Система анализа микробиологических и молекулярно-генетических маркеров для выявления высоковирулентных штаммов Listeria monocytogenes

• Автор: Зайцева, Елена Александровна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 270 с. : 29 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ЛИСТЕРИОЗЕ

1.1. Краткий исторический очерк изучения возбудителя листериоза

1.2. Экологоэпидемические аспекты листериоза

1.3. Микробиология листериоза

1.4. Факторы патогенности Ь.топосуюепея и их участие в развитии инфекционного процесса
1.4.1. Факторы патогенности Ь.топосуЮепез, участвующие в адгезии, инвазии эукариотических клеток и внутриклеточном выживании

1.4.2. Продукция бактериальных экзоферментов и их вклад в инфекционный процесс

1.5. Молекулярногенетическая организация листерий

1.6. Клиникопатогенетические особенности листериоза
1.6.1. Патогенез листериозной инфекции
1.6.2. Клинические варианты листериозной инфекции
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.1.1. Материал
2.1.2. Микроорганизмы
2.1.3 Животные
2.1.4. Среды для культивирования и идентификации бактерий
2.1.5. Аппаратура
2.2. Методы исследования
2.2.1. Микробиологические методы
2.2.2. Молекулярногенетические методы
2.2.3. Статистические методы
ГЛАВА 3. БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЛИСТЕРИЙ, ИЗОЛИРОВАННЫХ НА ДАЛЬНЕМ ВОСТОКЕ
3.1. Подбор оптимальных питательных сред, схемы выделения, культивирования и изучения биологических свойств листерий
3.2. Микробиологическая характеристика листерий, изолированных в Дальневосточном регионе
3.2.1. Микробиологическая характеристика листерий, изолированных из биотических объектов
3.2.2. Микробиологическая характеристика листерий, изолированных из абиотических объектов
3.3.Сравнительный анализ микробиологических свойств ., изолированных на Дальнем Востоке и в Европейской части России
3.4. Факторы патогенности у ., выделенных на Дальнем Востоке
3.5. Гены патогенности у . , выделенных на Дальнем Востоке
3.6. Сравнительный анализ патогенных свойств ., выделенных на Дальнем Востоке и в Европейской части России
3.7. Антибиотикорезистентность культур ., выделенных в различных регионах России Дальнем Востоке и Европейской части
ГЛАВА 4. ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ВАРИАБЕЛЬНОСТЬ ШТАММОВ ., ИЗОЛИРОВАННЫХ НА ДАЛЬНЕМ ВОСТОКЕ РОССИИ
4.1. Спектр генов, кодирующих белки интерналины у .
4.2. Полиморфизм гена общего метаболизма у .
4.3. Сравнительный анализ полиморфизма генов, кодирующих белки
интерналины i, i, i, i, и гена у штаммов ., изолированных в Дальневосточном регионе и в Европейской части России
4.3.1. Структура гена ii В у дальневосточных изолятов .
ГЛАВА 5. ФИЛОГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПОПУЛЯЦИИ ., РАСПРОСТРАНЕННОЙ НА ДАЛЬНЕМ ВОСТОКЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
5.1. Серологическая принадлежность изолятов ., выделенных на Дальнем Востоке
5.2. Фаготипическая принадлежность штаммов .
5.3. Новая система типирования на основании полиморфизма пяти маркерных генов ii i I, i, i, для анализа филогенетического положения изолятов .
5.4. Анализ филогенетической принадлежности изолятов . в зависимости от региона и источника выделения
5.4.1. Анализ специфичности филогенетического положения изолятов . в зависимости от региона выделения
5.4.2. Анализ специфичности филогенетического положения изолятов . и распределения аллелей генов, кодирующих белкиинтерналины, в зависимости от источника выделения
5.4.3. Анализ аминокислотных замен у изолятов ., связанный с филогенетическим происхождением и источником выделения
5.5. Анализ филогенетического положения изолятов . , полученных от беременных женщин и мертворожденных плодов на Дальнем Востоке России
5.5.1. Филогенетическое разделение среди клинических изолятов .
5.5.2. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей
фрагментов генов ii , ii В и у изолягов .
5.5.3. Анализ вариабельности генов инвазии и гена общего метаболиз
ма у клинических изолятов внутри филогенетических линий
ГЛАВА 6. ВЛИЯНИЕ АБИОТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА ВИРУЛЕНТНОСТЬ ШТАММОВ
6.1. Изменение адгезивных свойств бактерий рода ii под влиянием абиотических факторов
6.1.1. Изменение адгезивных свойств листерий иод влияние температуры
6.1.2. Изменение адгезивных свойств листерий под влияние среды
6.1.3. Изменение адгезивных свойств листерий под влияние экзогенной
нуклеиновой кислоты
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ВНЕДРЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


