Закономерности проявления триацилглицероллипазной активности у холерных вибрионов

• Автор: Агафонова, Виктория Владиславовна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Ростов-на-Дону
• Количество страниц: 197 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ. Актуальность проблемы.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Липазы. Классификация, распространение липаз в природе

1.2. Механизм действия, субстратная специфичность и некоторые физикохимические свойства липаз микроорганизмов.

1.3. Методические подходы изучения лнпазной активности

микроорганизмов

1.4. Гемолитическая и липазная активность холерных вибрионов

СОБСТЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Микроорганизмы, используемые в работе

2.2. Коммерческие препараты, химические реактивы
2.3. Питательные среды
2.4. Сыворотки
2.5. Методы
2.5.1. Бактериологические методы
2.5.1.1. Метод определения гемолитической активности
2.5.1.2. Метод выявления триациглицероллиназной и гидролазной активностей .
2.5.2. Серологические методы
2.5.2.1. Реакция агглютинации
2.5.2.2. Реакция агломерации объмная РАО
2.6. Получение иммунных сывороток к липазе .,
их характеристика.
2.6.1. Количественное определение белка в сыворотках и иммуноглобулинах.
2.6.2. Диффузная иммунопреципитация по Оухтерлони.
2.6.3. Метод постановки иммуноблотингаГ
2.6.4. Метод выделении иммуноглобулинов из сывороток.
2.6.5. Конструирование иммуноглобулиновых диагностических
антилипазных препаратов
2.7. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3 СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ИММУННЫХ СЫВОРОТОК К ЛИПАЗЕ ., ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИМЕРНОГО АНТИЛИПАЗНОГО ДИАГНОСТИКУМА
ПРИ ИЗУЧЕНИИ ПРОДУКЦИИ ЛИПАЗЫ
У ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ В РАО.
3.1. Получение иммунных сывороток к липазе ., схемы иммунизации животных
3.2. Характеристика сывороток по белку .
3.3. Изучение специфичности сывороток в реакции преципитации
3.4. Изучение чувствительности сывороток в иммуноблотинге
3.5. Изучение чувствительности диагностических препаратов, сконструированных на основе иммуноглобулинов
к липазе .
3.6. Лиофнлизация диагностических препаратов.
ГЛАВА 4 ИЗУЧЕНИЕ СПОСОБНОСТИ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ РАЗНЫХ БИОВАРОВ И СЕРОГРУПП ПРОДУЦИРОВАТЬ ЛИПАЗУ, ВЫЯВЛЯЕМУЮ В РЕАКЦИИ АГЛОМЕРАЦИИ РАО
4.1. Выявление продукции липазы у штаммов холерных вибрионов
серогрунпы биовара эльтор.
4.2. Изучение способности к продукции липазы у штаммов холерных вибрионов классического биовара.
4.3. Выявление продукции липазы у штаммов холерных вибрионов серогрупны различного происхождения
4.4. Выявление липазы у штаммов холерных вибрионов не не серогрупп с различными генетическими характеристиками
ГЛАВА 5 ИЗУЧЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МЕТОДА
РАО С АНТИЛИПАЗИЫМ ДИАГНОСТИКУМОМ НА ЭТАПЕ ВЫДЕЛЕНИЯ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ
5.1. Зависимость продукции липазы холерными вибрионами от условий культивировании штаммов
5.2. Определение специфичности метода РАО с использованием иммуноглобулинового лнтилипазцого диагностпкума.
5.2.1 Выявление липазы, гомологичной липазе . и холерных вибрионов эльтор, у представителей рода Vii.
5.2.2. Выявление липазы, гомологичной липазе . и холерных вибрионов эльтор, у представителей семейства i
5.3. Изучение возможности нрименсни метода РАО с полимерным иммуноглобулиновым антилипазным диагностикумом в схеме идентификации холерных вибрионов
ГЛАВА 6 ВЫЯВЛЕНИЕ ЛИПАЗНОЙ АКТИВНОСТИ ХОЛЕРНЫХ
ВИБРИОНОВ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИМ МЕТОДОМ НА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ С ДОБАВЛЕНИЕМ РАЗЛИЧНЫХ
ЖИРОВ И ГЛ ИЦЕН РИН А.
6.1. Изучение липазной активности холерных вибрионов серогруппы бповара эльтор бактериологическим методом.
6.2. Изучение липазной активности холерных вибрионов серогруппы классического биовара на питательных средах.
6.3. Изучение липазной активности холерных вибрионов серогруипы, выделенных из различных источников,
бактериологическим методом.
6.4. Изучение гидролизной активности холерных вибрионов и серогрупп по отношению к глицерину
6.5. Изучение липазной активности холерных вибрионов не не
