Характеристика микобактериальных вирусов МТРН2 и МТРН11

• Автор: Оборотов, Михаил Вячеславович
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Оболенск
• Количество страниц: 96 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
Введение.

Актуальность проблемы.

1 .Обзор литературы.

1.1.Бактериальные вирусы различных представителей

рода i

1.1.1 .Морфология микофагов.

1.1.2. Химический состав микофагов.

1.1.3. Седиментационные свойства микофагов.

1.1.4. Влияние различных физикохимических факторов

на литическую активность микофагов.

1.1.5. Иммунохимические свойства микофагов.
1.1.6. Взаимодействие между фагами и микобактериями.
1.1.6.1. Абсорбция микофагов на клетках i.
1.1.6.2. Спектры литического действия микофагов.
1.1.6.3.Умеренные микобактериальные вирусы.
1.1.6.4.Количественные характеристики воспроизведения
микофагов в клетке.
1.1.7. Фаготипирование микобактерий.
1.1.7.1. Фаготипирование М. i.
1.1.7.2. Фаготипирование М. vi.
1.1.7.3. Фаготипирование других представителей рода
i.
1.2. Общие проблемы фаготипирования.
2.Материалы и методы.
2.1. Бактс жи.
2.2.Бактериальные и эукариотические вирусы.
2.3.итательные среды.
2.3. Методы изучения свойств бактериофагов.
2.4. Флуоресцентная спектроскопия флуориметрия
систем фагклетка.
2.5. Электроориентационная спектроскопия систем фагклетка.
2.6. Флуоресцентная микроскопия систем фагклетка.
2.7. Электронная микроскопия.
3. Результаты исследования.
3.1 .Изучение характеристик микофага МТРН.
3.1.1. Литическая активность I1 но отношению к отдельным
видам микобактерий.
3.1.2. Ультраструктура фага МТРН.
3.1.3. Адсорбция фага на клетках штамма 7.
3.1.4. Стадии размножения фага в клетке.
3.1.5. Антигенные свойства фага.
3.1.6. Плавучая плотность частиц МТРН .
3.1.7. Влкние химических и физических факторов на литические
свойства МТРН .
3.1.8. Нуклеиновая кислота фага МТРЬ1.
3.1.9. Выделение подобных комплексов из клеток М. i, инфицированных фагом МТР1 1.
3.1 Электронная микроскопия ЭМ системы М. i 7
3.1 Флуоресцентная микроскопия системы М. i 7
3.1 Флуориметрия системы М. i 7I 1.
3.1 Электроориентацнонная спектроскопия системы М. i
7 МТРН .
3.2. Исследование свойств микофага МТРН 2.
3.2.1. Выращивание и очистка препарата МТРН 2.
3.2.2. Морфология фага МТРН 2.
3.2.3. Латентный период инфекционного процесса в системе МТРН 2 М. i.
3.2.4. Плавучая плотность фага МТРН 2.
3.2.5. Антигенные свойства фага МТРН 2.
3.2.6. Выделение и частичная характеристика подобных комплексов из клеток М.i, инфицированных фагом
МТРН 2.
3.2.7. Нуклеиновая кислота фага МТРН 2.
3.2.8. Электронномикроскопическое изучение взаимодействия
микофага МТРН 2 с клеткой VI.i Н V.
3.2.9. Флуоресцентная микроскопия системы МТРН 2 I.i Н V.
3.2 Флуориметрия системы МТРН 2 М.i V.
3.3.Изучение различных систем фагклетка на основе флуометрии
и ЭО спектроскопии.
3.3.1.Флуориметрия систем фагклетка.
3.3.2.Электроориентациош1ая спектроскопия систем фагклетка.
4.0бсуждение результатов.
Выводы.
Список цитированной литературы


