноценности

различных клеток до введения в криоанабиоз и после выхода из него

Глава 2. Материалы и методы исследований

Глава 3. Результаты экспериментальных исследований
3.1. Оценка влияния экспоненциальной программы замораживания до С и хладоограждающих растворов на функциональное
состояние лейкоцитов при хранении в течение часов
3.2. Зависимость функционального состояния нативных и размороженных лейкоцитов, перенесших суточный анабиоз при С, от длительности экспозиции 1 ч
с хладоограждающим раствором 2.
3.3. Влияние длительного в течение суток при С хранения оптимального хладоограждающего раствора
на его криозащитные свойства
3.4. Жизнеспособность и функциональная активность лейкоцитов, перенесших Холодовой анабиоз С разной длительности с использованием хладоограждающего
раствора 2 и экспоненциальной программы замораживания
3.5. Оценка в опытах на животных острой и
хронической токсичности, пирогенности оптимального хладоограждающего раствора и переносимости аутологичных лейкоцитных концентратов после их
хранения в течение ч при С с данным раствором.
Глава 4. Обсуждение результатов экспериментальных исследований
Выводы
Список использованной литературы


Изучить жизнеспособность и морфологический состав лейкоцитов, фагоцитарную и метаболическую активность нсйтрофилов и фагоцитарную активность моноцитов, замороженных с использованием оптимального хладоограждающего раствора по экспоненциальной программе и хранившихся в условиях холодового стрессвоздействия С в течение 1 суток. Оценить в опытах на животных острую, хроническую токсичность, пирогенность оптимального хладоограждающего раствора и исследовать переносимость аутологичных лейкоцитных концентратов, подвергнутых замораживанию и хранению при С в течение ч с данным раствором. Научная новизна. В лабораторноэкспериментальном исследовании впервые изучена жизнеспособность и функциональная активность лейкоцитов, перенесших Холодовой анабиоз при С, введение в который осуществлялось по экспоненциальной программе замораживания и с применением нового хладоограждающего раствора патент 9 от , включающего криопротектор ГМБТОЭМ в конечной концентрации , антигипоксант фумарат натрия 1,4 и антикоагулянт лимонную кислоту 0,. Установлено, что использование указанной программы и раствора позволяет сохранить на высоком уровне жизнеспособность и функциональную активность лейкоцитов в течение суток холодового анабиоза при С, а также избежать разрушения мембран клеток и их органелл и денатурации клеточных белков. Научнопрактическая значимость работы. Дано научное обоснование криозащитных свойств предложенного хладоограждающего раствора, ингредиентами которого являются вещества отечественного производства криопротектор смешанного действия ГМБТОЭМ, антигипоксант биоэнергетической направленности фумарат натрия и антикоагулянт лимонная кислота. Данный раствор является нетоксичным, апирогенным, хорошо переносимым, при его внутривенном введении, экспериментальными животными, следовательно, не требует отмывания от биообъекта после его отогрева и может быть рекомендован для криобиологической практики и для научных исследований в лабораториях биологического и медицинского профиля. Доказано, что наиболее предпочтительной, эффективной и легко выполнимой по сравнению с линейной принудительной программой является экспоненциальная программа замораживания лейкоцитов, которая позволяет разным видам ядросодержащих клеток входить в Холодовой анабиоз постепенно на разных его уровнях, благодаря чему на термограмме не наблюдается явного выброса кристаллизационного тепла и, следовательно, не происходит процессов рекристаллизации, которые выявлены при замораживании лейкоцитов в условиях использования линейной программы Леонтович В. А и соавт. Махатадзе И. К. и соавт. С их жизнеспособность и функциональная активность сохраняются на высоком уровне в течение длительного времени суток. Эти данные расширяют представления о механизмах криоповреждения и криозащиты на клеточном уровне. С, предложен эффективный, доступный и надежный в методическом плане метод криоконсервирования данных клеток, включающий в себя применение хладоограждающего раствора, медленной экспоненциальной программы замораживания и быстрого отогрева. Оптимальный хладоограждающий раствор, содержащий ГМБТОЭМ, фумарат натрия и лимонную кислоту, являясь нетоксичным, апирогенным, хорошо переносимым экспериментальными животными и не требующим отмывания от биообъекта после его оттаивания, позволяет сохранить функциональные свойства лейкоцитов, хранившихся в условиях холодового стрессвоздействия при С в течение суток. Экспоненциальная программа введения лейкоцитов в Холодовой анабиоз до С дает возможность получить высокий процент выхода жизнеспособных и функционально активных лейкоцитов после перенесения ими холодового стрессвоздействия в течение суток при данной температуре. Лейкоциты человека обладают высокими реиаративными возможностями, что позволяет им проявлять функциональную активность после холодового стрессвоздействия С, в течение суток. Апробация работы. Результаты работы доложены на Всероссийской научной конференции Актуальные проблемы регионального экологического мониторинга теория, методика, практика Киров, , заседании Кировского отделения физиологического общества имени И. П. Павлова Киров, , научной сессии Кировского филиала Российской Академии Естествознания Киров, , международной конференции Сохранение генетических ресурсов С.