По данным рабочей группы ВОЗ , заражение человека листериями происходит преимущественно алиментарным путем через различные продукты питания сыры, молоко, мясо, рыбу, овощи и т. В литературе описаны 4 крупные вспышки листериоза в мире в Новой Шотландии Канада, , Бостоне США, , ЛосАнджелесе США, и кантоне Во Швейцария, 9, 9, 6, 6. В Новой Шотландии, ЛосАнджелесе и кантоне Во была установлена эпидемиологическая связь вспышки листериоза, подтвержденной бактериологическими исследованиями, с определенным пищевым продуктом с шинкованной капустой, мягким сыром типа мексиканских сыров и сортом вашерин. Известно, что листерии обнаружены в молоке и молочных продуктах, мясе животных и птиц, овощах, салатах и морских продуктах. Ведущую роль среди них играют молочные продукты, главным образом непастеризованное или некачественно пастеризованное молоко и изготовленные из него мягкие и рассольные сыры , 1, 9, 1, 5. Установлено, что листерии лучше переживают пастеризацию при , и С в течение , , и мин в овечьем молоке, чем в коровьем или козьем. Доказано, что связано это с протективными свойствами жира овечьего молока 0,6. Из всех пищевых продуктов именно сыры чаще всего заражены листериями и представляют наибольшую опасность как фактор передачи инфекции для человека. Наиболее часто листерии выделяли из определенных видов сыров сыров с красной слизыо твердых сыров, особенно белых ноздреватых, покрытых красной оболочкой, и, так называемых, сыров с голубой плесенью 6, 1, 1. Возможно, что это обусловлено более высокими значениями названных сыров на последних стадиях их созревания. В мягких, а также в свежих рассольных сырах, в которых высокая концентрация хлорида натрия ингибирует полезную антагонистическую микрофлору, создается наиболее благоприятная среда для накопления листерии. Молочные продукты и большинство других продуктов питания могут заражаться . Например, имеются сообщения о заражении мороженого после его приготовления 0. К числу субстратов, способствующих поддержанию роста . Исследования различных видов овощей показали, что чаще листерии контаминируют картофель и редис. Известно, что . Среди выделенных из овощей культур . Интересно, что сырая морковь обладает ярко выраженной антилистериозной активностью, хотя токсичный для листерий фактор из нее не выделен 5. Кроме . Сливочное масло также может обеспечивать среду для сохранения и роста бактерий рода ii, включая . С 4. Если учесть, что многие млекопитающие и птицы выделяют . Чаще всего из мясных продуктов выделяют штаммы . Важно отметить, что домашние птицы не болеют листериозом. Но бройлеры могут быть носителями листерий в фециях и заражать подстилку, окружающую среду, других животных и людей , . В этом плане интересны исследования . С и даже увеличивают свою популяцию в желтке и цельном яйце 3. Если еще десятилетие назад говорили в основном об инфицировании микробом сырьевых продуктов, то в последнее время вызывают тревогу сообщения об обнаружении в вареных сосисках, сыровяленых и сырокопченых мясопродуктах, готовых к употреблению продуктах из птицы, полуфабрикатах для еды быстрого приготовления , 0, 4, 7, 2, 3. Проведенные недавно обследования показали, что . Живая рыба может заражаться патогенными листериями в местах естественного обитания в экологически неблагополучных районах, где сточные бытовые воды и стоки животноводческих ферм, содержащих листерии, сбрасываются без очистки непосредственно в районы вылова рыбы 3. Интересно сообщение . Финляндии после дождливых периодов. Ручьи, речные воды, а также вода после дождей были основными источниками загрязнения рыб на фермах. Разводимая рыба, у которой первоначально были выделены культуры . Тепловая обработка рыбного сырья позволяет освободить его от патогенных листерий. Однако при холодном копчении соль и коптильный раствор способствуют размножению листерий. Поэтому чаще всего . Причиной высокой степени зараженности конечной продукции коптильных производств является и вторичная контаминация рыбы на производстве в ходе технологического процесса . По данным .