серогрупп с различными генетическими характеристиками бактериологическим методом.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В РАБОТЕ ГКПБМ Государственная коллекция патогенных бактерий Российского научноисследовательского противочумного института Микроб, г. Саратов ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота ЛПС липополисахарид м.к. микробная клетка ПЦР полимеразная цепная реакция асе ген, кодирующий xi. сх ген холерного токсина СТ холерный экзотоксин ген токсинкоррегулируемых пилей x, x гены кассеты вирулентности МуА ген гемолизина МуВ ген метилакцептирующего фактора 1ес ген лецитиназы
iА ген триацилглицеролииазы холерных вибрионов
i липаза холерных вибрионов
РАО реакция агломерации объмная
НКС норматьная кроличья сыворотка
ООС объекты окружающей среды
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Гемолитические холерные вибрионы не не различных серогрупп способны продуцировать липазу, гомологичную липазе . РАО, а также проявлять триацилгидролазную активность при культивировании штаммов на питательной среде с жирами и глицерином. Апробация работы. Результаты исследований были представлены на научных конференциях Проблемная комиссия Холера и патогенные для человека вибрионы, РостовнаДону, гг. Всероссийская научнопрактическая конференция Медицинская микробиология XXI век, Сара, тов, г. IV Межвузовская международная конференция Обмен веществ при адаптации и повреждении, РостовнаДону, г. СНГ Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении и санитарная охрана территорий государствучастников СНГ, Оболенск, г. Научнопрактическая конференция Современные аспекты эпидемиологаческого надзора за особо опасными инфекционными заболеваниями на юге России, Ставрополь, г. IX съезд Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, Москва, г. Международная конференция Vii , Париж, VII Межвузовская международная конференция с международ. Обмен веществ при адаптации и повреждении, РостовнаДону, г. IX Межгосударственная научнопрактическая конференция государствучастников СНГ Современные технологии в реализации глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями на территории государствучастников СНГ, Волгоград, г Получены акты внедрения в лабораторную практику разработанного антилипазного диагностического препарата от ФГУЗ ЦГиЭ Свердловской обл. ФГУЗ Иркутский ПЧИ Сибири и Дальнего Востока Роспотребнадзора ФГУЗ Г1ЧЦ Роспотребнадзора. План диссертационной работы одобрен Ученым советом Ростовского НИПЧИ и утвержден директором института протокол 3. Исследования выполнены в рамках плановых научных тем . Триацилглицероллипазная активность холерных вибрионов . Публикации результатов исследований. Инструкция по изготовлению и контролю. План диссертационной работы утверждн на заседании Ученого совета ФГУЗ РостНИПЧИ Роспотребнадзора протокол 3. Исследования выполнены в рамках плановых научных тем . Триацилглицероллипазная активность холерных вибрионов . Структура работы. Диссертация изложена на 7 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4х глав результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего 6 работ отечественных и 4 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована таблицами и рисунком. Липазы. Липолитические ферменты играют исключительно важную роль в обмене липидов всех живых организмов. В самом организме, они участвуют в процессах отложения и мобилизации жира, используемого в качестве энергетического резерва клетки кроме того, включаясь в метаболизм внутриклеточных липидол, они принимают участие в функционировании биологических мембран. Часто липолитические ферменты находят там, где их роль не так очевидна, например, в яде рептилий и беспозвоночных, а также среди внеклеточных ферментов микроорганизмов. Липидный обмен микроорганизмов область обширных и перспективных исследований, только недавно привлекла к себе внимание специалистов, изучающих физиологию и биохимию микробов. Липолитическими ферментами называют гидролазы эфиров жирных кислот с длинной цепыо, где под жирными кислотами с длинной цепью подразумеваются насыщенные или ненасыщенные алифатические кислоты, содержащие не менее атомов углерода. По спиртовым группам эфиров липолитические ферменты могут делиться на гидролизующие эфиры глицерина липазы, производные глицерина фосфолипазы 1 и 2, лизофосфолипаза, галактолипаза, стерола холестеринэстераза. Кроме гидролиза природных эфиров, являющихся физиологическими субстратами, многие липолитические ферменты могут гидролизовать искусственные эфиры со строением совершенно непохожими на естественные структуры. По классификации, рекомендованной Международным биохимическим союзом, все липолитические ферменты относят к классу гидролаз класс 3. За исключением гликозидаз все липолитические ферменты являются гидролизами эфиров, т. I гидролаз эфиров карбоновых кислот КФ 3.