Разработка иммуноферментных тест-систем для выявления антигенов Mycoplasma pneumoniae и Mycoplasma hominis

• Автор: Шершнёва, Наталья Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 118 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ.

Список сокращений

Введение

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава I. СОВРЕМЕННОЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ О ПРЕДСТАВИТЕЛЯХ

КЛАССА МОХСиТЕБ.

1.1 .Характеристика семейства МусораБшаасеае.

1.2.Биологические особенности микоплазм.

1.3 .Патогенные свойства микоплазм.

Глава И. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗВАННЫХ МИКОПЛАЗМАМИ.

2.1. Методы лабораторной диагностики микоплазменных инфекций.

2.2.Современное представление об иммунофермснтном анализе.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Глава III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
Глава IV. КОНСТРУИРОВАНИЕ МОДЕЛЬНЫХ ТЕСТСИСТЕМ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ МИКОПЛАЗМЕННЫХ АНТИГЕНОВ В ИММУНОФЕРМЕНТНОМ АНАЛИЗЕ.
4.1.Разработка модельной тестсистемы для определения антигенов М.рпеишопае.
4.2.Разработка модельной тестсистемы для определения антигенов МютпБ.
Глава V. АПРОБАЦИЯ РАЗРАБОТАННЫХ ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТСИСТЕМ 1 А КЛИНИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛ Е
5.1. Определение чувствительности и специфичности разработанной тестсистемы в сравнении с другими методами, используемыми для выявления антигенов М.рпеишопае.
5.2. Характеристика белкового профиля в ЭПАГ мембранных и растворимых антигенов М.рпеишопае .
5.3. Иммуноблоттинг сывороток больных с респираторной микоплазменной инфекцией.
5.4. Иммуноблоттинг ЦИК, выделенных из проб сыворотки крови больных с респираторной инфекцией.
5.5. Определение чувствительности и специфичности разработанной тестсистемы в сравнении с другими методами, используемыми для выявления антигенов .ii.
5.6. Характеристика белкового профиля в ЭПАГ мембранных белков и целых клеток .ii.
5.7.Иммуноблоттинг проб сыворотки крови больных урогенитальной инфекцией.
5.8. Иммуноблоттинг ЦИК, выделенных из проб сыворотки крови больных урогенитальными инфекциями.
ОБСУЖДЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Микоплазмеиные инфекции не имеют патогномонических особенностей, что чрезвычайно затрудняет клиническую диагностику заболеваний и это обстоятельство выделяет раздел лабораторной диагностики в один из наиболее важных. В настоящее время диагностика микоплазменных инфекций основывается на микробиологических, иммунологических, иммунохимических и генетических методах. Если раньше основной упор делали на микробиологические тесты, то внедрение новых лабораторных технологий, таких как иммуноферментный анализ ИФА, реакция прямой и непрямой иммунофлуоресценции РИФ, полимеразная цепная реакция ПЦР создали принципиально новую возможность для диагностики, инфекций, обусловленных микоплазмами , , 0. Сейчас перед специалистами стоят задачи по повышению надежности и репрезентативности методов диагностики, что во многом зависит от уровня информативности лабораторных методов исследования и расширения диагностических возможностей. Решение этих проблем позволит применить комплексный подход к лабораторной диагностике, контролю лечения, прогнозированию течения инфекций и внедрению масштабного тестирования отдельных групп населения на ряд инфекций микоплазменной природы. Большой популярностью в лабораторной практике пользуется иммуноферментный анализ, в основе которого лежит образование комплекса антигенантитело на твердой фазе полистироловых планшет и дальнейшая регистрация ферментной метки , . ИФА является универсальным методом и позволяет выявлять в сыворотке крови и в других биосубстратах специфические антитела различных классов и субклассов чаще всего определяют антитела классов I и I. В последние годы появились тестсистемы, предназначенные для определения антигенов различных видов микроорганизмов. По чувствительности ИФА уступает лишь ПЦР, широкое использование которой раничивает необходимость иметь специальное оборудование. На сегодняшний день в России нет зарегистрированных диагностикумов на основе ИФА для выявления микоплазменных антигенов в клиническом материале. Для дифференциальной диагностики инфекций респираторного тракта фирма I Германия предлагает иммуноферментную тестсистему I i , построенную по принципу сэндвича, для выявления антигенов . А и В и респираторного синтициального вируса в клиническом материале. В г. i . i i Швеция для выявления антигенов М. Публикации о диагностике инфекций, обусловленных . ИФА отсутствуют как в зарубежных, так и в отечественных литературных источниках. Представленные данные свидетельствуют о необходимости разработки отечественных тестсистем на основе иммуиоферментного анализа для выявления антигенов микоплазм у больных с респираторными и урогенитальными инфекциями с целью верификации этиологического диагноза. Цель исследования разработка иммуноферментных тестсистем для выявления антигенов микоплазм в клиническом материале от больных с респираторными и урогенитальными заболеваниями человека. М. i и М. Разработать иммуноферментные тестсистемы для выявления антигенов М. М. ii в ИФА и дать оценку их специфичности и чувствительности. Апробировать тестсистемы на клиническом материале, полученном от больных с респираторными и урогенитальными микоплазменными инфекциями. Определить условия выявления в ИФА антигенов М. М. ii в составе циркулирующих иммунных комплексов ЦИК в пробах сыворотки крови. Дать электрофоретическую характеристику антигенов М. М. ii с помощью Вестернблот анализа. Провести иммуноблоттинг в пробах сыворотки крови для подтверждения специфичности обнаружения в ИФА антигенов М. М. ii в свободном состоянии и в составе ЦИК. Получены высокоактивные гипериммунные сыворотки к М. М. ii путем иммунизации кроликов фракциями цитоплазматических мембран клеток микоплазм. Антитела, выделенные из иммунных сывороток, были использованы для создания диагностических тестсистем на основе ИФА для определения антигенов М. М. ii в свободном состоянии и в составе ЦИК в сыворотках крови больных с заболеваниями респираторного и урогенитального тракта.