Совершенствование методов контроля специфической активности пробиотиков

• Автор: Арчакова, Елена Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Пермь
• Количество страниц: 154 с. : 5 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Введение

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1. Дисбиотические состояния и способы их коррекции, методы определения антагонистической активности пробиотиков
1.2. Питательные потребности производственных штаммов бактерий для получения пробиотических препаратов.

1.3. Феномен биолюминесценции, люминесцентные

микробиотесты и сфера их применения.

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования.

ГЛАВА 3. Унификация набора питательных сред для определения параметров специфической активности препаратов.

3.1. Получение и физикохимические параметры сывороточнодрожжевой питательной основы

3.2. Изучение ростовых свойств полужидких вариантов среды

3.2.1. Использование полужидких вариантов среды СД при определении количества жизнеспособных бифидобактерий в
дозе препарата
3.2.2. Использование полужидких вариантов среды СД при определении количества жизнеспособных лактобактерий в
дозе препарата
3.3. Изучение ростовых свойств плотных вариантов среды СД
3.4. Использование жидкого варианта среды СД в тесте определения активности кислотообразования пробиотиков
ГЛАВА 4. Оптимизация теста отсроченного антагонизма на
плотной питательной среде
4.1. Изучение изо, гомо и гетероантагонизма колибактерина и бификола на различных плотных питательных средах
4.2. Изучение изо, гомо и гетероантагонизма лактобактерина
на различных плотных питательных средах.
4.3. Изучение изо, гомо и гетероантагонизма ацилакта на различных плотных питательных средах.
ГЛАВА 5. Определение антагонистической активности пробиотиков с помощью теста ингибирования биолюминесценции
5.1. Определение чувствительности штамма . i С в
тесте отсроченного антагонизма на плотной питательной среде
5.2. Определение влияния пробиотиков на биолюминесценцию рекомбинантного тестштамма.
5.2.1. Опрехеление ИАА лактобактерина.
5.2.2. Определение ИАА бифидумбактерина
5.2.3. Определение ИАА ацилакта
5.2.4. Определение ИАА колибактерина.
5.2.5. Определение ИАА бификола
5.3. Разработка критериев оценки теста ингибирования биолюминесценции для определения уровня антагонистической активности пробиотиков.
Заключение
Выводы.
Список литературы


В норме состав микрофлоры кишечника относительно постоянен и представляет собой сбалансированную микроэкологическую систему, сложившуюся в процессе филогенетического развития человека. Макроорганизм и его микрофлора находятся в состоянии динамического равновесия. Доминирующей группой, характерной для эубиоза здоровых взрослых людей, являются бесспоровые анаэробные бактерии бифидобактерии, бактероиды и др. Аэробные и условноаэробные бактерии, представленные кишечными палочками, стрептококками, лактобациллами, энтерококками составляют в сумме 5 , , 0, 4, 6. Главной из функций нормофлоры является защитное действие от инфекции извне, обеспечивающее подавление колонизации открытых полостей организма возбудителями и ингибицию транслокации микробов во внутренние органы и ткани хозяина , 9, 5, 8. Продукты жизнедеятельности бифидобактерий, лактобацилл, энтерококков и некоторых других способствуют всасыванию кальция, железа, воды, газов, витамина , участвуют в нейтрализации нитратов, ксенобиотиков экзогенного происхождения, подавлении образования токсичных продуктов белкового обмена , 4. Регуляторная роль бактериальной флоры выходит далеко за пределы ЖКТ. Она участвует в синтезе большого спектра гормонов и биологически активных веществ, препятствует повышению количества гистамина . Хорошо известна важная роль нормофлоры в обеспечении антианемического, атттирахитического, антпаллергического, антихолестеринемического, антимутагенного, антиканцерогенного действия 0, 4, 3, 0, 5. Нормофлора способна воздействовать на различные звенья иммунной системы, регулировать число Влимфоцитов и антительный ответ, стимулировать образование А, который активно участвует в местном иммунитете и играет большую роль в обеспечении колонизационной резистентности слизистых оболочек 1. Нормальная кишечная микрофлора активирует фагоцитоз, обеспечивает потенцирование продукции интерфероиов, цитокинов, лизоцима активных регуляторных участников реакций иммунного ответа , 5, 5, 7, 8, 9. Кишечная микрофлора относительно устойчива к влиянию различных факторов внешней среды, но ее компенсаторные возможности небеспредельны. При появлении сильных или длительных неблагоприятных для ее существования условий происходят нарушения состава микрофлоры. Дисбактериоз кишечника это изменение количественных соотношений и состава нормальной микрофлоры кишечника, характеризующееся уменьшением количества или исчезновением обычно составляющих ес микроорганизмов, подавлением и доминированием атипичных, редко встречающихся или не свойственных ей микроорганизмов. Известно, что практически любая патология у человека сопровождается нарушением состава микрофлоры и возникновением дисбактериозов 1, 4. Латентные и легкие формы дисбиозов часто развиваются при длительном неполноценном или несбалансированном питании с приоритетом какихлибо веществ, длительном парентеральном питании, голодании, неправильном режиме питания 5, 9. Хронические заболевания, нарушения функций органов пищеварения, различные кишечные инфекции также ведут к развитию кишечного дисбактериоза , 7, 2, 7, 2. Нарушения иммунного статуса, физический и психический стрессы, нарушения экологии, ионизирующая радиация могут приводить к активации условнопатогенной микрофлоры, появлению устойчивых к антибиотикам энтеробактерий, снижению числа бифидо и лактобактерий, колициногенных штаммов эшерихий 2, 6, , , , , 4. По мере развития дисбактериоза сначала происходит уменьшение, а затем и исчезновение полезной микрофлоры с соответствующим снижением или выпадением ее функций. Освободившуюся экологическую нишу заполняют патогенные и условнопатогенные микробы. Происходят нарушения в системе местного и общего иммунитета 5, 1. Снижается антиинфекционная резистентность организма, включаются аутоиммунные механизмы, меняется местный иммунный ответ на бактериальные антигены, пищевые белки и полисахариды, возникает дефицит ряда витаминов и минеральных веществ, подавляется нормальное течение таких процессов, как регенерация, кишечная проницаемость, всасывание и целый ряд других 2, 8. Целью лечения дисбактериоза является восстановление микроэкологии кишечника 9, , , 7, 2, 8.