Одна из серьезных современных проблем микробиологии разработка с помощью бактериофагов экспрессметодов идентификации микобактерий и других болезнетворных микроорганизмов. Состояние вопроса. О широком интересе к микобактериофагам свидетельствуют многочисленные публикации. Тем не мснсс, в большинстве из них представлены лишь отдельные характеристики бактериальных вирусов фагвирус бактерий . Можно отметить всего несколько исследований, проведенных с учетом рекомендаций Международного Комитета по Таксономии Вирусов , vv. Можно считать парадоксальным то обстоятельство, что малоизученные бактериальные вирусы МТРН 2 и МТРН , как и некоторые другие микофаги, применяются при фаготипировании микобактерий уже не одно десятилетие. По нашему мнению, бактериофаги, используемые в качестве инструментов идентификации микроорганизмов, должны быть подробно исследованы. Традиционный способ определения чувствительности микроорганизма к фагу сопряжен с постановкой споттестов Адамс, . Применительно к различным видам микобактерий на это затрачивается от часов до десятков суток. Отсюда понятна необходимость поиска других быстроосуществляемых методов фаготипирования болезнетворных и сопутствующих им форм МусоЬасЮппт. Эта проблема столь же актуальна и для типирования других пакленных микроорганизмов. Цель исследования определение свойств микофагов МТРН 2 и МТРН для практического применения полученных результатов в экслрсссидснтификации микобактерий и других микроорганизмов. Задачи исследования. Исследовать морфологические, биологические и физикохимические характеристики микофагов МТРН 2 и МТРН . Изучить начальные стадии взаимодействия фагов с микобактериями на основе традиционных и новых методических подходов. Оцен ть перспективы применения флуоресцентной микроскопии, флуориметрми и ЭОснектроскопии в эксирессфаготипировании микобактерий, псевдомонад, стафилококков и йсрсиний. Научная новизна. И диссертации представлены данные о морфологии, а также биологические и физикохимические свойства ранее малоизученных микофагов МТРН 2 и МТРН . Впервые показана способность микофагов индуцировать синтез Еподобных стрессовых комплексов в инфицированных клетках микобактерий. Процессы взаимодействия МТРН 2 и МТРН с клеткамихозяевами охарактеризованы на основе методов флуоресцентной микроскопии, флуориметрми и электроориентационной спектроскопии, не применявшихся ранее в изучении систем фаг м и кобактери я. Теоретическое и практическое значение. В работе обоснована необходимость детального изучения фагов, предназначенных для идентификации микроорганизмов. Исследованы стадии первичного взаимодействия фага МТРН 2 с клеткой i i на основе флуоресцентной микроскопии и флуоримстрии. Полученные результаты рассмотрены как предпосылки для использования данных методов в экспрессфаготилировании туберкулезного микроба. Кроме того, показано, что флуориметрия и ЭОспектроскопия перспективны с точки зрения их применения в экспресстестировании фагочувствитсльности псевдомонад, стафилококков и йсрсиний. Работа выполненна в ГНЦ прикладной микробиологии отдел под руководством к. Е.Л. Жиленкова. Исследование различных систем фа клетка проведено совместно с кандидатом физикоматематических наук А. В.Г аврюшкиным. Огромная помощь оказанна руководством ГНЦ прикладной микробиологии и сотрудниками отдела . Основные положения, выносимые на защиту. Методы на основе флуоримстрии и электроориентационной спектроскопии перспективны в их применении для экспресстестирования фагочувствитсльности быстрорастущих микобактерий, псевдомонад, исрсинип и стафилококков. Стадии первичного взаимодействия фага М РИ 2 с клеткойхозяином на основе флуоресцентной микроскопии и флуоримстрии предпосылки для использования данных методов в экспрессфа Обзор литературы. Цель настоящего обзора литературы освещение предпосылок диссертационной работы и аргументация целесообразности ее задач. Первая часть обзора посвящена обобщению имеющихся на сегодня данных о свойствах микобактериальных вирусов. Отдельно рассмотрен вопрос о проблемах фаготипирования микобактерий.