Рецепция и трансдукция цитокининового сигнала в листьях арабидопсиса и ячменя

• Автор: Маслова, Галина Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 111 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Введение.

1. Обзор VIитсратуры.

1.1. Задержка старения срезанных листьев травянистых растений

как модельная система для изучения действия цитокинина

1.2. Характер смены РНК при старении листьев

1.3. Цитокинины и старение листьев

1.4. Влияние цитокинина на синтез РНК.

1.5. Белки посредники ответа на питокинин.

1.6. Участие прогеинкиназ в ответе растительных клеток

на цитокинин.

1.7. Роль этилена в регуляции старения листа.
2. Объект и методы исследований
2.1. Объект исследований
2.2. Выращивание растений и постановка опытов.
2.3. Выделение хроматина
2.4. Определение активности связанной с хроматином
Р1 Жполимеразы 1
2.5. Определение активности связанных с хроматином
прогеинкиназ.
2.6. Определение функциональной активности цитокининсвязывающих белков из листьев растений АгаЫс1ор1 МаНапа.
2.7. Определение концентрации ДНК в препаратах хроматина
2.8. Определение концентрации белка в препаратах хроматина
3. Результаты экспериментов и их обсуждение
3.1. Действие цитокинина на активность связанной с хроматином
РИКполимеразы I из розеточных листьев растений
АгаЫсЬр1 ЖаНапа разного возраста
3.2. Действие цитокинина на активность протеинкиназ хроматина из розеточных листьев растений АгаЫс1оря1з ШаНста
разного возраста
3.3. Функциональная активность цитокининсвязывающих белков
из листьев растений ЛтШалш ГшПапа разного возраста
3.4. Ответ на цитокинин транскрипционной системы листьев этиленнечувствительных мутантов арабидопсиса ей5 и еН1.
Заключение.
Выводы.
Список литературы


Поэтому нам представлялось интересным включить в работу этиленнсчувствительные мутанты арабидопсиса i5 . . С первых работ по изучению влияния цитокинина на срезанные листья было известно, что, задерживая старение этих листьев, гормон активирует в них синтез белка и РНК i, , . i, Кулаева, Воробьева, . В последующем действие цитокининов на синтез РЖ в листьях было изучено более детально Кулаева , Селиванкина и др. Романко и др. Бурханова и др. В опытах Селиванкиной с сотрудниками было показано, что, обработав листья цитокинином и выделив из них хроматин, можно обнаружить вызванную гормоном активацию в системе синтеза РНК i vi, содержащей хроматин и связанную с ним РНКполимеразу из обработанных листьев. Селиванкина и др. Прямое добавление цитокинина в среду, содержащую хроматин, не вызывало активацию синтеза РНК i vi. Для этого были нужны цитокининсвязывающие белки, медиируюцие цитокининзависимую активацию синтеза РНК. В связи со сказанным, мы выбрали для характеристики реакции листьев ii i на цитокинин его влияние на акивность синтеза РНК i vi в системе элонгации транскрипции, содержащей хроматин и связанную с ним РНКполимеразу I, выделенные из обработанных цитокинином листьев. При этом нам представлялось важным изучить реакцию на цитокинин не только у листьев растений арабидопсиса разного возраста, что отражало зависимость реакции от возраста растений, но и при различной продолжительности инкубации листьев на растворе цитокинина. Эго позволило анализировать ответ на цитокинин транскрипционной системы листьев в ходе их старения, индуцированного срезанием. Особый интерес представляло изучение свойств цитокининсвязывающих белков из листьев растений арабидопсиса разного возраста в ак тивации синтеза РНК i vi. Это тоже было включено в нашу работу. Как упоминалось выше, активация цитокининсвязывающим белком в присутствии цитокинина транскрипции i vi была хорошо изучена на листьях ячменя с использованием ЦСБ из листьев ячменя и полученной из них транскрипционной системы. Поэтому нам представлялось важным проверить функциональную активность ЦСБ из ii i не только в транскрипционной системе из тех же растений, но и в гетерологичной по отношению к белкам из арабидопсиса системе синтеза РНК, содержащей хроматин и РНКполимеразу I из листьев ячменя. АгаЬирьх каапа. АгаЬсорзБ каапа е5 и ег. Задержка старения срезанных листьев травянистых растении как модельная система для изучения действия цитокинина. Удобной моделью для изучения рецепции и трансдукции цитокипипового сигнала являются срезанные листья травянистых растений. Известно, что в интактных растениях цитокинины играют роль гормонального сигнала, посредством которого корни влияют на метаболизм надземных органов, в том числе листьев и, в частности, предотвращают их старение Кулаева, , , , v . . По этой причине отделенные от растения листья высоко чувствительны к экзогенным цитокининам. Первые работы но изучению действия цитокинина на срезанные листья показали, что гормон задерживает происходящее в этих листьях снижение содержания белка и хлорофилла i, , . Кулаева, Кулаева, Клячко, , а также РНК и ДНК i, , i . Кулаева, Воробьева, . Было установлено, что цитокинин не только задерживает процесс старения срезанных листьев, но и в значительной степени устраняет нарушения в обмене веществ и структуре клеток, происшедшие в них в ходе естественного старения на растении Курсанов и др. Свешникова и др. Под действием гормона восстанавливалась способность клеток пожелтевших листьев к новообразованию ДНК, РНК и белка, в хлоропластах происходило образование новых ламелл и гран, что сопровождалось синтезом хлорофилла и повышением активности хлоропластов в отношении фотовосстановительных процессов, увеличивалась внутренняя рабочая поверхность митохондрий Кулаева и др. Курсанов и др.