Характеристика биологических свойств атипичных штаммов сибиреязвенного микроба, усовершенствование методов их идентификации и дифференцирования от близкородственных бацилл

• Автор: Рязанова, Алла Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Ростов-на-Дону
• Количество страниц: 0 с. : 196 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современная характеристика В. i и

близкородственных бацилл

.2, Атипичные штаммы В. i

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

2.1.1. Бактериальные штаммы и бактериофаги

2.1.2. Экспериментальные животные

2.1.3. Химические реактивы и питательные среды
2.1.4. Праймеры для ПЦР
2.1.3. Оборудование
2.2. Методы
2.2.1. Фенотипические тесты
2.2.2. Метод сочетанного определения продукции токсина и капсулы i vi
2.2.3. Метод определения гемолитической и
протеолитической активности
2.2.4. Метод выявления дополнительных питательных потребностей сибиреязвенного микроба
2.2.5. Метод экстракции ДНК сибиреязвенного микроба
и близкородственных бацилл рода i
2.2.6. Метод полимеразной цепной реакции
2.2.7. Методы статистической обработки ГЛАВА 3. АНАЛИЗ РАСПРОСТРАНЕННОСТИ АТИПИЧНЫХ
ШТАММОВ В. I, ВЫДЕЛЕННЫХ В ПРИГОДНЫХ УСЛОВИЯХ
3.1. Результаты идентификации штаммов, проведенной в лаборатории сибирской язвы Ставропольского научноисследовательского противочумного института в период гг.
3.2. Распространенность атипичных штаммов сибиреязвенного микроба, выделенных в природных условиях
3.3. Характеристика штаммов, ошибочно идентифицированных как В. i выделившими их учреждениями
ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ФЕНОТИПИЧЕСКИХ СВОЙСТВ АТИПИЧНЫХ ШТАММОВ В. I И Б ЛЮКОРОДСТВЕННЫХ БАЦИЛЛ ГРУППЫ I
4.1. Сравнительная характеристика основных биологических свойств типичных и атипичных штаммов сибиреязвенного микроба
4.2. Сравнительная характеристика фенотипических свойств типичных и атипичных штаммов сибиреязвенного микроба с использованием дополнительных тестов
4.3. Сравнительное изучение биологических свойств атипичных штаммов возбудителя сибирской язвы и близкородственных бацилл
ГЛАВА 5. МОЛЕКУЛЯРНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ШТАММОВ В I И БЛИЗКОРОДСТВЕННЫХ БАЦИЛЛ
5.1. Сравнительная характеристика штаммов В. i и близкородственных бацилл по результатам идентификационных генетических тестов
5.2. Результаты проведения внутривидовой дифференциации атипичных штаммов В апгЬгааз и близкородственных бацилл с использованием генетических
маркеров
5.3. Геяетическое тширование штаммов В. аЫЪгасй
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ


Для атипичных штаммов возбудителя сибирской язвы, помимо праймеров к плазмидным генам, специфичными являются праймеры к хромосомным последовательностям слоя и бактериофагосвязывающему локусу Е4 при подборе оптимальной концентрации праймеров. Использование праймеров к бактериофагосвязывающему локусу в одной амплификационной смеси с праймерами к последовательностям сарС рХ и суа X дает возможность применять этот набор в качестве варианта мультиплексной ПЦР для идентификации штаммов сибиреязвенного микроба с любым набором плазмид и дифференциации от близкородственных бацилл. Праймеры к локусу v, а также 8ми локусный V могут быть использованы как для генетического типирования штаммов В. Кавказе. Итоги и перспективы Ставрополь, , на научнопрактическом симпозиуме Технологии генодиагностики в практическом здравоохранении Москва, , на 4й и 5й Всероссийских научнопрактических конференциях Генодиагностика инфекционных заболеваний Москва, , на юбилейной конференции, посвященный летик НИИ Микробиологии МОРФ Киров. Актуальные проблемы медицины Томск, , на VI Межгосударственной научнопрактической конференции государствучастников СНГ Санитарная охрана территорий государствучастников содружества независимых государств проблемы биологической безопасности и противодействия биотерроризму в современных условиях, Волгоград, , на VII Межгосударственной научнопрактической конференции государствучастников СНГ Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении в решениях санктпетербургского саммита группы восьми и санитарная охрана территорий государствучастников содружества независимых государств Оболенск, . Материалы диссертации обсуждены и одобрены на межлабораторной конференции СтавНИПЧИ июня г. Основное содержание диссертации отражено в опубликованных работах. Работа изложена на 6 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы. Материалы иллюстрированы рисунками и таблицами. ГЛАВА I. Современная характеристика В. В последнее время В i. В i , , а также психротолерантный микроб i iii . Все представители группы . В отличие от В. В iii, изоляты В. Основными факторами патогенности возбудителя сибирской язвы являются экзотоксины и капсула. На плазмиде рХ 2 т. ПА, отечного фактора ОФ и летального фактора ЛФ, которые являются составляющими двух бинарных экзотоксинов отечного ПАОФ и летального ПАЛФ. Синтез капсулы сибиреязвенного микроба, представленного полиОглутаминовой кислотой, кодируется генами сарВ, сарС, сарА, сарО, локализованными на плазмиде рХ т. Р. . I. . Пептидогликан или муреин является полимером аминосахаров, перекрестно связанных полипептидами. Экзоскелет пептидогликана окружает плазматическую мембрану, обеспечивая клеточную целостность в гипоосмотических условиях, а также поддерживает форму клетки i . Н., . Сеть пептидогликана постоянно подвергается изменениям добавлению нового и лизису старого материала i . V., . Для правильной корректировки состава клеточной стенки необходимы ферменты, обладающие гидролитической активностью пептидогликана, которые в зависимости от специфичности субстрата классифицируются на ацетилмурамидазы, ацетилглюкозамидазы, ЫацетилмурамоилЬаланин амидазы или эндопептидазы . Функциональный избыток пептидаз делает их изучение затруднительным. Но не все вышеперечисленные гидролазы пептидогликана могут взаимодействовать с высокомолекулярным полимером и вызывать бактсриолизис. Предполагается, что у спорообразующих бактерий аутолизины принимают участие в различных фундаментальных фазах жизненного цикла бактериальной клетки клеточном делении, созревании пептидогликана, лизисе материнской клетки i . Действие некоторых аутолизинов связано с вирулентностью они принимают участие в адгезии и усилении воспалительного ответа организма хозяина при освобождении пептидов мурамила ii Е. В отличие от других протеаз пептидогликана, i, гидролизующий связь между гликаном и пептидом, не усиливает воспалительный ответ, а даже его уменьшает, что дает возможность В i активно размножаться до формирования в организме хозяина иммунного ответа. Последовательность плазмиды рХ В. Х, потенциально кодирующий синтез i и названный i А.