Экспериментальное обоснование, конструирование и оценка видоспецифической иммуноферментной тест-системы для определения иммуноглобулинов класса G к Chlamydia trachomatis

• Автор: Есаев, Артем Леонидович
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Пермь
• Количество страниц: 133 с. : ил

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Классификации хламидий.

1.2. Общая характеристика хламидий

1.3. Клиника и эпидемиология хламидийных инфекций.

1.4. Методы лабораторной диагностики урогенитальных хламидиозов.

1.5. Антигенная структура наружной мембраны . i

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы

2.2. Методы.

2.2.1. Биологические методы.

2.2.2. Серологические методы
2.2.3. Физикохимические методы.
2.2.4. Физические методы
2.2.5. Статистические методы
ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА МЕТОДА ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЦЕНКА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ РАСТВОРИМЫХ АНТИГЕНОВ
. I
ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА ПРИРОДНОЮ ВИДОСПЕЦИФИЧЕСКОГО АНТИГЕНА . I
4.1. Изучение фосфолипидного состава природного видоспецифического антигена . i.
4.2. Изучение углеводного состава природного видоспецнфнческого антигена . i.
4.3. Определение содержание аминокислот в составе природного видоспецнфнческого антигена . i
4.4. Изучение фракционного состава белков природного видоспецнфнческого антигена . i
ГЛАВА 5. КОНСТРУИРОВАНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТСИСТЕМЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИДОСПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ КЛАССА С
К . I
5.1. Изучение специфичности разрабатываемой нммуноферментной тестсистемы.
5.2. Оценка чувствительности и специфичности первоначального варианта нммуноферментной тестсистемы с помощью сывороток стандартной панели ОСО 3 ГИСК им. Л.А. Тарасевича серия 2.
5.3. Совершенствование комплектации нммуноферментной тестсистемы и методики проведения иммуноферментного анализа.
5.4. Разработка критериев полуколичсственной оценки активности исследуемых сывороток в иммуноферментном анализе
5.5. Материалы по эксперименталыюклнническон оценке
видоспецифической нммуноферментной тестсистемы Хламивид .
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ЗППП заболевания передающиеся половым путем
ИВ индекс видоспецифичности
ИФА иммуноферментный анализ
ИФТС иммуноферментная тестсистема
ЛЦР лигазная цепная реакция
НИФ непрямая иммунофлуорисценция
ОП оптическая плотность.
ПААГ полиакриламидный гель
ПИФ прямая иммунофлуорисценция
ПЦР полимеразная цепная реакция
РНГА реакция непрямой геммаглютинации
РНИФ реакция непрямой иммунофлуорисценции
РСК реакция связывания комплемента
РТ ретикулярные хламидийные тельца
УХ урогенитальный хламидиоз
ЭТ элементарные хламидийные тельца
СОМС комплекс структур наружной мембраны хламидий
белки богатые цистеином
липополисахарид
МОМР основной белок наружной мембраны хламидий
ОМР2 белок наружной мембраны
ОМРЗ белок наружной мембраны
ошрА ген кодирующий основной белок наружной мембраны хламидий лаурилсаркозинат натрия
додецилсульфат натрия
VI, VII, VIII, VIV вариабельные домены основного белка наружной мембранных хламидий
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


В то же время, учитывая возможность перекрестных реакций, связанных с присутствием в сыворотках больных специфических антител к различным видам хламидий, для определения этиологической обусловленности заболевания возникает необходимость видоспецифической дифференциации иммунного ответа , . При разработке последних в качестве сенситина твердой фазы обычно используют различные синтетические или рекомбинантные варианты видоспецифических хламидийных антигенов. Однако искусственно полученные видоспецифическис антигены, повидимому, не могут содержать в полной мере весь спектр видоспецифических антигенных детерминант хламидий 4, 5. Данное обстоятельство, несомненно, неблагоприятно отражается на диагностической эффективности таких тестсистем. Цель настоящего исследования конструирование и оценка видоспецифической иммуноферментной тестсистемы для определения иммуноглобулинов класса к . Разработать метод получения природного видоспецифического антигена из овокультуры . Изучить специфическую активность выделенного антигена и выяснить его химическую природу. Изучить чувствительность, специфичность, диагностическую ценность иммуноферментной тестсистемы, сконструированной на основе альтернативного варианта природного хламидийного видоспецифического антигена. Научная новизна. Разработан способ получения природного видоспецифического антигена из овокультуры . Показано, что приготовленный антиген . Да и двумя минорными фракциями с молекулярной массой кДа, а также фосфолипидами фосфатидилинозитом, фосфатидилэтаноламином и фосфатидилсерином. Установлено, что полученный по разработанному способу антиген С. Впервые на основе полученного природного видоснецифического антигена . Теоретическое и практическое значение работы. Полученные данные расширяют представление о методологических подходах к изучению антигенной структуры С. Сконструирована иммуноферментная тестсистема Хламивид, являющаяся эффективным тестом для выявления видоспецифических иммуноглобулинов класса к . На иммуноферментную тестсистему Хламивид разработана Нормативнотехническая документация, одобренная Научнотехническим советом ФГУП Пермское НПО Биомед. Материалы диссертации внедрены в практику ФГУП Пермское НПО Биомед для оценки уровня хламидийных антител в нормальном донорском иммуноглобулине, а также в учебный процесс на кафедре микробиологии и факультете усовершенствования подготовки врачей Пермской медицинской академии. Метод обработки анионными детергентами и простым эфиром моносахарида инактивированной очищенной взвеси овокультуры . Приготовленный антиген . Да и двумя минорными белковыми фракциями с молекулярной массой кДа, а также фосфолипидами фосфатидилинозитом, фосфатидилэтаноламином и фосфатидилсерином. Иммуноферментная тестсистема Хламивид для определения иммуноглобулинов класса , созданная на основе полученного природного видоспецифического антигена С. Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Всероссийской научной конференции, посвященной летию Уфимского НИИВС им. И.И. Мечникова ГУП Иммунопрепарат, Пленарном заседании Пермского филиала Всероссийского общества микробиологов, эпидемиологов и паразитологов, Международной научной конференции Перспективы развития естественных наук в высшей школе, Пермь, . Диссертация апробирована на расширенном заседании Научнотехнического совета ФГУП Пермское НПО Биомед. По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ. Объем и структура диссертации. Работа изложена на 1 страницах машинописного текста, содержит таблиц и 7 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора данных литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав экспериментальных исследований, заключения, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 1 литературный источник, из них 8 отечественных и иностранных авторов. Диссертационная работа выполнена лично автором номер государственной регистрации . НИР ПИИ вакцин и сывороток ФГУП М3 РФ Пермское НПО Биомед, на базе научно производственной лаборатории хламидийных препаратов зав. О.А. Тимашева.