Особенности культивирования клеток растений семейства тиссовых - продуцентов дитерпеноида таксола

• Автор: Уразбахтина, Нурия Анасовна
• Шифр специальности: 03.00.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 102 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

1. Обзор литера у ры

1.1. Общая характеристика растений x . и x i i x

1.2. Алкалоиды растений семейства Тиссовые

1.2.1. Противоопухолевая активность таксола

1.2.2. Механизм действия таксола

1.3.Культура клеток растении как источник продуктов вторичного

метаболизма

1.3.1. Общая характеристика клеток, культивируемых i vi

1.3.2. Вторичные метаболиты культивируемых клеток растений

1.3.3. Способы повышения содержания вторичных метаболитов
в культурах клеток растений
2. Материалы н методы
2.1. Объект исследования
2.2. Условия получения и культивирования каллусных тканей
2.3. Определение прироста сырой биомассы каллусной ткани
2.4. Выделение ДI
2.5. Фракционирование ДНК в агарозном геле
2.6. Анализ содержания таксола методом ВЭЖХ
2.7. Анализ таксола методом ЯМР
2.8. Цитологическая характеристика каллусной ткани
2.9. Использованные реактивы
3. Результаты и нх обсуждение
3.1. Характеристика каллусной ткани x .
и x i i, .
3.2. Анализ содержания таксола в каллусной ткани Тисса ягодного
3.3. Влияние сезонности на каллусообразование и содержание таксола
в культивируемых тканях x .
3.4. Характеристика суспензионной культуры Тисса ягодного
3.5. Цитологическая характеристика каллусной ткани Тисса ягодного Заключение
Выводы
Синеок литературы
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Установлено, что имеются, по крайней мере, две причины, обусловливающие низкую скорость роста культивируемых клеток тисса задержка пика митотической активности в цикле выращивания каллусов и нарушение цитокинеза. Пракч ическаи значимое Результаты исследований расширяют представление об особенностях биологии клеток растений, культивируемых i vi, и могут быть использованы при работе с другими видами хвойных. Каллусная ткань Тисса ягодного с повышенным содержанием таксола может быть использована для наработки данною дитсрпсноида в лабораторных условиях. Апробация работы. Уфа, на IV съезде общества физиологов растений России Москва, . Публ икании. Но материалам диссертации опубликовано 7 работ. Благодарности. Автор выражает искреннюю признательность научному руководителю д. А.Г. Мардамшнну, научному консультанту д. М.С. Мифтахову за всестороннюю помощь на всех этапах работы. Я также благодарна сотрудникам лаборатории регуляции метаболизма культивируемых клеток растений Института биохимии и генетики Шарафутдиновой Г. Г., Гугучкиной Л. М., Султанасвой И. В., сотрудникам лаборатории сшгтеза низкомолекулярных биорегуляторов Института органической химии к. Ахметвалееву . ., Кузнецову О. М. за помощь при проведении экспериментальной части работы. Общая характеристика растений x . x i i x . Тисс ягодный x . Тисс дальневосточный x i i x . Тисс остроконечный вечнозеленые деревья или кустарники. Высота деревьев может достигать м, а диаметр 11. Усенко, Гордиенко, . Эти два вида растений характеризуются низкой скоростью роста и годичный прирост не превышает 23 см Тахтаджян, Лазаренко, Гроздова и др. Крона Тисса ягодного раскидистая, многовершинная, часто яйцевидной формы. У Тисса остроконечного она более рыхлая, чем у Тисса ягодного Кузнецов и др. Гроздова и др. Кора тиссовых краснобурая, с продольными трещинами, а у однолетних побегов зеленоватого цвета Усенко, Нестерович, . Древесина Тисса ягодного очень плотная, прочная, с красивой текстурой, в ней отсутствуют смоляные ходы. Древесина Тисса остроконечного не мснсс ценна, чем у Тисса ягодного Васильев, Усенко, Тахтаджян, Лазаренко, . Корневая система тисса хорошо развита, пластична Усенко, . Хвоя Тисса ягодного имеет темнозеленый цвет, в длину достигает 1,53 см, а в ширину 1,52,0 мм. Сверху она блестящая, снизу более светлая и тусклая. Для хвои характерно наличие одного сосудистоволокнистого пучка, смоляных ходов нет Новиков, Тахтаджян, Лазаренко, . У Тисса остроконечного хвоя в отличие от Тисса ягодного оканчивается игольчатым остроконечном, кроме того, она более светлая Новиков, Воробьев, . Помимо этого, эти два вида тиссовых также отличаются по строению семени Шретер, Усенко, . Тисс ягодный и Тисс дальневосточный используются при лечении многих заболеваний человека и животных Растительные. Интерес к тиссу резко возрос после того, как было установлено, что дитерпеноид таксол обладает антираковой активностью. Алкалоиды растений семейства Тиссовые. Дитерпеноид таксол, обладающий высокой цитотоксичностью, впервые был выделен из x vii . x . x i i i . Его молекулярный вес 3. С Н , компонентный состав С . Н 6. 1. О . С0. Дитерпеноид таксол состоит из природного алкалоида баккатина III, содержащею в положении атома углерода боковую цепь Рис. У различных видов тисса также обнаружены другие дитерпеноиды, отличающиеся от таксола боковыми радикалами 2, , 4 Таблица 1. , . Эти соединения также представляют интерес в связи с возможной их прошвоопухлевой активностью. Противоопухолевая активность таксола. Первоначально исследователи не проявляли большого интереса к гаксолу по нескольким причинам. Вопервых, предполагалось, что таксол является лишь следующим канцеростатиком, дестабилизирующим микротрубочкн аналогично колхицину, винбластину, винкристину. Вовторых, предполагали, что он активен лишь при лейкемии. Втретьих, главным аргументом против дальнейших испытаний данного дитерпсноида являлась его плохая растворимость.